人感染高致病性禽流感標(biāo)本采集及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)方案

附件2人感染高致病性禽流感標(biāo)本采集及試驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)方案類型的標(biāo)本，標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)室檢測(cè)程序和檢測(cè)方法，提高檢測(cè)質(zhì)量。采集對(duì)象一步爭(zhēng)論確實(shí)診病例。其它需要進(jìn)展人禽流感診斷或排解者。需要采集的環(huán)境標(biāo)本。采集要求從事人禽流感檢測(cè)標(biāo)本采集的技術(shù)人員必需經(jīng)過(guò)生物安全〔附件5〕規(guī)定的防護(hù)措施進(jìn)展安全防護(hù)。住院病例的標(biāo)本由所在醫(yī)院醫(yī)護(hù)人員在當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防把握機(jī)構(gòu)專業(yè)人員指導(dǎo)下采集。標(biāo)本采集具體種類和數(shù)量由現(xiàn)場(chǎng)工作組確定。親熱接觸者標(biāo)本由當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防把握機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)采集。依據(jù)試驗(yàn)室檢測(cè)工作的需要，結(jié)合病程再次采樣。標(biāo)本種類〔中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部令第43號(hào)〕本。3天內(nèi)。下呼吸道標(biāo)本：包括呼吸道抽取物、支氣管灌洗液活檢標(biāo)本。物安全防護(hù)的條件下，進(jìn)展尸檢，主要采集肺、氣管組織標(biāo)本1允許下也可采集肝、腎、脾、心臟、腦、淋巴結(jié)等組織標(biāo)本。復(fù)期雙份血清。第一份血清應(yīng)盡早〔7天內(nèi)〕采集，其次份血清應(yīng)在發(fā)病后第3～45ml，以空腹血為佳，建議使用真空采血管。有胸水者可采集胸水標(biāo)本。標(biāo)本采集方法咽拭子：用2根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子同時(shí)擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入含3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。鼻拭子：將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。3ml采樣液沖洗收集器1〔亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來(lái)替代收集器。10ml50ml無(wú)菌的螺口塑料管中。無(wú)條件的可用平皿或燒杯收集咽漱液并轉(zhuǎn)入10ml螺口采樣管中。50ml含3ml采樣液的螺口塑料管中?！?0c深處5m1次〔亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來(lái)替代收集。胸水:在B超定位下進(jìn)展胸腔穿刺，抽取胸水5ml，置于無(wú)菌2的塑料螺口管中。X線定位下,經(jīng)皮穿刺取肺組織活檢標(biāo)本,置于含3ml采樣液的塑料螺口管中。20～50g，淋巴結(jié)取2個(gè)。5～10g糞便置于含5～10ml采樣液無(wú)菌螺口管中，嚴(yán)格密封。5ml，室溫靜置30分鐘，1500～2023rpm離心102ml無(wú)菌螺口塑料管中。注：常用的采樣液配方為：pH7.4～7.6的Hanks氏液或MEM/DMEM液。在采樣液中需參與抗菌素，可用青霉素〔100U/m大霉素〔1mg/m〕和抗真菌藥物〔μg/m。標(biāo)本包裝標(biāo)本采集后在生物安全Ⅱ級(jí)試驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)分裝成一式三份〔分裝標(biāo)本的生物安全柜不能用于提取核酸。一份當(dāng)?shù)貦z測(cè)用，一份送中國(guó)疾病預(yù)防把握中心檢測(cè)，一份保存以備復(fù)核。全部標(biāo)本應(yīng)放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈料管里，擰緊。容器外注明樣本編號(hào)、種類、姓名及采樣日期。將密閉后的標(biāo)本放入大小適宜的塑料袋內(nèi)密封標(biāo)本。/不明緣由/不明緣由肺炎病例標(biāo)本送檢、接收、檢測(cè)和結(jié)果報(bào)告反響工作流程〔中疾控疾[2023]52號(hào)，用另一塑料袋密封。標(biāo)本保存用于病毒分別和核酸檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)展檢測(cè)2測(cè)的標(biāo)本可置于4-70℃或70204℃存放3天、-20℃以下長(zhǎng)期保存。標(biāo)本運(yùn)送期間應(yīng)避開(kāi)反復(fù)凍融應(yīng)設(shè)立專庫(kù)或?qū)９駟为?dú)保存。3標(biāo)本送檢上送標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性或可疑的原始標(biāo)本或分別物應(yīng)準(zhǔn)時(shí)送中國(guó)疾病預(yù)一步檢測(cè)。標(biāo)本運(yùn)送的生物安全要求依據(jù)《病原微生物試驗(yàn)室生物安全治理?xiàng)l例〔國(guó)務(wù)院424號(hào)令〕和《可感染人類的高致病性病原微生物菌〔毒〕種或樣本運(yùn)輸治理規(guī)〔45號(hào)令〕等有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。標(biāo)本送檢的程序性病原微生物菌〔毒〕種或樣本運(yùn)輸治理規(guī)定〔中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部第45號(hào)令/不明緣由肺炎病例標(biāo)[2023]526號(hào)。試驗(yàn)室生物安全從事人禽流感檢測(cè)的技術(shù)人員必需經(jīng)過(guò)生物安全培訓(xùn)和具備相標(biāo)本檢測(cè)生物安全級(jí)別要求如下。標(biāo)本的分裝和核酸提取在生物安全Ⅱ級(jí)試驗(yàn)室的生物安全安全柜內(nèi)進(jìn)展。標(biāo)本的抗原快速檢測(cè)在生物安全Ⅱ級(jí)試驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)進(jìn)展。行。承受滅活抗原進(jìn)展血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)血清抗體時(shí)在生物安全Ⅲ級(jí)試驗(yàn)室操作。4陽(yáng)性標(biāo)本和分別物的保存及銷毀應(yīng)依據(jù)生物安全治理?xiàng)l例〔國(guó)務(wù)院第424號(hào)令〕執(zhí)行。標(biāo)本的試驗(yàn)室檢測(cè)家流感中心或世界衛(wèi)生組織推舉的引物和探針。抗原快速檢測(cè)方法包括ELISA法和金標(biāo)法，本方法僅具參考價(jià)值，不作為診斷依據(jù)。病毒分別及鑒定：承受SPF雞胚和MDCK細(xì)胞分別方法。病毒的鑒定承受血凝抑制試驗(yàn)、神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)或序列測(cè)定。溶血試驗(yàn)。/人感染高致病性禽流感監(jiān)檢測(cè)結(jié)果的推斷和報(bào)告各檢測(cè)工程陽(yáng)性報(bào)告H5基因核酸檢測(cè)：A型特異性引物能夠擴(kuò)增出預(yù)期大小的產(chǎn)物，兩對(duì)H5亞型特異性引物都能夠擴(kuò)增出預(yù)期大小的產(chǎn)物。抗原快速檢測(cè)：依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)展檢測(cè)，結(jié)果推斷為陽(yáng)性。H5亞型或H5N1亞型。4倍或以上增高有診斷意義。各檢測(cè)工程陰性報(bào)告H5基因核酸檢測(cè)：兩對(duì)H5亞型特異性引物均不能夠擴(kuò)增出預(yù)期大小的產(chǎn)物。抗原快速檢測(cè)：依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)展檢測(cè)，結(jié)果推斷為陰性。病毒分別：培育物紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)陰性。血清學(xué)檢測(cè)：血清抗體滴度＜1:20為陰性。H5基因核酸檢測(cè)不全都5兩對(duì)H5亞型特異性引物擴(kuò)增出的產(chǎn)物檢測(cè)結(jié)果不全都時(shí)H5N1病毒序列，則推斷為陽(yáng)性。果反響表〔不明緣由肺炎病例標(biāo)本送檢、接收、檢測(cè)和結(jié)果報(bào)告反響工作流程》中疾控疾發(fā)[2023]526號(hào)。試驗(yàn)室檢測(cè)流程應(yīng)采集人禽流感檢測(cè)對(duì)象上呼吸道標(biāo)本和下呼吸道標(biāo)本進(jìn)展禽血清標(biāo)本進(jìn)展H5N1標(biāo)本送中國(guó)疾病預(yù)防把握中心復(fù)核進(jìn)一步檢測(cè)。具體步驟見(jiàn)人感染高致病性禽流感標(biāo)本試驗(yàn)室檢測(cè)流程圖。省疾病預(yù)防把握中心人禽流感試驗(yàn)室檢測(cè)職責(zé)對(duì)轄區(qū)內(nèi)人禽流感標(biāo)本的采集工作供給技術(shù)指導(dǎo)和物質(zhì)支持，必要時(shí)直接參與標(biāo)本的采集。依據(jù)生物安全要求，對(duì)采集到的標(biāo)本進(jìn)展禽流感病毒的核室才可開(kāi)展病毒分別和微量中和試驗(yàn)。依據(jù)生物安全要求妥當(dāng)保存原始標(biāo)本或禽流感病毒株。符合上送條件的標(biāo)本或毒株按規(guī)定準(zhǔn)時(shí)送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。準(zhǔn)時(shí)向省衛(wèi)生廳和中國(guó)疾病預(yù)防把握中心上報(bào)人禽流感檢測(cè)的相關(guān)信息。準(zhǔn)時(shí)向送檢標(biāo)本的機(jī)構(gòu)反響檢測(cè)結(jié)果。依據(jù)疫情的進(jìn)展和工作需要，向中國(guó)疾病預(yù)防把握中心申請(qǐng)指定轄區(qū)內(nèi)符合要求的國(guó)家級(jí)流感網(wǎng)絡(luò)試驗(yàn)室開(kāi)展相應(yīng)的人禽流感檢測(cè)工作。對(duì)市、州級(jí)疾病預(yù)防把握機(jī)構(gòu)試驗(yàn)室人員進(jìn)展試驗(yàn)室技術(shù)6和生物安全培訓(xùn)。對(duì)市、州級(jí)疾病預(yù)防把握機(jī)構(gòu)試驗(yàn)室供給技術(shù)和試劑支持并進(jìn)展質(zhì)量把握。對(duì)市、州級(jí)疾病預(yù)防把握機(jī)構(gòu)的試驗(yàn)室檢測(cè)和生物安全工作進(jìn)展督導(dǎo)。7人感染高致病性禽流感標(biāo)本試驗(yàn)室檢測(cè)流程圖標(biāo)