分光光度分析法輔導(dǎo)

關(guān)于分光光度分析法輔導(dǎo)第一頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日分析測試人員所從事某項(xiàng)技術(shù)工作的能力考核技術(shù)基礎(chǔ)儀器和操作標(biāo)準(zhǔn)方法與應(yīng)用數(shù)據(jù)處理書面考核書面考核書面考核試驗(yàn)結(jié)果考核操作考核現(xiàn)場考核正確使用正確結(jié)果第二頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日

紫外-可見分光光度分析基礎(chǔ)

前言分光光度法的特點(diǎn)分光光度分析的基本理論分光光度法分析條件的選擇分光光度法中主要顯色劑類型及其應(yīng)用※分光光度法的主要測定方式分光光度計(jì)的儀器原理和結(jié)構(gòu)分光光度計(jì)的儀器安裝和調(diào)試第三頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日前言

自然界中很多物質(zhì)都是有顏色的，它是因其對不同顏色的光的吸收或反射所產(chǎn)生。很多化合物在溶液中也常常具有不同的顏色，而且即使本身沒有顏色也會因其與某些試劑發(fā)生反應(yīng)而顯現(xiàn)顏色。同時(shí)這些顏色的深淺與物質(zhì)的濃度有關(guān)，因此人們便利用比較顏色深淺來測定物質(zhì)的含量。這就是古老的比色分析法。最初采用目視比色，接著出現(xiàn)了光度計(jì)，采用了光電比色法。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人們對物質(zhì)選擇性吸收不同波長光的深入研究，出現(xiàn)了各種類型、性能優(yōu)越的分光光度計(jì)和高靈敏顯色體系，發(fā)展成為目前廣為應(yīng)用的紫外-可見分光光度分析技術(shù)。

第四頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日分光光度法的特點(diǎn)

分光光度法是采用分光器(棱鏡或光柵)獲得純度較高的單色光，是基于物質(zhì)對單色光的選擇性吸收來測定物質(zhì)組分的分析方法。分光光度法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性較好、操作簡便、適用范圍廣、所需儀器簡單價(jià)廉等特點(diǎn)：

(1)靈敏度高，用于微量組分的測定，其濃度下限為10-5~10-6mol/L，測定下限可達(dá)10-3%~10-4%。第五頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日

(2)準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性較好，盡管準(zhǔn)確度不及滴定分析法和重量分析法，但精密測量,相對誤差可在1~2%,適合低含量成分測定。(3)操作簡便快速，該法主要包括試樣的溶解,被測組分的顯色和吸光度的測量三部分,一般可不經(jīng)分離直接測定。(4)適應(yīng)范圍廣，不僅能測定微量組分，也能測定含量較高的組分，例如采用差示分光光度法或光度滴定法等。(5)所需儀器簡單價(jià)廉，所采用的分光光度計(jì)是各實(shí)驗(yàn)室廣泛使用的儀器。第六頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日分光光度分析的基本理論

1、分光光度分析的原理

光是一種電磁波，具有波動性，能產(chǎn)生折射、衍射、偏振和干涉等現(xiàn)象(光波)。同時(shí)具有微粒性，能產(chǎn)生光電效應(yīng)(光子)?！绽士斯?理論上，將具有某一波長的光稱為單色光，由不同波長的光組成的光稱為復(fù)合光。人眼能產(chǎn)生顏色感覺的光區(qū)稱為可見光區(qū)，其波長范圍約為380～760nm。200～380nm范圍的光稱為近紫外光。第七頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日具有不同分子結(jié)構(gòu)的各種物質(zhì)，有對電磁輻射顯示選擇吸收的特性。有色物質(zhì)的溶液對不同波長的入射光線有不同程度的選擇性吸收。分光光度法就是基于這種物質(zhì)對電磁輻射的選擇性吸收的特性而建立起來分析法，屬于分子吸收光譜法。在冶金分析上廣為應(yīng)用的是紫外-可見分光光度法。碳硫分析屬于紅外吸收光譜法。第八頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日2、物質(zhì)的顏色和光的選擇性吸收普朗克公式

光子的能量E決定于光的頻率：

E＝h·＝h·c/

式中:E為光子能量,J；h為普朗克常數(shù)(6.626×10-34J·s)

分子吸收光譜形成中所吸收的能量與電磁輻射的頻率成正比，符合普朗克條件：E＝E2－E1＝h

＝h·c/

式中，為輻射頻率；c為光速；為波長。第九頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日當(dāng)分子吸收了外來輻射能之后,它的能量變化E,為其振動能變化(E振)、轉(zhuǎn)動能變化(E轉(zhuǎn))、電子運(yùn)動能量變化(△E電子)的總和，即：

E＝E振+E轉(zhuǎn)+E電子

其中：E電子最大，一般在1～10eV。若設(shè)E電子為5eV，相應(yīng)的吸收光譜中被吸收光波的波長應(yīng)該是：＝hc/E電子＝2.48×10-5cm＝248nm

因此，由于分子內(nèi)部電子能級變化而產(chǎn)生的光譜位于紫外區(qū)或可見區(qū)及紅外區(qū)內(nèi)。第十頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日3、光吸收的基本定律有色溶液對光的吸收程度，與該溶液的液層厚度、濃度以及入射光的強(qiáng)度等因素有關(guān)。第十一頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日朗伯-比爾定律—光吸收的基本定律如果保持入射光的強(qiáng)度不變，則光吸收程度(A)與液層厚度及溶液的濃度有關(guān)。其定量關(guān)系式為：

式中：I0為單色光通過待測溶液前的強(qiáng)度；I為單色光通過待測溶液后的強(qiáng)度；

K為吸光系數(shù),為一常數(shù)。其數(shù)值與溶液的性質(zhì)及入射光波長有關(guān)；

c為待測物質(zhì)的濃度；l為待測溶液的厚度第十二頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日上式:稱作朗伯-比爾定律，它是分光光度分析的定量基礎(chǔ)。這個(gè)關(guān)系式僅適用于單色光及均勻非散射的液體、固體和氣體。朗伯-比爾定律—是由表示液層厚度和光吸收關(guān)系的朗伯定律(A=lgI0/I=K1l)及表示溶液濃度與光吸收關(guān)系的比爾定律(A=lgI0/I=K2c)合并而得。第十三頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日分光光度分析是建立在朗伯-比爾定律關(guān)系式上，此時(shí)吸光度與濃度呈線性關(guān)系。但也有發(fā)生偏離情況，必須引起注意。在吸光光度分析中,導(dǎo)致偏離朗伯-比爾定律的原因很多，但基本上可分為物理和化學(xué)兩個(gè)方面。屬于物理原因的主要是入射光的單色性不純所造成的；屬于化學(xué)方面的主要是由于溶液本身化學(xué)變化所造成的。第十四頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日即導(dǎo)致偏離朗伯-比爾定律的原因多為：

a.單色光不純b.溶液本身引起的偏離

(1)溶質(zhì)和溶劑的性質(zhì)。(2)介質(zhì)不均勻性。(3)溶質(zhì)的離解、締合、互變異構(gòu)及化學(xué)變化。第十五頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日4、表征光度法靈敏度的參數(shù)

a、摩爾吸光系數(shù)()

—指當(dāng)有色物質(zhì)溶液濃度為1mol/L,液層厚度為1cm時(shí)的吸光度。其單位為:L/(mol·cm)即(mol/L)-1·cm-1。摩爾吸光系數(shù)是有色化合物的重要特性，也是鑒別光度法靈敏度的重要標(biāo)志。它與入射光的波長、溶液的性質(zhì)和溫度、儀器的質(zhì)量有關(guān),而與溶液的濃度和液層的厚度無關(guān)。在一定條件下它是一常數(shù),可以表明有色溶液對某一特定波長光的吸收能力。靈敏的光度法的摩爾吸光系數(shù)的值通常在104～105

第十六頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日b、質(zhì)量吸光系數(shù)(a)—是指吸光物質(zhì)濃度為1g/L時(shí)，在最大吸收波長處，光程為1cm時(shí)的吸光度,其單位為L/(g·cm)即(g/L)-1·cm-1。質(zhì)量吸光系數(shù)越大，反應(yīng)靈敏度越高。a與

的關(guān)系為：

單位表示：a—L/(g·cm)即(g/L)-1·cm-1

—L/(mol·cm)即(mol/L)-1·cm-1第十七頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日桑德爾(Sandell)靈敏度S：早期文獻(xiàn)對顯色反應(yīng)的靈敏度用桑德爾(Sandell)靈敏度表示。它的定義是：產(chǎn)生0.001的吸光變時(shí),單位截面積(cm2)的光程內(nèi)所含吸光物質(zhì)的微克數(shù),其單位是g/cm2。S值越小，顯色反應(yīng)的靈敏度越高。S與摩爾吸光系數(shù)的關(guān)系是:S＝M/

※光度法表示靈敏度的參數(shù)

以前還用另外兩種表征其靈敏度的參數(shù)第十八頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日早期文獻(xiàn)還使用另一個(gè)表征其靈敏度的參數(shù)：比吸光度a*－是指吸光物質(zhì)濃度為1mg/L或1g/mL時(shí)，在最大吸收波長處，光程為1cm時(shí)的吸光度。比吸光度值越大，反應(yīng)靈敏度越高。比吸光度與質(zhì)量吸光系數(shù)相同，僅濃度單位不同。比吸光度指1g/mL(1mg/L),質(zhì)量吸光系數(shù)指1g/L。更適合于光度法測定低濃度物質(zhì)時(shí)的比較。a*與摩爾吸光系數(shù)

的關(guān)系為：

a*＝/M×10-3

式中：M為摩爾質(zhì)量，g/mol第十九頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日※由摩爾吸光系數(shù)計(jì)算桑德爾靈敏度S及比吸光度a*實(shí)例例：應(yīng)用硅鉬藍(lán)法測鋼中硅含量時(shí)810＝2.19×104應(yīng)用雙硫腙萃取光度法測量銅時(shí)＝4.5×104，測定鉛時(shí)＝6.8×104。計(jì)算其桑德爾靈敏度S及比吸光度a*。硅鉬藍(lán)直接光度法測鋼鐵中硅：

S＝＝0.0013a*＝＝0.780雙硫腙萃取光度法測銅：

S＝＝0.0014a*＝＝0.708雙硫腙萃取光度法測鉛：

S＝＝0.030a*＝＝0.328第二十頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日5、吸收曲線和工作曲線

朗伯-比耳定律A=

lg(I0/I)=

lg(1/T)=K·c·l中溶液的吸光度及透過率隨著波長的變化而變化。顯色絡(luò)合物的吸收曲線用不同波長下溶液中吸收物質(zhì)對應(yīng)的吸光度A或透過率T作圖,可得波長與A或T的曲線，稱為吸收曲線。吸收曲線可以確定光度法時(shí)應(yīng)采用在什么波長處進(jìn)行測定，可以得到最大的吸光度值。第二十一頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日吸光度：溶液對光的吸收程度，用符號A表示。光度法中，將lgI0/I定義為吸光度。

A＝lg(I0/I)

透過率：入射光透過溶液的程度(%)，稱為透光度。用符號T表示。T＝I/I0即用透射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度之比。吸光度與透過率的關(guān)系為：

A＝lg(I0/I)＝lg(1/T)=－lgT溶液的吸光度與透過率第二十二頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日例：高錳酸的光譜吸收曲線第二十三頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日朗伯-比耳定律A=

lg(I0/I)=

lg(1/T)=K·c·l中溶液的吸光度與溶液中吸光物質(zhì)的濃度呈線性。工作曲線以溶液中吸收物質(zhì)濃度對其吸光度作圖，可得工作曲線。當(dāng)用吸收物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制工作曲線時(shí)也可稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在一定范圍內(nèi)，吸光度A與溶液中吸收物質(zhì)的濃度呈正比，符合比耳定律呈線性關(guān)系。第二十四頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日圖：分光光度法的工作曲線第二十五頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日6、吸光光度法的分析步驟吸光光度法分析待測組分含量最常用的方法就是工作曲線法(又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線法)。其分析步驟如下：(1)首先配制一系列不同濃度待測元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，顯色后于一定波長(通常是最大吸收波長)處測量吸光度。然后以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得一過原點(diǎn)的直線，即工作曲線。

第二十六頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日(2)將試樣經(jīng)化學(xué)處理后，與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同條件下顯色并測量其吸光度。在工作曲線上查得該溶液中待測元素的濃度，從而計(jì)算出試樣中待測組分的含量。實(shí)際工作中有時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制工作曲線。即取一系列待測組分含量不同而基體成分與待測試樣相同的標(biāo)準(zhǔn)樣品，按分析方法與待測樣品同時(shí)溶解、顯色、測量吸光度，繪制工作曲線，從工作曲線上直接查得試樣中待測組分含量。第二十七頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日如果沒有與待測試樣成分相近的標(biāo)準(zhǔn)樣品,可以采用基體匹配法,即在工作曲線的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中加入與試樣相同量的基體成分。也可以采用加入法進(jìn)行：即稱取相同量待測試樣多份，按分析步驟處理試樣，然后在處理后的試樣中加入定量的待測元素，與未加入待測元素的試樣同時(shí)顯色、測量吸光度，通過計(jì)算可得到待測試樣中待測元素濃度。這些方法能抵消共存元素的影響，是一種準(zhǔn)確、快速的測量方法。第二十八頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日為獲得正確的分析結(jié)果繪制工作曲線時(shí)應(yīng)注意的問題：(1)標(biāo)準(zhǔn)系列的濃度范圍應(yīng)服從朗伯-比耳定律。待測元素的濃度應(yīng)在此范圍內(nèi)，不得將工作曲線任意延長。(2)為減少儀器測量誤差，吸光度讀數(shù)以0.2～0.7之間為宜。（高檔的光度計(jì)可以有較寬的讀數(shù)范圍）

第二十九頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日(3)標(biāo)準(zhǔn)系列與待測溶液應(yīng)經(jīng)相同的化學(xué)處理,只有充分驗(yàn)證,確認(rèn)省略某些操作對測定結(jié)果無影響時(shí)，才可省略某些操作。(4)工作曲線隨試劑、溫度、儀器穩(wěn)定性等各種實(shí)驗(yàn)條件的變化而有所改變,因此工作曲線的繪制應(yīng)與試樣分析同時(shí)進(jìn)行。第三十頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日光度法分析條件的選擇

為使光度法的測量結(jié)果有較好的靈敏度和準(zhǔn)確度，應(yīng)合理選擇吸光度的測量條件。如顯色劑與顯色反應(yīng)的選定；測定波長的選擇；顯色劑的用量；最佳顯色酸度的控制；顯色時(shí)間及顯色液穩(wěn)定時(shí)間的確定；共存離子的干擾及其消除；參比的影響及參比液的選擇；測量條件的優(yōu)化等。當(dāng)顯色體系確定后，通常應(yīng)考慮：(1)測定波長(通常選擇最大吸收波長為測定波長)(2)測定狹縫的選擇(以不減少吸光度時(shí)的最大狹縫)(3)吸光度的測量范圍(一般讀數(shù)選在0.2～0.7之間)(4)選擇合適的參比溶液第三十一頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日有關(guān)參比溶液的選擇1)當(dāng)試液、顯色劑及所用其他試劑在測定波長都無吸收時(shí)，可用純?nèi)軇?如蒸餾水)作參比溶液；2)當(dāng)試液無吸收，而顯色劑或其他試劑在測定波長處有吸收時(shí),可用不加試樣的試劑空白作參比溶液;3)若待測溶液本身在測量波長處有吸收，而顯色劑等無吸收,則采用不加顯色劑的試樣空白做參比溶液;4)如顯色劑和試液在測量波長都有吸收，可將一份試樣溶液加入適當(dāng)掩蔽劑，將待測組分掩蔽起來，使之不與顯色劑反應(yīng)，然后按相同步驟加入顯色劑和其他試劑，所得溶液作為參比溶液。第三十二頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日由于透過率T與待測溶液濃度呈負(fù)對數(shù)關(guān)系，因此相同T的讀數(shù)誤差所造成的濃度誤差是不一樣的。如果讀數(shù)誤差為1%時(shí),要求濃度測量的相對誤差小于5%,則待測溶液的透過率應(yīng)在70%～10%(吸光度為0.15～1.00)范圍內(nèi)。吸光度測量范圍的選擇可以證明，當(dāng)T=36.8%(A=0.434)時(shí)，測量的相對誤差最小,實(shí)際工作中一般控制吸光度讀數(shù)在0.2～0.7之間。為達(dá)到此目的，一是調(diào)節(jié)待測溶液濃度，包括稱取試樣量和稀釋倍數(shù)；二是選用適當(dāng)厚度的吸收池；三是在可能的情況下變化入射光波長。第三十三頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日光度法中顯色劑類型及其應(yīng)用

1、光度分析對顯色反應(yīng)的要求應(yīng)用光度分析法測定的無機(jī)離子中，以離子本身的顏色進(jìn)行測定的情況很少。一般是把待測離子通過一個(gè)顯色反應(yīng)，轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N有色化合物進(jìn)行測定。要求顯色反應(yīng)具有較高的靈敏度和較大的對比度;具有較好的選擇性;反應(yīng)進(jìn)行得較完全;有色配合物具有固定的組成。第三十四頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日光度分析對所用的顯色反應(yīng)的一般要求如下：

(1)反應(yīng)具有較高的靈敏度和較大的對比度。即生成的配合物應(yīng)具有較高的摩爾吸光系數(shù)，同時(shí)試劑與配合物的最大吸收波長應(yīng)有較大的差別。(2)反應(yīng)具有較好的選擇性。即干擾離子少,只有少數(shù)離子產(chǎn)生同樣的反應(yīng),或干擾容易消除。(3)反應(yīng)進(jìn)行得較完全。即生成的有色配合物具有較大的穩(wěn)定常數(shù)。(4)有色配合物具有固定的組成。即標(biāo)準(zhǔn)溶液與試劑中的有色配合物的組成應(yīng)是相同的。第三十五頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日2、顯色反應(yīng)條件的選擇顯色反應(yīng)條件的選擇，是為使待測組分在所選擇的反應(yīng)條件下，能有效地轉(zhuǎn)變?yōu)檫m于光度測定的化合物，具有穩(wěn)定的組成和相對穩(wěn)定的時(shí)間。

a顯色劑的用量

b反應(yīng)體系的酸度

c顯色溫度

d顯色時(shí)間e溶劑

第三十六頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日主要顯色劑類型及其在冶金分析中的應(yīng)用

1、無機(jī)顯色劑離子本身的顏色

MnO4-硫氰酸鹽（SCN-）鉬酸鹽（雜多酸絡(luò)合物）2、有機(jī)顯色劑a.偶氮類變色酸,偶氮氯磷Ⅲ,PAR,5-Cl-PADAB

b.三苯甲烷類鉻天青S,二甲酚橙,半二甲酚橙,苯基熒光酮c.含氮試劑丁二肟,亞硝基R鹽,二安替比林甲烷,二硫代二安替吡啉甲烷,鄰二氮雜菲d.含硫試劑雙硫腙,銅試劑,鉍試劑第三十七頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日※光度法的主要測定方式及其應(yīng)用

單波長測定方式—常規(guī)法—萃取光度法—浮選光度法及固相光度法—長光路毛細(xì)管光度法差示分光光度法差示吸光光度法是用一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色溶液與未知試樣的顯色溶液相比較，測量吸光度，從測得的吸光度求未知濃度。A差＝－lg(Ix/I)＝K·l(c－cx)以A差對(c-cx)作圖,可以求出c－cx，c為已知,則cx可求得。

第三十八頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日常規(guī)分光光度法常規(guī)分光光度法為采用單波長對顯色液直接進(jìn)行測定萃取光度、浮選光度和固相光度法這三類方法都是將待測組分先分離、富集到另一相后再進(jìn)行光度測定，從而提高測定靈敏度和選擇性。A萃取光度法萃取光度法就是將溶劑萃取與光度測定相結(jié)合的一種分析方法。它將水相中的有色物質(zhì)直接萃取到少量與水不互溶的溶劑中后進(jìn)行吸光度測量，是一種提高靈敏度和排除干擾的測定方法。冶金分析中常用于萃取法測磷。

B浮選光度法C固相光度法第三十九頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日差示分光光度法差示分光光度法可以提高光度法的精確性，從而實(shí)現(xiàn)用光度法對物質(zhì)中某一含量較高組分的測定。例如對高含量成分的測定，有時(shí)可達(dá)到與重量法、滴定法同等的精確度。故實(shí)際應(yīng)用多在對高含量成分的測定。在差示分光光度法的測量中，要求一個(gè)實(shí)際具有較高吸收的參比溶液的表觀刻度讀數(shù)為A=0或T=100%故所用的儀器必須具有出光狹縫可以調(diào)節(jié)，光度計(jì)靈敏度可以控制或光源強(qiáng)度可以改變等性能。

第四十頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日※差示法對較低組分的測定，其降低分析誤差的主要依據(jù)就是對刻度標(biāo)尺的放大作用。例如，假定用普通光度法測量參比溶液的透光度為10%，試樣溶液的透光度為7%，僅相差3%。若用示差法，將參比溶液的透光度調(diào)到100%，則試樣溶液的透光度為70%，兩者之差增為30%，相當(dāng)于放大讀數(shù)標(biāo)尺10倍。從而相對地增大了這種測量方法的精確性。但實(shí)際應(yīng)用并不多見。第四十一頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日分光光度計(jì)的儀器結(jié)構(gòu)原理、結(jié)構(gòu)

分光光度計(jì)通常由光源、單色器、樣品室、檢測系統(tǒng)(檢測器和顯示儀表或記錄儀)等組成。光源單色器樣品室（吸收皿）檢測系統(tǒng)

光源單色器樣品室檢測系統(tǒng)第四十二頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日(1)

光源：一般采用鎢(350~2500nm，可見光區(qū)用)和氘燈(190～400nm，紫外光區(qū)用)，根據(jù)不同的波長要求選擇使用。(2)單色器：從光源發(fā)射的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)裝置。單色器由入射狹縫、準(zhǔn)直元件、色散元件、聚焦元件和出射狹縫等五部分組成。常用的色散元件有棱鏡和光柵。

第四十三頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日(3)樣品室：樣品室內(nèi)裝有吸收池架。吸收池由玻璃或石英制成，有不同形狀和光程長。玻璃吸收池只能用于可見光區(qū)，而石英池既可用于可見光區(qū)、亦可用于紫外光區(qū)。(4)檢測系統(tǒng)（接受器）：通過樣品池后的光由檢測器接收，產(chǎn)生的電信號，經(jīng)由顯示儀表和信號處理系統(tǒng)記錄下吸光度值。第四十四頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日分光光度計(jì)的類型分光光度計(jì)儀器根據(jù)分光光路及所用波長數(shù)目，可以分為：單光束和雙光束分光光度計(jì)；單波長或雙波長分光光度計(jì)。其光路的示意如右圖所示。第四十五頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日雙波長分光光度計(jì)第四十六頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日典型的分光光度計(jì)：721型分光光度計(jì)

721型分光光度計(jì)－波長范圍360～800nm，色散元件為三角棱鏡。波長精度：360～600～800nm±3、6、8nm;透射比正確度：±2.5%;透射比重復(fù)性：0.5%。該型號的儀器較老了,但仍在實(shí)驗(yàn)室中常規(guī)使用第四十七頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日典型的分光光度計(jì)：TU-1901型紫外可見分光光度計(jì)采用全息光柵分光,波長范圍：190～900nm。雙光束動態(tài)反饋分光系統(tǒng),基線穩(wěn)定。采用單片微機(jī)控制,數(shù)字顯示,自動調(diào)零、調(diào)100%功能。三點(diǎn)曲線濃度計(jì)算方法。具有光譜掃描,單波長,雙波長,三波長及微分定量等功能。配備通用并行打印或微機(jī)接口,配RS-232接口雙光束動態(tài)反饋比例記錄測光系統(tǒng)第四十八頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日※紫外可見分光光度計(jì)的發(fā)展趨勢紫外-可見分光光度法的靈敏度高,相對其他光譜分析方法，其儀器設(shè)備和操作都比較簡單，費(fèi)用低，且分析速度快。因此，紫外-可見分光光度法在冶金、地質(zhì)、化工、生物醫(yī)學(xué)、食品、環(huán)境保護(hù)等諸多領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。近些年來紫外可見分光光度計(jì)的發(fā)展趨勢：波長范圍向短波近紅外區(qū)方向拓展；雜散光低，吸光度范圍大；多種附件可供選擇，以滿足多種類型樣品分析的要求。在儀器構(gòu)型方面，從單光束發(fā)展為雙光束，現(xiàn)在幾乎所有高級分光光度計(jì)都是雙光束的，有些高精度的儀器采用雙單色器，使得儀器在分辨率和雜散光等方面的性能大大提高?，F(xiàn)在的分光光度儀器從儀器的精密程度和使用性能上均得到很大的提高，均帶有電子計(jì)算機(jī)控制，數(shù)據(jù)處理、存儲、直接數(shù)字顯示和比色測定的自動化操作等功能。分析軟件發(fā)展迅速。第四十九頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日分光光度計(jì)儀器的安裝和調(diào)試分光光度計(jì)是光學(xué)、精密機(jī)械和電子技術(shù)三者緊密結(jié)合而成的光譜儀器，正確安裝、使用和定期檢查儀器的性能，加強(qiáng)維護(hù)和保養(yǎng)是保證儀器處于正常狀態(tài)獲得準(zhǔn)確可靠的分析結(jié)果的前提，也能延長儀器使用壽命和提高儀器使用效果。1、安裝分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)室的基本要求(1)室溫保持在20±2℃為佳，沒此條件最高溫度也不宜超過28℃，最低不低于15℃。(2)濕度一般宜控制在45～65%，上限不超過70%。

(3)防塵、防腐蝕(4)防震和防電磁干擾第五十頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日2、分光光度計(jì)性能測試分光光度的性能對分析結(jié)果的質(zhì)量影響極大，對于尚未投入使用的新儀器，必須對其主要性能指標(biāo)進(jìn)行全面檢測。在使用期間，也要定期檢查，測試項(xiàng)目包括：(1)波長準(zhǔn)確度

(2)波長重復(fù)性(3)單色器分辨率(4)儀器的雜散光(5)光度計(jì)線性(6)光度準(zhǔn)確度(7)光度重復(fù)性(8)噪聲(9)基線的穩(wěn)定性和平直線分光光度計(jì)的性能測試可根據(jù)相關(guān)儀器的檢定規(guī)程進(jìn)行。第五十一頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日※波長校正通常廠家均配有鐠釹濾光片以方便用戶進(jìn)行定期校正.推薦使用529nm的吸收峰作為校正的標(biāo)準(zhǔn)，允許波長差為±3nm。超過此值需要進(jìn)行校正。在沒有鐠釹濾光片的情況下，可以用標(biāo)準(zhǔn)溶液來對波長進(jìn)行校正：溴甲酚綠溶液pH8時(shí)max＝615nm；酚紅溶液pH11時(shí)max＝558nm；溴酚紅溶液pH10時(shí)max＝574nm；0.05mol/L鉻酸鉀溶液max＝370nm;氯化釹溶液有兩個(gè)吸收峰：1521.8nm；2582nm;氯化鐠溶液有三個(gè)吸收峰：max=444.5nm；這些物質(zhì)的吸收光譜峰值波長不變，特別是稀土氯化物吸收峰很窄，有利于波長校正。第五十二頁，共六十頁，編輯于2023年，星期日分光光度計(jì)儀器的保養(yǎng)和維護(hù)

分光光度計(jì)的維護(hù)、保養(yǎng)和調(diào)試的根本目的在于保持和改善儀器的工作性能，其中主要是保持分光光度計(jì)單色光純度和準(zhǔn)確度以及測量靈敏度和穩(wěn)定性。為此，必須對分光光度計(jì)的主要組件作正確使用和保養(yǎng),必要時(shí)作適當(dāng)調(diào)整。對光源部件，應(yīng)注意如下幾點(diǎn)：

(1)光源燈有一定壽命,儀器不工作時(shí)不要開燈,若工作間歇時(shí)間短，可不關(guān)燈和停機(jī)，一旦停機(jī)，則應(yīng)待燈冷卻后