乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討

關于乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討第一頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測乙型肝炎（下稱乙肝）免疫學標志物問世以來，由于其簡便、靈敏、特異性高的優(yōu)點，成為基層醫(yī)院對乙肝診斷分型療效觀察的主要手段，但由于其自身方法學上的限制，不同血清物質變化及實驗室因素易造成各種錯誤結果。筆者綜合資料及臨床實踐，對影響乙肝“兩對半”檢測結果的因素，報告如下。

第二頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討1、樣本采集與處理的影響

1.1標本嚴重溶血及混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內不易洗凈，殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽性，嚴重溶血標本禁用。

第三頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討

1.2采血試管洗滌不徹底、反復使用交叉污染。塑料試管能吸附抗原物質，樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空采血管。并使用非抗凝標本。

第四頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討

1.3標本凝固不全，正常血液采集后30min-2h開始凝固，18-24h血塊完全收縮。在工作中，有時為了快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊或附著在酶標板孔壁內使酶標記物不易洗掉，易造成假陽（陰）性結果。因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管。第五頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討2、試劑的影響

2.1乙肝兩對半試劑廠家較多，不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別。資料顯示，不同廠家試劑的特異性和敏感性也不盡相同，有的廠家酶標板孔間A值差＞15%，標記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用劣質試劑必然導致結果的假陽性或假陰性，選擇高質量的試劑是保證結果準確的關鍵之一。第六頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討

2.2不同方法學的檢測試劑會使兩對半結果出現(xiàn)一些不同。例如：在實際工作中常用ELISA法檢測乙肝病毒表面抗原（HBsAg）結果為陰性，而電化學發(fā)光檢測為陽性。除方法學的靈敏度外，還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標志物檢測存在差異，建議選擇試劑廠家對試劑的制備應該考慮亞型及濃度的問題。第七頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討

3、操作技術的影響

3.1加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準確性，直接影響檢測結果。由于吸嘴構造特殊，導致清洗困難，加大了交叉污染的機會，建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準。

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3.2溫浴影響。96孔酶標板結構特別，易產(chǎn)生邊緣效應，抗原抗體結合及酶促反應對溫度有嚴格要求，酶標板周圍與內部孔升降溫速率不同，造成周邊與內部孔結果差異。干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。第九頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討

3.3洗滌是ELISA操作的重要環(huán)節(jié)，手洗條件一致性較差，對結果影響較大，半自動與全自動洗板機使用不當也會影響結果。血清中殘留的纖維蛋白絲或洗滌液析出結晶易使洗板機針孔全阻塞或半阻塞，造成未結合標記酶洗脫不徹底，導致“花板”造成假陽性或假陰性。所以操作洗板機過程中要不時觀察洗板機針孔內洗液的通暢狀況，及時糾正，洗板機不用時應用去離子水清洗幾遍。。

第十頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討3.4肉眼判斷結果時，顯色淺不易觀察，影響結果的準確性，必須使用酶標儀檢測結果，以保證結果一致性第十一頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討4、HOOK效應影響隨著ELISA一步法的應用，一些標本中抗原含量過高，產(chǎn)生HOOK效應，影響檢測結果。采用同步稀釋測定或使用線性范圍高的兩對半定量法可以減少HOOK反應的發(fā)生。

第十二頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討5、干擾物質的影響有學者認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子（RF）、甲胎蛋白（AFP）因子。某些自身抗體都會影響結果造成假陽性［4］。

第十三頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討6、藥物的影響高效價的乙肝免疫球蛋白會與HBsAg形成復合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測會呈陰性反應，導致乙肝兩對半少見模式的出現(xiàn)。第十四頁，共十七頁，編輯于2023年，星期日ELISA法對乙型肝炎兩對半檢測結果影響因素的探討

為預防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗后的1-2周內，血清中可檢出HBsAg成分，形成一過性HBsAg陽性。這可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg。有方法能夠把它檢出，如電化學發(fā)光法，建議接種乙肝疫苗后1個月內不應作HBsAg檢測?？傊?，乙肝兩對半檢測必須排除各