臨床血液生化檢測

關(guān)于臨床血液生化檢測第一頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日實驗十六胰島素、腎上腺素對血糖濃度的影響

第二頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日

血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般認為，血糖是指血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖濃度為4.4～6.7mmol/L（80～120mg/100ml）。血糖是糖在體內(nèi)的運輸形式。全身各組織都從血液中攝取葡萄糖以氧化供能，特別是腦、腎、紅細胞、視網(wǎng)膜等組織合成糖原能力極低，幾乎沒有糖原貯存，必須不斷由血液供應(yīng)葡萄糖。當血糖下降到一定程度時，就會嚴重妨礙腦等組織的能量代射，從而影響它們的功能。所以維持血糖濃度的相對恒定有著重要的臨床意義。第三頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日第四頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日血糖濃度的調(diào)節(jié)

血糖濃度能維持相對恒定是由于機體內(nèi)存在一整套高效率的調(diào)節(jié)機制，精細地控制著血糖的來源與去路，使之達到動態(tài)平衡。第五頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用

神經(jīng)系統(tǒng)對血糖濃度的調(diào)節(jié)作用主要通過下丘腦和自主神經(jīng)系統(tǒng)對所控制激素的分泌，后者再通過影響血糖來源與去路關(guān)鍵酶的活性來實現(xiàn)。神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)最終通過細胞水平的調(diào)節(jié)來達到目的。下丘腦一方面通過內(nèi)臟神經(jīng)作用于腎上腺髓質(zhì)，刺激腎上腺素的分泌；另一方面也作用于胰島α-細胞，使其分泌胰高血糖素；同時還可以直接作用于肝。三方面共同作用的結(jié)果是使肝細胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖異生關(guān)鍵酶的活性增加，糖異生作用增加，從而使血糖濃度升高。下丘腦還可通過興奮迷走神經(jīng)，使胰腺β-細胞分泌胰島素，同時還可直接作用于肝，使肝細胞內(nèi)糖原合成酶活化，促進肝糖原的合成；此外還抑制糖異生途徑，促進糖的氧化和轉(zhuǎn)化，總體上使血糖的去路增加，來源減少，最終達到使血糖濃度降低的目的。第六頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日糖異生作用增強下丘腦腎上腺素胰高血糖素腎上腺髓質(zhì)胰島α-細胞肝糖原分解加速血糖濃度升高胰腺β-細胞＋＋肝下丘腦胰島素－糖原的合成糖異生血糖濃度降低第七頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日激素

使血糖濃度降低的激素胰島素使血糖濃度升高的激素胰高血糖素、腎上腺素、腎上腺皮質(zhì)激素、生長素、甲狀腺素它們對血糖的調(diào)節(jié)主要是通過對糖代謝各主要途徑的影響來實現(xiàn)的。在激素發(fā)揮調(diào)節(jié)血糖濃度的作用中，最重要的是胰島素和胰高血糖素。腎上腺素在應(yīng)激時發(fā)揮作用，而腎上腺皮質(zhì)激素、生長激素、甲狀腺素等都可影響血糖水平，但在生理性調(diào)節(jié)中僅居次要地位。第八頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日胰島素

使肌肉和脂肪組織細胞膜對葡萄糖的通透性增加，利于血糖進入這些組織進行代謝。誘導葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加速細胞內(nèi)葡萄糖的分解利用。通過使細胞內(nèi)cAMP含量減少，激活糖原合成酶和丙酮酸脫氫酶系，抑制磷酸化酶和糖異生關(guān)鍵酶等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖轉(zhuǎn)變?yōu)橹镜姆磻?yīng)增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖異生減少或受抑制，使血糖來源減少，最終使血糖濃度降低。第九頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日

胰高血糖素

主要通過提高靶細胞內(nèi)cAMP含量達到調(diào)節(jié)血糖濃度的目的。細胞內(nèi)的cAMP可激活依賴cAMP的蛋白激酶，后者通過酶蛋白的共價修飾改變細胞內(nèi)酶的活性，即激活糖原分解和糖異生的關(guān)鍵酶，抑制糖原合成和糖氧化的關(guān)鍵酶，使血糖升高。

腎上腺素

通過cAMP激活肝中糖原磷酸化酶使糖原分解，還有誘導肝中磷酸烯醇式丙酮酸激酶及果糖二磷酸酶的合成促進糖異生作用，使氨基酸轉(zhuǎn)化成葡萄糖，從而使血糖上升。第十頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日第十一頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日

實驗目的

1.掌握各種激素（胰島素和腎上腺素）對血糖的調(diào)節(jié)作用。

2.掌握血糖的定義、正常值及其測定的原理。

基本原理葡萄糖在有機酸溶液中能與某些芳香胺類化合物如苯胺、聯(lián)苯胺、鄰甲苯胺等起縮合反應(yīng)，生成希夫氏（Schiff)堿式有色衍生物，再通過分光光度計比色測定得到葡萄糖濃度。本實驗用的是鄰甲苯胺法。鄰甲苯胺不與非糖還原性物質(zhì)顯色，而與已醛糖顯色。葡萄糖的醛基在熱醋酸溶液中與鄰甲苯胺的氨基互相縮合成蘭綠色的希夫氏堿，該蘭綠色在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比。此法測得正常人的空腹血糖值為70-100mg/dl,兔約為130mg/dl左右。第十二頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日

操作

1．動物準備及空腹采血

取試管4支，編號(1)、(2)、(3)、(4)，分別加入肝素抗凝劑0.0lml。取空腹16小時以上的家兔兩只，分別編號1和2，稱體重并記錄。用耳靜脈采血法：先剪去兔耳靜脈處的毛，再用二甲苯擦拭兔耳部靜脈，使其充血，在其周圍抹上凡士林(防止污染、潤滑），用刀片輕輕挑破邊緣耳靜脈，放血入含抗凝劑的試管（1）和（2），約需2-3ml，邊滴邊搖，以防凝固。取血完畢，用干棉球壓迫血管止血.

第十三頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日

2．注射激素并再采血。

l號兔臀部皮下注射胰島素，劑量按4單位／kg計算，一小時后于心臟取血入抗凝管（3），測定血糖。將2號兔臀部皮下注射0.1%腎上腺素液，劑量為每公斤體重0.4ml，觀察兔子情況。30min后，心臟取血入抗凝管（4）中。

心臟采血法：將10ml注射器用肝素抗凝劑淋洗（肝素化）后，置家兔于仰臥位，固定四肢，在左側(cè)胸壁3－4肋間，用左手食指摸到心搏最明顯處（頸靜脈切跡與胸骨劍突中點旁）垂直進針（不可左右前后擺動針頭），深度約3cm，當有落空感時，可感覺到針尖隨心搏而動，固定針頭，采血8ml左右，放入抗凝管中。第十四頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日

3.測定注射前后的血糖

將收集的4管血液離心10分鐘(每分鐘2500轉(zhuǎn))，取上層血漿，分別制成胰前(1)、胰后(3)、腎前(2)、腎后(4)4管標本。取6支干燥試管，編號并按表（P43）操作?；靹蚋鞴?，置沸水浴中加熱15分鐘，冷卻，用波長630nm進行分光測定，讀取吸光度值，按下式計算葡萄糖含量。葡萄糖mg/dl血漿=測定管吸光度標準管吸光度×100第十五頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日

注意事項

1.離心機的使用

⑴.離心前一定要配平（位置配平和重量配平）。⑵.使用時離心機的蓋子一定要蓋緊，以免發(fā)生意外。

⑶.要等離心機完全靜止后才能打開蓋子。

2.微量移液器的使用

3.取血時的注意事項

⑴.注射器、刀片的使用。⑵.注射器在取血前要肝素化。⑶.心臟取血時要注意進針的位置和深度。

⑷.注意不要將空氣注入動物體內(nèi)。

⑸血液放入試管中時要先將注射器的針頭取下，以防溶血。4.鄰甲苯胺具有毒性和腐蝕性，操作時要注意。第十六頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日臨床意義

1.血糖升高：病理性主要見于糖尿病，其他內(nèi)分泌疾病如腎上腺皮質(zhì)機能亢進，垂體前葉機能亢進等。

2.血糖降低：病理性如胰島細胞瘤、胰島素分泌過多，過量胰島素治療，腎上腺皮質(zhì)功能減退等。實驗二十血清尿素氮測定

（二乙酰一肟顯色法）第十七頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日

實驗目的

掌握尿素氮的定義和其測定意義

原理尿素是體內(nèi)氨基酸分解代謝的最終產(chǎn)物之一。氨基酸經(jīng)脫氨基作用生成氨，氨對人體具有毒性。肝細胞具有使氨生成尿素的作用，尿素的生成是肝臟的解毒作用之一。在正常情況下，血中尿素氮主要是經(jīng)腎小球濾過而隨尿排出的。當腎小球濾過功能減退時，血中的尿素氮濃度升高。所以測定血中尿素氮含量可粗略估計腎小球的濾過功能。二乙酰在強酸條件下與尿素縮合成紅色的二嗪衍生物，顏色深淺與尿素含量成正比。因二乙酰不穩(wěn)定，故用二乙酰一肟來代替二乙酰。顯色反應(yīng)中產(chǎn)生的復合物對光不穩(wěn)定，加入硫氨脲既能提高尿素與二乙酰反應(yīng)的靈敏度又能增加其顯色的穩(wěn)定性。第十八頁，共二十頁，編輯于2023年，星期日操作

1.標準曲線的繪制（略）

2.測定按p52表配制試劑，混勻后置沸水浴中12min，冷卻5min后，用540nm進行比色，以空白管校正0