實驗：組織分離法制備食用菌母種

千里之行，始于腳下。第2頁/共2頁精品文檔推薦實驗：組織分離法制備食用菌母種組織分別法制備食用菌母種（8學(xué)時）

一、試驗的目的和要求

1、學(xué)會母種培養(yǎng)基的配制辦法。

2、把握組織分別的辦法和技術(shù)。

3、把握母種轉(zhuǎn)管繼代培養(yǎng)技術(shù)。

4、把握無菌操作技術(shù)。

二、試驗內(nèi)容或原理

（1）母種培養(yǎng)基配制。

工藝流程：培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基的配制滅菌

擺斜面

（2）菌種分別與培養(yǎng)（本試驗以組織分別為例）。

工藝流程：種菇的挑選與消毒組織塊的切取菌絲培養(yǎng)

三、試驗材料

儀器：超凈工作臺、高壓滅菌鍋、電爐、天平、試管、試管架、解剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水、牛角勺、棉花、紗布、酒精燈。

試劑：75%酒精、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1等。

四、試驗步驟

（1）母種培養(yǎng)基配制

A、培養(yǎng)基配方：以PDA培養(yǎng)基為例，馬鈴薯（去皮）200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000ml。

B、培養(yǎng)基配制：首先將馬鈴薯去皮、洗凈、挖去芽眼、切成薄片，稱取200g，放入鋁鍋中用1000ml清水加熱煮沸，維持20min左右，煮至軟而不爛為止。用雙層濕沙布過濾，然后取濾液并補足蒸發(fā)損失的水分。再加入瓊脂繼續(xù)加熱，待瓊脂融化后，添加葡萄糖及其它成分，攪拌勻稱后預(yù)備裝管。

C、分裝試管：培養(yǎng)基配制后應(yīng)趁熱分裝。裝管時勿使管內(nèi)外壁沾上溶液，以免浸濕棉塞，污染雜菌。裝管后塞上棉塞。棉塞的大小、松緊度應(yīng)相宜，以用手提棉塞、試管不脫落為準。然后每10支度試管扎成一捆，棉塞上方用牛皮紙包好，避開滅菌時被水蒸汽浸濕。

D、滅菌：滅菌前將水加至鍋內(nèi)水位標記高度。將試管放入鍋內(nèi)，蓋上鍋蓋，對角旋緊鍋上螺旋，并閉排氣閥，開頭加熱,當(dāng)鍋內(nèi)蒸汽大量排出時再繼續(xù)排汽3-5min,關(guān)閉放氣閥.當(dāng)壓力表指針指到0.15Kg/cm2時(滅菌所需壓強)開頭計時,繼續(xù)維持該壓強30min。滅菌結(jié)束持壓力表指針自然回到”0”位時打開放汽閥,排出鍋內(nèi)剩余蒸汽后,打開鍋蓋.注重切忌在壓力表未到”0”位時就放汽,以免試管內(nèi)的培養(yǎng)基向上沖浸濕棉塞,造成以后菌種的污染.

E、擺斜面：當(dāng)培養(yǎng)基的溫度降到60℃時，將試管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的長度以占試管長度的1/2為宜。冷卻后即成斜面培養(yǎng)基。

(2)菌種的分別與培養(yǎng)（本試驗以組織分別為例）

種菇的挑選與消毒：挑選出菇早，菇形正，菇蓋肥厚，具有該品種特征，無病蟲害、無雜菌污染，子實體八九分成熟的作為種菇。種菇選定后，用75%酒精舉行表面消毒。

組織塊的切?。簩⑿泵媾囵B(yǎng)基放進超凈工作臺內(nèi)，用紫外燈（或化學(xué)藥品）舉行消毒0.5h以上,關(guān)閉紫外燈后20min后,再開頭進入接種室內(nèi)舉行接種。接種是一項技術(shù)性很強的工作，需要在無菌的環(huán)境中以無菌操作辦法舉行接種，才干削減污染。無菌操作是接種過程中最基本的操作辦法，要求操作嫻熟，動作快速。用無菌刀在菇柄或菇蓋中部縱切一刀，然后用手將菇體掰成兩面三刀半，在菌柄和菌蓋交界處用刀切取0.3-0.5cm2的小方塊組織,將其移接到試管內(nèi)培養(yǎng)基的中心，將其移接到試管內(nèi)培養(yǎng)基的中心。

菌絲培養(yǎng)：接種后置于25℃恒溫箱中培養(yǎng),2-3天后可見組織塊周圍發(fā)生白色絨毛狀菌絲,此時天天要檢查雜菌污染狀況.培養(yǎng)7-10天后,菌絲即可長滿斜面。菌絲長滿試管即為一級種（母種）。（可舉行母種轉(zhuǎn)管繼代培養(yǎng)。）