生技一文獻(xiàn)翻譯作業(yè)9.第九組

早期巨噬細(xì)胞的浸潤和交替性激活是缺氧誘導(dǎo)的肺動脈高壓晚期發(fā)展的關(guān)鍵因素EleniVergadi,MD*,1,MunSeogChang,PhD*,1,2,ChangjinLee,PhD1,OlinD.Liang,PhD1,XianlanLiu1,AngelesFernandez-Gonzalez,PhD1,S.AlexMitsialis,PhD?,1,and laKourembanas,翻譯：卓 14生技1班檢驗醫(yī)學(xué)院、生命科學(xué)學(xué)背景——肺部炎癥先于低氧誘導(dǎo)的肺動脈高壓（HPH）發(fā)生；然而其在HPH發(fā)病中的作用尚不清楚。我們試圖描述缺氧炎癥的反應(yīng)，探討其于HPH發(fā)生的作用。我們還會探討一種具有HPH保護(hù)作用的消炎酶，血紅素加氧酶-1方法和結(jié)果——我們培育的雙轉(zhuǎn)小鼠能在具有肺特異性的多西環(huán)素的誘導(dǎo)下過度表達(dá)血紅素加氧酶1缺氧的小鼠缺乏多西環(huán)素即會導(dǎo)致早單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞在支氣管肺泡液中的快速積累肺泡巨噬細(xì)胞在缺氧環(huán)境下會獲得一個已激活表型（2，憑此發(fā)現(xiàn)了炎癥區(qū)1，精氨酸酶1，類幾丁質(zhì)3的表達(dá)反應(yīng)。一個簡單的2日效力的多西環(huán)素脈搏并沒有被而是推遲了缺氧炎癥期的到來同時也不能用它來對抗H相比之下7天效力的多西環(huán)素在整個缺氧炎癥的治療期間維持著高血紅素氧合酶1的含量抑制巨噬細(xì)胞的和活化誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞白細(xì)胞介素10PH的發(fā)生。缺氧2巨噬細(xì)胞的上清液促進(jìn)肺動脈平滑肌細(xì)胞的浸潤，雖然利用血紅素氧合酶1的酶解產(chǎn)物，即一氧化碳進(jìn)行治療，會清除這種效果。結(jié)論——在缺氧的肺中，早期巨噬細(xì)胞的浸潤和交替性活HPH的晚期發(fā)展的關(guān)。血紅素氧合酶-1可高效地操縱缺氧巨噬細(xì)胞的活化狀態(tài)，以防御HPH。(Circulation.2011;123:1986-1995.)血紅素氧合酶-1,高血壓肺病,缺氧,巨噬細(xì)胞活化,炎，肺動脈高壓(PAH)是一種高危疾病，它會導(dǎo)致血管收縮和血管壁重塑肥大和徹底損毀。盡管在這一領(lǐng)域有著重大進(jìn)展，但是PAH1-3的發(fā)展的潛在機制仍不清楚4-6。最近，越來越多的研究表明，肺部炎癥與PAH的潛，在所有與PAH相關(guān)的炎癥細(xì)胞中，那些單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞群往往和疾病有關(guān)聯(lián)。1,2,8-10然而，巨噬細(xì)胞可以通過顯著的可塑性和不同形式的極化激活來有效地響應(yīng)環(huán)境信號，可大致分為典型激活(M1)，交替性激活(M2)和抗炎(調(diào)控)巨噬細(xì)胞的激活。11,12典型活化的巨噬細(xì)胞是指由干擾素-γ和腫瘤壞死因子(TNF-α)激活的效應(yīng)細(xì)胞。他們產(chǎn)生誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和白細(xì)胞(IL)-12呈現(xiàn)了極強的抗菌性或抗腫瘤性。另一方面，M2-極化巨噬細(xì)胞的激活主要是借助IL-4或IL-13，以及最近發(fā)現(xiàn)CCL2和IL-6，13還有他們表達(dá)的發(fā)現(xiàn)于炎癥1區(qū)(Fizz1)的精氨酸酶1(Arg-1)，幾丁質(zhì)酶-3-類-3(Ym1)，和甘露糖受體，C型凝集素-1。11,12,14肺病以及其他各種導(dǎo)致營養(yǎng)功能，纖維化功能和血管生成機能紊亂的現(xiàn)象皆與M2巨噬細(xì)胞有關(guān)。15,19占據(jù)總數(shù)第三的調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞，具有生產(chǎn)高含量IL-10及低含量IL-12的能力和促進(jìn)免疫抑制的能力。11,14以PAH為例，被激活的浸潤巨噬細(xì)胞同他們對疾病的，血紅素氧合酶-1(HO-1)是一種主要的抗氧化劑和細(xì)胞保護(hù)酶，可催化亞鐵血紅素降解為3種酶解的最終產(chǎn)物:一作用。7,18-20到目前為止，這種保護(hù)作用的主要原因，已被歸結(jié)于血管張力和CO引起的對血管平滑肌細(xì)胞浸潤的抑制現(xiàn)象。21然而顯示HO-17,17,22,23和CO24,25具有強效的抗炎特性，其中一些可能會通過抗炎細(xì)胞因子IL-1025,26的增加發(fā)揮作用。此外，HO-1缺陷小鼠的慢性氧化炎癥，會隨著的增長，以及對擴張，纖維癥和炎癥，成的缺氧的不良反應(yīng)，而加重。18,28因此我們猜測，免疫調(diào)節(jié)是PAH中對HO-1保護(hù)的關(guān)鍵機制為了詳細(xì)描述了缺氧引起的肺部炎癥反應(yīng)，評估其在肺動脈高壓的作用，并探討在這一背HO-1的防護(hù)性能，我們培育了一個與多西環(huán)素誘導(dǎo)的雙轉(zhuǎn)小鼠模型，其肺具有HO-1的特異性表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)，在缺乏多西環(huán)素制了低氧巨噬細(xì)胞浸潤和活化，導(dǎo)致了IL-10在巨噬細(xì)胞中的增加。由M2巨噬細(xì)胞培養(yǎng)出的上清液，促進(jìn)了缺氧肺動脈平滑肌細(xì)胞的浸潤，相反，CO處理可以終止這種效果。通過選擇多西環(huán)素下HO-1表達(dá)的時長和表達(dá)的時段，我們能夠延緩或抑制肺部炎癥和巨噬細(xì)胞活化，而后者中可以中止HPH。方雙轉(zhuǎn)小鼠的培育，是由隱藏了Clara細(xì)胞分泌的蛋白啟動子對照下的四環(huán)素轉(zhuǎn)錄激活因子（tetONsystem）的BALB/c轉(zhuǎn)小鼠，與四環(huán)素反應(yīng)元件的對照下的攜帶人HO-1（hHO-1）轉(zhuǎn)的FVB轉(zhuǎn)小鼠，相雜交完成CCTA小鼠將分成兩組，接受多西環(huán)素治療的，和作為對照的消除了一切多西環(huán)素自HHO-1具有潛在影響統(tǒng)計分所有的值表示為mean±SD不同組間的比較結(jié)果1-wayANOVAMann-WhitneyUtest，并適當(dāng)GraphPadInStat（GraphPadSoftware,SanDiego,CA）。P＜0.05即被認(rèn)為有明顯現(xiàn)象。結(jié)肺特異性，人血紅素加氧酶-1的誘導(dǎo)表基于對雙轉(zhuǎn)模型的設(shè)計，hHO-1轉(zhuǎn)是同時處于多西環(huán)素和Clara細(xì)胞分泌蛋白啟動子的對照下的，因此其為被誘導(dǎo)地表達(dá)于肺上皮細(xì)胞中對整個肺部RNA協(xié)同hHO-1特異性引物進(jìn)行半定量聚合酶鏈反應(yīng)的分析，使用一種可同時檢測與鼠類HO-1的抗體我們可以明顯地在多西環(huán)素作用下的CC77小鼠體內(nèi)檢測到HO-1蛋白質(zhì)含量的增高，但在CCTA小鼠體內(nèi)卻不可以（圖1C）。血紅素加氧酶-1的持續(xù)誘導(dǎo)預(yù)防低氧性肺動脈高在我們的模型中，PAH的發(fā)展是通過收縮壓，F(xiàn)ulton指數(shù)和內(nèi)壁厚度指數(shù)來進(jìn)行評估的。Fulton指數(shù)，是左指數(shù)，對染色的肺小動脈的α-平滑肌肌動蛋白組織切片的估量值。僅僅經(jīng)過7天，雙轉(zhuǎn)組（CC77）和對照（CCTA）的收縮壓，F(xiàn)ulton指數(shù)和內(nèi)壁厚度指數(shù)均明顯升高（圖2A至2C）。多西環(huán)素對照下的整個缺氧過程了雙轉(zhuǎn)小鼠的收縮壓，F(xiàn)ulton指數(shù)和內(nèi)壁厚度指數(shù)的增加，而非對照組（圖2）。經(jīng)免疫染色的肺小動脈α-（圖2。缺氧誘導(dǎo)單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞滲透，及經(jīng)過血紅素氧合酶-1及其酶促產(chǎn)物CO改良的肺細(xì)胞產(chǎn)物的為了低氧的初始階段以及高血壓發(fā)展前的炎癥反應(yīng)，將動物于缺氧環(huán)境中，制作出了一張BALF中細(xì)胞內(nèi)容物的時間剖面圖。超過95%的孤立的BALF細(xì)胞為CD45陽性白細(xì)胞（網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)補充的圖1A）。表達(dá)巨噬細(xì)胞特異性細(xì)胞表面抗原F4/80和CD11c的細(xì)胞仍然占比很大（＞98%），無論是低氧環(huán)境下還是經(jīng)多西環(huán)素作用到（數(shù)據(jù)未顯示。當(dāng)?shù)脱蹰_始時，BALF中的對照小鼠的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的數(shù)量有明顯的增加，在2天的了抑制細(xì)胞滲透是由HO-1的特異性過度表達(dá)引起而非多西環(huán)素治療的人工作用（圖3C）。間歇性吸入CO（一天21小時250ppm的量）和/或注射膽綠素（一天2次每次50mol/kgIP）。以腹腔注射PBS作為對照。吸入CO或CO加膽綠素，而不是單獨注射膽綠素，較多西環(huán)素治療的含量可更有效地抑制炎癥細(xì)胞在BALF中的滲透（圖3C）。和4天的缺氧環(huán)境下，成纖維細(xì)胞生長因，IL-1，巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1α，IL-17，和IL-2的增加，以及Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-13IL-4也被觀察到發(fā)生這種現(xiàn)象了。Th1細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子，IL-12TNF-α均不受影響（網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)補充的圖2），干擾素-γ的含量未被檢測到（未顯示。多西環(huán)素給藥可在2天內(nèi)有效抑制成纖維細(xì)胞生長因子-β，IL-1β，巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1和IL-2；以及4天的缺氧下抑制IL-17，IL-13；還有只在4天的持續(xù)給藥后抑制IL-有趣的是，4天的缺氧后BALF分離的巨噬細(xì)胞離心涂片器上觀察到了巨噬細(xì)胞形態(tài)令人吃驚的蝕變，其以一噬細(xì)胞中觀察到（圖3D）。缺氧誘導(dǎo)活巨噬細(xì)胞交替性活化：HO-1的抑制效BALF中分離的CC77雙轉(zhuǎn)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞顯示M2型巨噬在細(xì)胞缺氧的小鼠體內(nèi)，標(biāo)記明確的反應(yīng)包括g1，F(xiàn)iz1，1（圖4，甘露糖受體，C型凝集素1（數(shù)據(jù)未顯示。在缺氧4天時數(shù)據(jù)的峰值出現(xiàn)，并至少保持上調(diào)14BALF中的缺氧小鼠分泌了zz（圖4B1RNATNFαL12βI12p40或共刺激分子CD80/86（通過網(wǎng)上的數(shù)據(jù)補充圖三（圖4Cg1g1RNA的含量經(jīng)過4天的低氧誘導(dǎo)達(dá)到9.1±3.4foldg2RNA含量在這個時間點的正常值是0.6±0.1-fold。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的活性如通過BALF中硝酸鹽和亞硝酸鹽的生產(chǎn)預(yù)期，將保持不變（圖4D。多西環(huán)素有效抑制所有標(biāo)記替代的激活（圖4A到4C，而這些標(biāo)記沒有多西環(huán)素抑制CCA小鼠群（圖4B和4C和網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)補充的圖4。免疫組化結(jié)果顯示，10.8±2.7%（35.5±8.9×103）的巨噬細(xì)胞zz1呈陽性，而有多西環(huán)素的存在，這個數(shù)字將減少到2.17±0.6%（5.1±1.4×103；0.01；圖5免疫熒光染色證實Fiz1定位和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在缺氧情況下存在于巨噬細(xì)胞胞漿中（圖5B和5C除了Th2細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-13和肺泡液中缺氧小鼠白細(xì)胞介素-4略微增加，我們還了其他非規(guī)范化的誘導(dǎo)的M2極化潛在因素。因此，我們用定量聚合酶鏈反應(yīng)測定整個肺提取物CCL2和白細(xì)胞介素-6RNA含量。CCL2和白細(xì)胞介素-6mRNA。缺氧下CCL2IL-6mRNA可以顯著上升，但在使用多西環(huán)素后明顯抑制(網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)補充的圖5A)。在缺乏HO-1轉(zhuǎn)的情況下，多西環(huán)素CCTA對照組治療不能抑制CCL2和白細(xì)胞介素-6的含量上升(網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)補充的圖5B)。有趣的是，初級肺泡巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)中缺氧條件(0.5%O2)下也M2表型含量的是Ym1，而不是IL-12與TNF-α(數(shù)據(jù)補充的圖6)，這說明升高潛在代表缺氧誘導(dǎo)，M2極化是一種細(xì)胞血紅素加氧酶-1促進(jìn)肺泡巨噬細(xì)胞IL-10的表為了進(jìn)一步探討巨噬細(xì)胞HO-1的作用，IL-10mRNA和蛋白含量，一個良好的抗炎介質(zhì)，可以直接在新鮮分離的肺泡巨噬細(xì)胞中進(jìn)行了評估。白細(xì)胞介素-10的含量在來源于多西環(huán)素肺泡巨噬細(xì)胞缺氧小鼠體內(nèi)明顯升此外，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的數(shù)量（CD11c+,IL-10+）在缺氧條件下的流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的治療效果比多西環(huán)素可增加至9倍，包括在肺泡巨噬細(xì)胞中少數(shù)＜10%的細(xì)胞（數(shù)據(jù)未顯示早期單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的是晚期肺動脈高壓發(fā)展的關(guān)鍵因若要確定這種早期的炎癥反應(yīng)是否是HPH的晚期發(fā)展的必要條件，和HO-1是否在定義的時間間隔內(nèi)，在此過程中是否誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)節(jié)這種疾病，我們把雙轉(zhuǎn)老鼠分各時段在多西環(huán)素中。此外，對照動物于低氧多西環(huán)素的環(huán)境中，連續(xù)工作3個星期，1組動物的窩收到多西環(huán)素，在其他2組中的3個星期中，在保持缺氧的條分別在第2天和第7天除去飲用水中的多西環(huán)在這三個星期內(nèi)所有組的動物都處于缺除多西環(huán)素后hHO-1mRNA含量在3日內(nèi)回到基線含量。(7A缺氧發(fā)病的初期，短短2天的多西環(huán)素處理下，巨噬細(xì)胞浸潤在支氣管肺泡液中的期延遲了2到7天，當(dāng)HO-1含量降低到基線(7A)的時候，同一組中的動物，肺動脈高壓，收縮壓，F(xiàn)ulton指數(shù)，內(nèi)壁厚度指數(shù)和組織血管重塑沒有減少(圖7C到7F)。然而在稍微長的一段時間內(nèi)，仍用多西環(huán)素給藥7天，有的時候沒有巨噬細(xì)胞大量涌入甚至在HO-1達(dá)成基準(zhǔn)含量以下，而且肺動脈高壓在三周內(nèi)完全被(圖7B到7F)。交替性巨噬細(xì)胞活化與體內(nèi)缺氧性肺動脈高壓的發(fā)展有關(guān)，而且能促進(jìn)體外肺動脈平滑肌細(xì)胞浸巨噬細(xì)胞數(shù)量與M2標(biāo)記遵循類似的模式(圖8A)組中經(jīng)過2天的低氧去除多西環(huán)素并且HPH沒能被防止，HO-1含量已經(jīng)降到基線后，F(xiàn)izz1，Arg1Ym1mRNA含量增加了4天(8A)。然而，在接受多西環(huán)素缺氧環(huán)境組的前7天后，高血壓發(fā)展受阻，用于所有時間段(圖8B)的Fizz1,Arg1和Ym1含量仍然一直被。有趣的是7天多西環(huán)素治療組中，抗炎標(biāo)記白細(xì)胞介素-10仍然持續(xù)高于基線(8A,8B)。在性肺泡巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)(0.5%O2)缺氧條件下，用CO(500ppm)(圖8C)處理后白細(xì)胞介素-10mRNA含量也被上調(diào)。這表明，CO釋放是該系HO-1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞白細(xì)胞介素-10誘導(dǎo)的觸發(fā)器。主要的肺泡巨噬細(xì)胞上清液，在缺氧(0.5%O2)或常氧條件下用白細(xì)胞介素-4(20ng/mL)體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞會產(chǎn)生高胞的上清液的Fizz1的含量降低和升高白細(xì)胞介素-10含量，對肺動脈平滑肌細(xì)胞的浸潤沒有影響(8D)。外源性的白細(xì)胞介素-10對巨噬細(xì)胞上清液治療肺動脈平滑肌細(xì)胞缺氧對其浸潤沒有直接的抑制作用，(圖七中僅聯(lián)機數(shù)據(jù)補充)。在白細(xì)胞介素-4和缺氧刺激巨噬細(xì)胞的刺Arg1，F(xiàn)izz1和Ym1mRNA的含量上升既不影響血小板衍生生長因子BB也不影響M1特異性標(biāo)志物中IL-12與TNF-α(圖8C，只有的數(shù)據(jù)補充和數(shù)據(jù)未顯示在圖六)療抑制這兩種用M2標(biāo)記的白細(xì)胞介素-4和缺氧刺激巨噬細(xì)胞的上調(diào)(圖8C，網(wǎng)上數(shù)據(jù)補充的圖6，討在我們雙轉(zhuǎn)小鼠模型中，我們證明缺氧引起的癥狀積累或者激活肺泡巨噬細(xì)胞，先于肺動脈高壓的發(fā)展，并出現(xiàn)在疾病的發(fā)病機制中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。HO-1的表達(dá)誘導(dǎo)開關(guān)在巨噬細(xì)胞極性對抗炎的表型中，并且這種效應(yīng)與HPH保護(hù)有關(guān)。29PH的研究強調(diào)了單核/822的表型。1,29該自主化細(xì)胞的2極化在體外缺氧條件下，在2種目前確認(rèn)標(biāo)記誘導(dǎo)2極化RNA含量上調(diào)CCL2和613在體內(nèi)的含量，而I13和L4細(xì)胞因子含量在小鼠缺氧BALF條件下支持像我們?nèi)毖跄Ｐ偷腗2的激活。此外，F(xiàn)iz1，2的特異性標(biāo)志物，是一種缺氧誘導(dǎo)的分子，還指定了缺氧誘導(dǎo)的促有絲因子。30然而，與我們的研究結(jié)果相反，TNFα31，L12和干擾素γ32這兩種先前的中出現(xiàn)的激素增加了缺氧巨噬細(xì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞在膿毒癥引起的缺氧模型中進(jìn)行，并進(jìn)行了二次研究腹腔巨噬細(xì)胞。2型巨噬細(xì)胞的存在與HL-脯氨酸的合成引起g1已被證明有助于血管損傷和重塑，在缺氧小鼠肺部g1的升高與H的嚴(yán)重程度的增加有關(guān)。33,34Fiz1最近已與有絲，血管生成和血管收縮的特性，以及與肺血管重塑有關(guān)。5,30,5與人類同源，類抵抗素分子β，也被發(fā)現(xiàn)與硬皮36PHFiz1的分泌有關(guān)。其過度表達(dá)被發(fā)現(xiàn)會導(dǎo)致AH的生成。5進(jìn)一步的研究需要從2型巨噬細(xì)胞可以在信號級聯(lián)導(dǎo)致PHTh2型細(xì)胞因子，如I6和CCL2，包括2，與人的肺疾病和AH動物模型有關(guān)3,6,37。并防止肺動脈高壓的后續(xù)發(fā)展。一氧化碳似乎是有效抑制HO-1BALF中巨噬細(xì)胞和抑制體外培養(yǎng)的M2指標(biāo)的表達(dá)的關(guān)鍵。這個觀察與以往的研究相似，HO-1和CO都有很強的抗炎作用的作用。7,25內(nèi)源性O(shè)-1上調(diào)是缺氧的一種補償機制，19但其短暫的上調(diào)并不足以防止缺氧引起的炎癥和H，只有持續(xù)增強的O1的表達(dá)才可以抑制PH7因此只增加了2天的多西環(huán)素只能暫緩炎癥卻不能PH的發(fā)展并不奇怪。1的誘導(dǎo)7PH7天的-1的增加可以抑制炎癥的反應(yīng)2周，直到O1的數(shù)量恢復(fù)到正常值。因為在巨噬細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)移發(fā)生在4天，我們推測，在這個關(guān)鍵時期，HO-1的作用可能為支點移向從炎性免疫到抑制免疫反應(yīng)的平衡。為了支持這個平衡，HO-1過度表達(dá)上調(diào)缺氧肺巨噬細(xì)胞IL-10并且增加IL-10的數(shù)量來調(diào)控–BALF中巨噬細(xì)胞數(shù)量。因為一氧化碳可以使體外培養(yǎng)的缺氧巨噬細(xì)胞增加IL-10，這似乎是一個主要的HO-1免疫效應(yīng)分子。與我們的發(fā)現(xiàn)一致，HO-1和外源性CO先前已像的那樣增加在體內(nèi)和體外巨噬細(xì)胞10的表達(dá)。25,38-有趣的是，IL-10甚至在HO-1表達(dá)恢復(fù)到基本線后兩周仍然在增加，這些結(jié)果，在免疫調(diào)節(jié)HO-1在表達(dá)被發(fā)現(xiàn)與保護(hù)野百合堿的大鼠的PAH有關(guān)。4我們發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞是IL-10的來源，但目前尚不清楚他們是否也有這種細(xì)胞因子靶。IL-10是一種多細(xì)胞活素的物質(zhì)，它可能在自分泌和旁分泌的方式上影響到許多不同類型的巨噬細(xì)胞。然而，IL-10沒有在我們的體外模型對肺動脈平滑肌細(xì)胞浸潤產(chǎn)生影響HO-1和CO也可能有獨立于IL-10的抗炎作用我們需要進(jìn)一步的研究來解釋在HPH的發(fā)展和持續(xù)的瞬間賦予免疫調(diào)節(jié)和保護(hù)機制IL-10通路的作用。結(jié)目前的研究表明2巨噬細(xì)胞活化和PH的增長之間有聯(lián)系在我們的研究結(jié)果的基礎(chǔ)上針對這類巨噬胞消除或滅活可以改善疾病的預(yù)后和提高H2抗炎治療的治療窗，避免長期的治療。致我們感謝拉在我們準(zhǔn)備手稿時的專業(yè)協(xié)助來這項工作是由國家衛(wèi)生機構(gòu)RO1HL055454和RO1HL085446（DRSkourembanas和mitsialis）。vergadi博士是部分由普羅基金（雅典，希臘）和希臘的國家獎學(xué)金為人類疾病的分子基礎(chǔ)研究會資助的（大學(xué)醫(yī)學(xué)院披無肺巨噬細(xì)胞的早期積累，使其在炎癥帶-1精氨酸酶-1中獲得了一個活化的被過度表達(dá)表征的M2表型。這些M2標(biāo)記 小鼠的肺特異性和血紅素加氧酶-1的誘導(dǎo)表達(dá)，我們證明了缺氧情況下巨噬細(xì)胞的 ，M2活化，和抗 來源，有助于觀測肺動脈高壓的重塑。重要的是，根據(jù)我們的發(fā)現(xiàn)，對肺血管的抗浸潤及抗高血壓的影響，M2的激圖1血紅素氧合酶-1（HO-1）的肺特異性、多西環(huán)素（Dox）調(diào)節(jié)式的表達(dá)。A，雙轉(zhuǎn)小鼠是由CCTA小鼠和TH77掩蓋了人在7個聯(lián)接于極小的巨細(xì)胞（CMV）啟動子的四環(huán)素子對照下的HO-1（hHO-1）。B，雙轉(zhuǎn)小鼠（cc77）用0.2或1mg/mL含dox飲用水進(jìn)行為期2到12天的治療，和在整個肺中對hHO1、管家、GADPH進(jìn)行半定量聚合酶鏈反應(yīng)分析，繪出。SHO1（肺上皮細(xì)胞表達(dá)hHO-1轉(zhuǎn)形變）和FVB（野生型）小鼠群分別作為陽性和對照。引物將發(fā)散區(qū)域的HO-1mRNA作為目標(biāo)，并且沒有放大內(nèi)源性小鼠HO-1轉(zhuǎn)錄物。C，對CC77和CCTA小鼠的整個肺部分泌物HO-1蛋白Westernblot分析。注意，使用來檢測的抗體都是多西環(huán)素調(diào)節(jié)人類HO-1和內(nèi)源性小HO-1的。血紅素氧合酶-2（HO-2）都被用來作為內(nèi)部對照。內(nèi)壁厚度指數(shù)（C）決定1mg/mL多西環(huán)素（Dox）含于CC77CCTA小鼠的飲用水的情況下測定不同時間的低氧。D，缺氧21天后小鼠肺組織中血管重塑及平滑肌肌動蛋白染色的代表圖像。CC77小鼠是雙轉(zhuǎn)?。–lara細(xì)胞分泌蛋白–反式作用四環(huán)素轉(zhuǎn)錄因子[CCSP-rtTA]×TH77）。CCTA小鼠是缺乏血紅素氧合酶-1的轉(zhuǎn)小鼠（CCSPrtTA）。數(shù)字mean±SD，N≥6每組?？潭葪l25μm.*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001正常氧相關(guān)；#P＜0.05，##P＜0.01，相對###P＜0.001缺氧-多西環(huán)素相關(guān)。3低氧誘導(dǎo)肺中早期單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞滲透被血紅素加氧酶-1（HO-1）改良。A，從BALF中分離CD45白細(xì)胞的的描繪，隨時間推移，BALF中的缺氧小鼠在缺乏（-）或飲用了（+）含1mg/mL多西環(huán)素飲用水。C，多西環(huán)素治療抑制了CC77小鼠，而非CCTA對照組，在BALF中缺氧誘導(dǎo)造成的2日內(nèi)使巨噬細(xì)胞達(dá)峰值的情況。HO-1產(chǎn)物（腹腔注射膽綠素[Bil]，吸入CO，BilCO組合）對巨噬細(xì)胞的積累的效果也顯示出來了。D，4天內(nèi)，未治療的小鼠它的一些BALF分離的巨噬細(xì)胞被觀察到了形態(tài)改變的現(xiàn)象，多西環(huán)素治療小鼠缺乏表型。數(shù)字代表mean±SD；每組小鼠n≥6?？潭戎?25μm.*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與正常氧量相關(guān)；#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001與圖4缺氧誘導(dǎo)或者交替性激活的巨噬細(xì)胞：血紅素加氧酶-1（HO-1）的抑制作用。A，對雙轉(zhuǎn)小鼠（CC77）分離癥（Arg1），和幾丁質(zhì)酶-3-類-3（Ym1）。B，對來自的正常氧鼠（Nrm）和四天多西環(huán)素低氧處理的小鼠或多西環(huán)（Hypdox）BALF的Fizz1進(jìn)行免疫印跡分析；IgA作為內(nèi)部控制對照。C，精氨酸酶活性（U/L）是以常氧和低氧動物產(chǎn)生的肺泡巨噬細(xì)胞中的尿素作為評估。D，誘導(dǎo)型一氧化氮合酶活性根據(jù)缺氧小鼠支氣管肺泡液中的亞硝酸鹽和硝酸鹽水平評估。RAW264.7巨噬細(xì)胞的上清液用100μg/ml大腸桿菌脂多糖（LPS）100U/mL干擾素-γ（INF-γ）刺激48小時作為陽性對照。mean±SD描述N≥6每組小鼠。*P＜0.05，**P＜0.01，*