半成品生產(chǎn)工藝

半成品生產(chǎn)工藝第一頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日種蛋我們生產(chǎn)半成品所用的種蛋是SPF蛋和非免蛋，生產(chǎn)凍干苗用的是SPF蛋，生產(chǎn)油苗用的是非免蛋。SPF是SpecificPathogenFree(無(wú)特定病原體）的縮寫。SPF種蛋不含有雞新城疫、雞傳染性法氏囊病等近20種疫病抗體，種蛋純凈，可避免外源病毒干擾，適于培養(yǎng)病毒，從而制成優(yōu)質(zhì)的SPF疫苗，產(chǎn)生良好的免疫效果，達(dá)到免疫防病的目的。非免疫種蛋也要求品系純正，雞群健康，無(wú)各種疫病。SPF疫苗和普通疫苗相比，其生產(chǎn)工藝過(guò)程完全一致，主要區(qū)別在于疫苗的內(nèi)在質(zhì)量。第二頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日種蛋的構(gòu)造種蛋由蛋殼、蛋殼膜、氣室、蛋白、蛋黃、系帶、胚胎七個(gè)部分組成(如圖1)。

1.蛋殼2.氣室3.外殼膜4、5.系帶6.濃蛋白

7.稀蛋白8.卵黃膜9.胚胎10.內(nèi)殼膜第三頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日

胚胎發(fā)育圖解未受精蛋

種蛋中通常被稱為“卵黃”的部分，實(shí)際上只是一個(gè)細(xì)胞，即雌性生殖細(xì)胞或卵子。卵黃絕大部分是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，細(xì)胞核和大部分細(xì)胞質(zhì)集中為一個(gè)不規(guī)則的小白點(diǎn)，浮于卵黃上面和卵黃膜的下面，如圖中箭頭所示。這種蛋雖經(jīng)孵化但不能發(fā)育，稱未受精蛋。

第四頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日受精蛋

雞的卵子在輸卵管的漏斗部與精子相遇而受精，受精卵在母體內(nèi)滯留期間不斷分裂，到種蛋產(chǎn)出體外時(shí)已分裂成一團(tuán)細(xì)胞，此時(shí)為胚胎發(fā)育的囊胚期。從正面看囊胚像覆蓋在卵黃表面的圓盤，中央為明區(qū)，邊緣為暗區(qū)，通常稱為胚盤。受精蛋第五頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第一天

第一胚齡照蛋第一胚齡解剖一日起了珠，魚(yú)眼黃中浮第六頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第二天

二日櫻桃起，心臟開(kāi)始動(dòng)。第二胚齡解剖

第七頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第三天

第三胚齡照蛋

第三胚齡解剖三日血管成，"蚊子"在黃中。第八頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第四天

第四胚齡照蛋第四胚齡解剖四日定了位，樣似小蜘蛛第九頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第五天

第五胚齡照蛋第五胚齡解剖五日長(zhǎng)軟骨，黑眼顯單珠第十頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第六天

第六胚齡照蛋

第六胚齡解剖六日胎盤動(dòng)，頭軀成雙珠第十一頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第七天

第七胚齡照蛋

第七胚齡解剖七日離了殼，沉人卵黃中第十二頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第八天

第八胚齡照蛋第八胚齡解剖八日邊口硬，胎在蛋內(nèi)浮第十三頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第九天

第九胚齡照蛋第九胚齡解剖九日嘴爪分，頭尾來(lái)回動(dòng)第十四頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十天

第十胚齡照蛋第十胚齡解剖

十日顯毛管，血管始加粗第十五頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十一天

第十一胚齡照蛋

第十一胚齡解剖十一腹毛生，尿囊全合攏第十六頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十二天

第十二胚齡照蛋第十二胚齡解剖十二毛長(zhǎng)齊，上下顎分明第十七頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十三天

第十三胚齡照蛋第十三胚齡解剖十三軀體長(zhǎng)，氣室分外明第十八頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十四天

第十四胚齡照蛋

第十四胚齡解剖十四蛋白少，白朝嘴里進(jìn)第十九頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十五天

第十五胚齡照蛋

第十五胚齡解剖十五體長(zhǎng)大，頭朝大端伸第二十頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十六天

第十六胚齡照蛋

第十六胚齡解剖十六絨毛爽，骨長(zhǎng)鱗爪呈第二十一頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十七天

第十七胚齡照蛋第十七胚齡解剖十七肺發(fā)育，小端已封門第二十二頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十八天

第十八胚齡照蛋第十八胚齡解剖十八已斜口，雞雛待轉(zhuǎn)身第二十三頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第十九天

第十九胚齡照蛋第十九胚齡解剖十九見(jiàn)起影，已行肺呼吸第二十四頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第二十天

第二十胚齡照蛋

第二十胚齡解剖二十聞鳴叫，陸續(xù)破殼膜第二十五頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日第二十一天

二十一小雞出，發(fā)育始結(jié)束第二十六頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日種蛋的標(biāo)準(zhǔn)新鮮度：夏秋季在3日內(nèi)，冬春季自7日內(nèi)對(duì)種蛋新鮮度檢查，可抽取種蛋打開(kāi)，放入干凈的玻璃平皿中，新鮮的種蛋蛋黃隆起，蛋白濃稠；不新鮮的種蛋蛋黃相對(duì)扁平，蛋白相對(duì)稀薄。種蛋內(nèi)部物理性狀的檢查采用照蛋的方法，主要查看種蛋氣室的大小、是否流動(dòng)以及蛋黃蛋白的狀況。新鮮的種蛋氣室較小，蛋黃呈暗紅色或暗黃色。蛋黃發(fā)黑、氣室流動(dòng)的種蛋會(huì)影響孵化率，要棄去。第二十七頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日種蛋標(biāo)準(zhǔn)蛋重60±5克/枚，氣室部位正常。受精率92%以上，中止率在5%以下，利用率90%以上。表面圓滑呈卵圓形，無(wú)畸形無(wú)沙殼，長(zhǎng)軸60±2mm，短軸45±2mm。蛋殼厚度要均一，一般在0.33—0.35mm之間，過(guò)薄的蛋殼接種時(shí)易破碎，過(guò)厚、堅(jiān)硬的“鋼殼蛋”進(jìn)行接種時(shí)難以做孔，不宜選用。第二十八頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日種蛋標(biāo)準(zhǔn)種蛋必須要求保持蛋殼清潔，有光澤且無(wú)裂痕，污殼蛋不僅容易被微生物侵入蛋內(nèi)，引起敗壞，而且污物會(huì)堵塞氣孔，影響氣體交換，孵化時(shí)導(dǎo)致胚胎死亡，降低孵化率。種蛋保存要點(diǎn)：雞蛋蛋白的凝結(jié)點(diǎn)為零下0.5℃，而當(dāng)溫度高于23.9℃時(shí)，蛋內(nèi)胚胎就開(kāi)始萌動(dòng)，因此保存種蛋最適宜的溫度為10℃至15℃，最適宜的相對(duì)濕度為70%至80%。第二十九頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日接種圖4五日檢各種種蛋的情況A.

無(wú)精蛋B.死胚蛋C.弱精蛋D.正常蛋1.氣室2.卵黃3.血圈4.血管5.胚胎6.眼睛第三十頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日雞胚的結(jié)構(gòu)第三十一頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日

尿囊腔的接種接種方法孵育10～11日齡的雞胚，經(jīng)照視后，劃出氣室及胚胎位置，在胚胎的一側(cè)，避開(kāi)大血管，在距離氣室邊緣2mm處畫接種點(diǎn)。用酒精棉球消毒接種點(diǎn)，以鋼錐在接種點(diǎn)內(nèi)打一小孔，針頭沿孔垂直插入氣室，進(jìn)入尿囊，向尿囊腔內(nèi)注入0.1～0.2mL病毒懸液，拔出針頭,直立孵化。孵化期間，每日照蛋，觀察胚胎存活情況。棄去接種后24h內(nèi)死亡的雞胚。

第三十二頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日尿囊腔接種第三十三頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日卵黃囊接種法接種方法選用6～8日齡雞胚，劃出氣室和胚胎位置，垂直放置在固定的卵架上，用酒精棉消毒氣室端，在氣室的中央打一小孔，針頭沿小孔垂直刺入約3cm，向卵黃囊內(nèi)注入0.1～0.5mL病毒液。拔出針頭,直立孵化3～7d。孵化期間，每日照蛋，觀察胚胎存活情況。棄去接種后24h內(nèi)死亡的雞胚。

第三十四頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日卵黃囊接種第三十五頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日絨毛尿囊膜接種法接種方法選10～12日齡雞胚，經(jīng)照視后劃出氣室位置并消毒。在胚胎附近略近氣室處，選擇血管較少的部位打一孔，另外，在氣室的頂端鉆一小孔，用橡皮乳頭緊貼氣室小孔，向外吸氣，使卵窗部位的絨毛尿囊膜下陷形成一小凹，造一個(gè)人工氣室。用膠布封住氣室頂端的小孔，用酒精棉消毒卵窗部的卵殼，用注射器注射病毒液于絨毛尿囊膜上。接種部位朝上橫臥孵化，不許翻動(dòng)。每日孵育檢查，經(jīng)48～96h，病變發(fā)育明顯，雞胚可能受感染死亡。第三十六頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日絨毛尿囊膜接種第三十七頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日羊膜腔接種法接種方法選12～14日齡雞胚，經(jīng)照視后劃出氣室位置并消毒，按絨毛尿囊膜接種法造成人工氣室，撕去卵殼膜，用無(wú)菌鑷子夾起絨毛尿囊膜，在無(wú)大血管處切一0.5cm小口。用滅菌鑷子夾起羊膜，針頭刺破羊膜進(jìn)入羊膜腔，注入毒液0.1～0.2mL。橫臥孵化，每日檢查發(fā)育情況，24h內(nèi)死亡者棄去。通常培養(yǎng)3～5d。第三十八頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日羊膜腔接種第三十九頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日接種法我們通常用的是尿囊腔接種法。由尿囊腔接種病毒時(shí)，應(yīng)根據(jù)不同的病毒培養(yǎng)所需要的時(shí)間選擇最恰當(dāng)?shù)慕臃N胚齡，以獲得最高量病毒液。同時(shí)，接種操作應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)定，不應(yīng)傷及胚體和血管，以免影響其發(fā)育，使病毒繁殖數(shù)度降低或停止。第四十頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日孵育和觀察雞新城疫低毒力LaSota活疫苗雞胚接種后，每日照蛋1次，將在60小時(shí)前死亡的雞胚棄去。60小時(shí)后，每4--8小時(shí)照蛋1次，死亡的雞胚隨時(shí)取出，直至96或120小時(shí)，不論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，至于2—8℃冷卻。第四十一頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日孵育和觀察雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗雞胚接種后，72小時(shí)前每日照蛋1次，棄去死胚，72小時(shí)后每4--8小時(shí)照蛋一次，將死亡的雞胚隨時(shí)取出，至96---120小時(shí)，無(wú)論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置2—8℃冷卻。第四十二頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日孵育和觀察雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗雞胚接種后，72小時(shí)前每日照蛋1次，棄去死胚，72小時(shí)后每4--8小時(shí)照蛋一次，將死亡的雞胚隨時(shí)取出，至96---120小時(shí)，無(wú)論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置2—8度冷卻。第四十三頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日孵育和觀察雞傳染性支氣管炎活疫苗雞胚接種后，30小時(shí)前照蛋一次，棄去死胚，收取30--36小時(shí)的活胚，氣室向上直立，至于2—8℃中冷卻4—24小時(shí)。第四十四頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日孵育和觀察雞新城疫中等毒力I系活疫苗接種24小時(shí)后，每4小時(shí)照蛋一次，直48小時(shí)，死亡的雞胚隨時(shí)取出，氣室部向上，在2--8℃中冷卻，接種后24小時(shí)前及48小時(shí)死亡者棄去不用。第四十五頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日孵育和觀察雞新城疫等毒力I系活疫苗接種24小時(shí)后，每4小時(shí)照蛋一次，直48小時(shí)，死亡的雞胚隨時(shí)取出，氣室部向上，在2--8度中冷卻，接種后24小時(shí)前及48小時(shí)死亡者棄去不用。第四十六頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日孵育和觀察雞傳染性法氏囊病中等毒力活疫苗接種后，將36小時(shí)前死亡的雞胚棄去，36小時(shí)后，每隔4--8小時(shí)照蛋一次，隨時(shí)取出48---168小時(shí)內(nèi)死亡雞胚，置2—8℃冷卻。第四十七頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日孵育和觀察雞傳染性喉氣管炎活疫苗接種后4--5日剔出死亡雞胚，將活胚冷卻致死。如采用尿囊腔接種，從72小時(shí)起，應(yīng)注意觀察雞胚絨毛尿囊膜病變發(fā)展情況，可觀察到絨毛尿囊膜有分散的病斑，當(dāng)絨毛尿囊膜逐漸增厚，透光度減弱時(shí)，可先后取出雞胚冷卻。第四十八頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日收獲

根據(jù)不同病毒，收獲不同時(shí)間內(nèi)死亡或存活的雞胚尿囊液和羊水。收獲時(shí)，通常在收獲前將雞胚于4度放置6小時(shí)或過(guò)夜或-20度放置0.5--1小時(shí)，使血液凝固，以免收獲時(shí)流出的細(xì)胞與尿囊液或羊水中的病毒發(fā)生凝聚，造成病毒低度下降。然后消毒氣室部蛋殼，以無(wú)菌手術(shù)剝出氣室部卵殼，揭去卵殼膜，剪破絨毛尿囊膜及羊膜（勿使卵黃破裂），再用滅菌吸管插入尿囊腔，吸取尿囊液和羊水，每若干個(gè)雞胚的胚液混合為一組。收獲后的胚液置于滅菌瓶中，加入適宜的抗生素，無(wú)檢，留樣后，結(jié)凍保存。在收獲胚液的同時(shí)，應(yīng)逐個(gè)檢查雞胚，如胎兒腐敗、胚液混濁及有任何污染可疑者棄去不用。第四十九頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日病變及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)雞新城疫低毒力LaSota活疫苗胎兒病痕：在接種后72小時(shí)前后死亡的雞胚，多為全身充血；72--120小時(shí)死亡的雞胚，除有全身充血外，在頭、胸、背、翅及趾端有出血點(diǎn)；在120小時(shí)以后死亡的雞胚除有上述病痕外，或呈發(fā)育不全、卷曲成團(tuán)、失水干硬等病變。每0.1ml病毒含量>108.0EID50者可用于配制疫苗。第五十頁(yè)，共五十三頁(yè)，2022年，8月28日病變及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)雞傳染性支氣管炎活疫苗胎兒病痕：胎兒具有失水、蜷縮、發(fā)育小等特異性病痕每0.1ml病毒含