自身抗體的應(yīng)用及研究進(jìn)展課件

自身抗體的應(yīng)用及研究進(jìn)展

2011-04-132酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

1間接免疫熒光法（IFAIndirectFluorescentAssay

）3免疫印跡法（IB）WesternblotLIA4其它：IDA、RIA等全自動自身抗體分析儀自動化檢測檢測定量化單個項目隨時檢測多個項目同時檢測45-90分鐘報告結(jié)果原廠質(zhì)控和校正血清精確溫度調(diào)控系統(tǒng)五點定標(biāo)、三重檢測風(fēng)濕病的實驗室診斷血清學(xué)檢查

自身抗體——特異性非特異的免疫相關(guān)指標(biāo)滑液分析一般的實驗室檢查項目項目檢驗方法SLE四項

ANA間接免疫熒光抗DS－DNA抗體間接免疫熒光抗組蛋白抗體ELISA抗核小體抗體ELISAENA系列

抗RNP免疫印跡、ELISA抗SM免疫印跡、ELISA抗SSA免疫印跡、ELISA抗SSB免疫印跡、ELISA抗JO-1免疫印跡、ELISA抗SCL-70免疫印跡、ELISA抗核糖體P蛋白免疫印跡、ELISARA三項

AKA（抗角質(zhì)蛋白抗體）間接免疫熒光抗RA33ELISA抗CCP（抗環(huán)瓜氨酸肽抗體）ELISAANCA四項

P-ANCA（熒光模型為核周模型）間接免疫熒光C-ANCA（熒光模型為細(xì)胞質(zhì)模型）間接免疫熒光MPO-ANCA（髓過氧化酶抗體）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗體）ELISA常見的自身抗體及其檢測方法(1)(2)自身免疫肝炎七項

ANA間接免疫熒光抗LMA抗（肝細(xì)胞膜抗體）間接免疫熒光ASMA（抗平滑肌抗體）間接免疫熒光抗LKM（抗肝腎微粒體抗體）間接免疫熒光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗體）間接免疫熒光AMA（線粒體抗體）間接免疫熒光抗LSP（抗肝臟特異性蛋白抗體）間接免疫熒光RF三項

RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂綜合征三項（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗體）ELISAPT-IgMELISA抗β2-糖蛋白1抗體ELISA常見的自身抗體及其檢測方法(一)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）

類風(fēng)濕因子（RF）早期診斷的系列指標(biāo)抗RA33/36抗體 抗核周因子（APF）抗角蛋白抗體（AKA）抗Sa抗體抗環(huán)瓜氨酸抗體（抗CCP）

類風(fēng)濕因子（RF）抗人IgG分子Fc片段上抗原決定簇的特異性抗體,分為IgM、G、A、E型RF在RA中的陽性率為70%~８０％，是診斷RA的重要標(biāo)準(zhǔn)之一RF含量與病情的活動性和嚴(yán)重性成正比，持續(xù)高滴度的RF常提示RA病情活動，骨侵蝕發(fā)生率高，?？砂橛衅は陆Y(jié)節(jié)或血管炎等關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，提示預(yù)后不良類風(fēng)濕因子（RF）RF并非RA獨有的特異性抗體，對RA的診斷不具特異性

SLE30%SS70%~90%

SSc20%~30%MCTD50%~60%

非風(fēng)濕性疾病

5%以下的正常人RF陽性不等于一定就是RARF陰性也不等于一定就不是RARF常用檢測方法RF 1：40陽性乳膠凝集法（測IgM-RF）RF256Iu/ml雙抗夾心ElISA法(測總RF）RF-IgG 110IU/ml -IgA 18IU/ml ELISA法

-IgM200IU/mlRA早期診斷的系列指標(biāo)

敏感性特異性抗RA33/36抗體35.8%99.6%APF40%-80%70%-90%AKA40%-55%85%-95%抗Sa抗體40%-60%98.6%抗CCP46%-70%96%抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP）瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微絲蛋白相關(guān)抗體的主要抗原決定簇對RA診斷具有高度特異性（98%）可在RA早期出現(xiàn)預(yù)測早期關(guān)節(jié)炎發(fā)展為RARA關(guān)節(jié)侵蝕破壞的早期識別及預(yù)測抗核抗體（ANA）定義——以細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)為抗原的抗體臨床意義①SLE的篩查抗體:

95%陽性，但滴度與SLE活動性無相關(guān)陰性基本可排除SLE②陽性并非SLE特異陽性并非風(fēng)濕病特異:——風(fēng)濕?。⊿LE、SSc、SS、RA)

非風(fēng)濕性疾?。ǜ腥?、慢肝、肺纖維化、腫瘤）服用某些藥物（INH、苯妥英鈉、肼苯達(dá)嗪、普魯卡因酰胺）

抗核抗體（ANA）方法——間接免疫熒光法結(jié)果判斷:①滴度〉1：100為陽性②常見核型——5種不同核型的臨床意義不同

核膜型與抗ds-DNA有關(guān)，多見于SLE，特別是有腎炎者

均質(zhì)型與AHA（抗組蛋白抗體）、抗DNA有關(guān)，引起LE形成主要見于SLE、藥物性狼瘡

著絲點型多見于CREST綜合征ANA常見五種核型及臨床意義核膜型——與抗ds-DNA有關(guān)，多見于SLE，特別是有腎炎者均質(zhì)型——與AHA、抗DNA有關(guān)，引起LE形成主要見于SLE、藥物性狼瘡斑點型——與抗ENA有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步查特異性抗體核仁型——多見于硬皮病著絲點型——多見于CREST綜合征ANA檢測方法間接免疫熒光法印跡法ELISA法抗ds-DNA抗體臨床意義①對SLE的診斷有較高特異性②滴度與SLE活動相關(guān)，可作為病情監(jiān)測及療效觀察指標(biāo)③與SLE腎損害有關(guān)檢測方法①放免法（Farr)——敏感，有利于早期預(yù)測檢測高親合力的抗ds-DNA②間接免疫熒光法(IF)——特異③ELISA——可檢測低親合力的抗ds-DNA

有助于中樞狼瘡的病情監(jiān)測④金標(biāo)免疫斑點法抗ENA抗體抗RNPMCTD100%陽性，且滴度高 雙手腫脹，雷諾現(xiàn)象，肌炎，指（趾）端硬化 腎臟保護(hù)性抗體？抗SmSLE的標(biāo)記性抗體，陽性率30%

有助于早期、不典型及治療緩解后SLE的回顧性診斷 抗Sm陽性一定伴抗RNP陽性，但抗RNP陽性可單獨存在抗SSA①原發(fā)性SS：60-75%SLE:40-50% ②與皮損、光過敏、白細(xì)胞減少、淋巴結(jié)腫大、血管炎、紫癜相關(guān)③可造成新生兒狼瘡、嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯抗SSB ①原發(fā)性SS：40%，較抗SSA更特異 ②其它CTD伴抗SSB者常伴繼發(fā)性SS(三)皮肌炎/多發(fā)性肌炎（PM/DM）免疫學(xué)檢查ANAENA——抗Jo-1陽性其它檢查——肌酶譜肌酸磷酸激酶（CPK）:MM-心肌和骨骼肌

MB-心肌

BB-平滑肌和腦內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）堿性磷酸酶（ALP）(四)干燥綜合征（SS）ANA——陽性率40%~70%ENA——抗SSA抗體陽性率70%~96%

抗SSB抗體陽性率50%~87%抗α-Fordrin——對于pSS或sSS的診斷有一定意義，但特異性和敏感性并不理想。RF——陽性率75%~100%高球蛋白血癥WBC下降(五)系統(tǒng)性硬化?。╬SS）ANA——陽性率50%~55%ENA——抗Scl-70陽性率15%~40%抗著絲點抗體(ACA)陽性(六)混合性結(jié)締組織?。∕CTD）ANA陽性ENA——抗RNP高滴度陽性（七）血管炎

抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）熒光圖譜分型主要抗原成分胞漿型cANCA核周型pANCA蛋白酶3（PR3）髓過氧化物酶（MPO）非典型型（cANCA）不清ANCA的臨床意義c-ANCA和PR3-ANCA

對韋格納肉芽腫有高度特異性（95%），敏感性80%

與病情活動性相關(guān)常作為判斷藥物療效和病情復(fù)發(fā)的指標(biāo)p-ANCA和MPO-ANCA

不如c-ANCA具有診斷特異性陽性者血管炎程度較高，其滴度也與病情活動相關(guān)主要與顯微鏡下多血管炎

壞死性新月體腎小球腎炎

變應(yīng)性肉芽腫性血管炎相關(guān)（八）抗磷脂抗體綜合征（APS）是一種非炎癥性自身免疫病，臨床上以動/靜脈血栓形成、習(xí)慣性流產(chǎn)和血小板減少等癥狀為表現(xiàn)，血清中存在抗磷脂抗體血清學(xué)檢查抗心磷脂抗體（ACA）——IgG、IgM、IgA（ELISA）抗β2糖蛋白1抗體（抗β2-GP1)狼瘡抗凝物（LA）——凝血酶原時間（PT）激活的部分凝血活酶時間（APTT）白陶土凝集時間（KCT）蛇毒試驗（αRVVT）抗磷脂抗體抗β2-GP1抗體比LA和ACA在APS患者中更具有特異性，是導(dǎo)致APS的主要抗體抗β2GP1抗體只出現(xiàn)于自身免疫性疾病,而ACA也可出現(xiàn)于一些感染性疾病,如梅毒、AIDS、肝炎、結(jié)核等（九）自身免疫性肝病我科開展的自身免疫肝炎系列抗體包括：抗核抗體（ANA）抗肝細(xì)胞膜抗體(抗LMA)抗平滑肌抗體（ASMA）抗肝腎微粒體抗體（抗LKM抗體）抗肝-胰抗體(抗LP抗體)抗可溶性肝細(xì)胞抗體（抗SLA）抗線粒體抗體（AMA）自身免疫性肝炎（AIH）

ANA

抗平滑肌抗體（SMA）抗肝腎微粒體抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）

抗線粒體抗體（AMA）——M2原發(fā)性硬化性膽管炎

ANCA陽性自身免疫性肝病風(fēng)濕病的實驗室診斷自身抗體——特異性非特異的免疫相關(guān)指標(biāo)一般的實驗室檢查項目血常規(guī)尿常規(guī)肝功能腎功能等注意事項選擇做哪些檢查項目時要重點突出避免“大撒網(wǎng)”解釋實驗結(jié)果時應(yīng)考慮以下幾個問題實驗方法本身的敏感性、特異性、可靠性及實驗室之間的差異性結(jié)合臨床應(yīng)把與之相關(guān)的一組實驗結(jié)果放在一起考慮全國自身抗體檢測質(zhì)量控制總結(jié)

由中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病分會計劃參與質(zhì)控