化妝品微生物五項(xiàng)檢測

化妝品微生物五項(xiàng)檢測第1頁/共29頁菌落總數(shù)（Aerobicbacterialcount）：化妝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、需氧性質(zhì)等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)。菌落總數(shù)檢驗(yàn)菌落總數(shù)的測定便于判明樣品被細(xì)菌污染的程度，是對樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評價(jià)的綜合依據(jù)。第2頁/共29頁48小時(shí)出結(jié)果（30-300）：測試流程數(shù)據(jù)處理混合平板的制備細(xì)菌的培養(yǎng)檢查結(jié)果、觀察與計(jì)數(shù)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單第3頁/共29頁為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂中加入1mL

0.5％的TTC溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。TTC亦不可多加會(huì)抑制菌落生長第4頁/共29頁推薦了解：人員培訓(xùn)能力掌握的檢驗(yàn)重要指標(biāo)。有條件可做視具體樣品測試結(jié)果。在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測時(shí)不易洗脫下來,因此,需要驗(yàn)證檢測方法的有效性。接種陽性菌計(jì)算回收率第5頁/共29頁未檢出2天，檢出3-4天耐熱大腸菌群Thermotolerantcoliformbacteria系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃培養(yǎng)24h—48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。該菌主要來自人和溫血?jiǎng)游锛S便，可作為糞便污染指標(biāo)來評價(jià)化妝品的衛(wèi)生質(zhì)量,推斷化妝品中有否污染腸道致病菌的可能。耐熱大腸菌群

檢驗(yàn)操作流程第6頁/共29頁產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣書寫檢驗(yàn)記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增菌培養(yǎng)供試液的制備配培養(yǎng)基和稀釋液檢查結(jié)果判斷44.5±0.5℃24-48h分離培養(yǎng)蛋白胨水培養(yǎng)最終結(jié)果判斷44.5±0.5℃24±2h靛基質(zhì)特征菌落36±1℃18~24h雙倍膽鹽乳糖EMB瓊脂液面玫瑰紅色紫黑色★糞大腸菌群檢查流程圖鏡檢第7頁/共29頁結(jié)果報(bào)告根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性，則可報(bào)告被檢樣品中檢出耐熱大腸菌群。第8頁/共29頁未檢出2天，檢出4天銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。銅綠假單胞菌

檢驗(yàn)操作流程該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。在自然界中分布甚廣，空氣、水、土壤第9頁/共29頁最終結(jié)果判斷增菌培養(yǎng)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液革蘭染色、鏡檢→氧化酶試驗(yàn)綠膿菌素試驗(yàn)生化試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn)

42℃生長試驗(yàn)明膠液化試驗(yàn)★銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLP培養(yǎng)基十六烷三甲基溴化銨瓊脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍(lán)綠色素鏡檢第10頁/共29頁十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培養(yǎng)基黃綠色菌膜灰白色濕潤氧化酶試驗(yàn)粉紅/紫紅色第11頁/共29頁綠膿菌素試驗(yàn)鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍(lán)綠色硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)N2明膠液化試驗(yàn)明膠培養(yǎng)基（高層）明膠液化第12頁/共29頁被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)皆為陽性者，即可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長試驗(yàn)三者皆為陽性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。結(jié)果報(bào)告第13頁/共29頁未檢出2天，檢出3天金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。金黃色葡萄球菌

檢驗(yàn)操作流程該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強(qiáng)的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致敗血癥。第14頁/共29頁革蘭染色、鏡檢→生化試驗(yàn):血漿凝固酶試驗(yàn)甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)最終結(jié)果判斷增菌培養(yǎng)供試品的處理書寫檢驗(yàn)記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養(yǎng)基和稀釋液36±1℃36±1℃SCDLP培養(yǎng)基或7.5%NaCl肉湯24±2hBairdParker’s或血瓊脂24~48h特征菌落金黃色葡萄球菌檢查流程圖鏡檢耐鹽分第15頁/共29頁BairdParker’s平板灰/黑色血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝塊液態(tài)血漿甘露醇高鹽瓊脂第16頁/共29頁凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗(yàn)陽性者，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。結(jié)果報(bào)告第17頁/共29頁霉菌和酵母菌數(shù)測定（Determinationofmoldsandyeastcount）化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。本方法根據(jù)霉菌和酵母菌特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性，在虎紅培養(yǎng)基上，置28℃±2℃培養(yǎng)5d，計(jì)算所生長的霉菌和酵母菌數(shù)。（5-50）霉菌和酵母菌

檢驗(yàn)操作流程第18頁/共29頁革蘭氏染色操作流程第19頁/共29頁設(shè)備：恒溫培養(yǎng)設(shè)備高壓滅菌器（驗(yàn)證）超凈工作臺（生物安全柜）均質(zhì)器(旋渦混合器)天平（0.1g）顯微鏡（可要可不要無硬性要求）保證檢驗(yàn)結(jié)果正確第20頁/共29頁常規(guī)潔凈工作臺設(shè)置第21頁/共29頁目前大部分微生物實(shí)驗(yàn)室布局第22頁/共29頁人員操作方面：無菌操作，避免污染；一定專業(yè)技術(shù)或工作經(jīng)驗(yàn)（招聘與外部審核時(shí)）相互協(xié)作；測試結(jié)果的證明。第23頁/共29頁日常維護(hù)：設(shè)備的計(jì)量與保證；超凈臺及時(shí)清潔與殺菌（操作前后半小時(shí)）；檢驗(yàn)后材料的及時(shí)處理；環(huán)境衛(wèi)生（沉降菌的檢測每周）。第24頁/共29頁油性樣品如何處理稀釋液生理鹽水-極性溶劑、液體石蠟-非極性溶劑、吐溫80-非離子型表面活性劑，分子一端是親水基團(tuán)，一端是親油基團(tuán)，常用作增溶劑和油/水乳化劑。決定了加入的順序。問題2第25頁/共29頁微生物許可檢驗(yàn)項(xiàng)目問題3檢驗(yàn)項(xiàng)目非特殊用途化妝品特殊用途化妝品育發(fā)類染發(fā)類燙發(fā)類脫毛類美乳類健美類除臭類祛斑類防曬類菌落總數(shù)○○

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○○耐熱大腸菌群○○

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○○金黃色葡萄球菌○○

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○○銅綠假單胞菌○○

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○○霉菌和酵母菌○○

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○○第26頁/共29頁④一個(gè)樣品包裝內(nèi)有兩個(gè)以上獨(dú)立小包裝或分隔（如粉餅、眼影、腮紅等