土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

第1部分專題2課題2理解教材新知把握熱點(diǎn)考向應(yīng)用創(chuàng)新演練知識點(diǎn)一知識點(diǎn)二考向一考向二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!科目一考試/2016年科目一模擬考試題科目二考試2016年科目二考試技巧、考試內(nèi)容、考試視頻土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!稀釋涂布平板稀釋度活菌土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!圓褐固氮菌生活于土壤中，能以氮?dú)庾鳛榈?。請?zhí)接?、交流?shí)驗(yàn)室分離圓褐固氮菌的方法。提示：配制無氮培養(yǎng)基作為選擇培養(yǎng)基。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目

(1)稀釋涂布平板法：①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。②注意事項(xiàng)：

a．設(shè)置重復(fù)組：同一稀釋度下，至少涂布3個平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。分析結(jié)果時，需考慮重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!b．設(shè)置對照：目的是排除實(shí)驗(yàn)中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)的可信度。③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M。

C：代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)。

V：代表涂布平板時所用的稀釋液的體積。

M：代表稀釋倍數(shù)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!④計(jì)算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!30～300溫度時間數(shù)目穩(wěn)定土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!2．菌種鑒定

(1)原理：分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為

，使培養(yǎng)基的

增強(qiáng)。

(2)方法：在以

為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入

指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變

，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。氨堿性尿素酚紅紅土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!

[跟隨名師·解疑難]1．操作中的注意事項(xiàng)

(1)無菌操作：鐵鏟和信封都要滅菌。稱取土壤、將稱好的土樣倒入錐形瓶、稀釋土壤溶液，每一步都要在酒精燈的火焰旁進(jìn)行。

(2)做好標(biāo)記：如在培養(yǎng)皿上注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期以及培養(yǎng)樣品的稀釋度等。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物提供碳源的是________，提供氮源的是________。

(2)絕大多數(shù)微生物都能利用________，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解________。

(3)分析該培養(yǎng)基的配方，該培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!(1)病毒為非細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物體，專營活細(xì)胞內(nèi)寄生生活，目前不能利用人工培養(yǎng)基來培養(yǎng)。

(2)能夠在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物不一定是實(shí)驗(yàn)所需要的微生物，因?yàn)橛行┪⑸锟衫闷渌⑸锏拇x產(chǎn)物進(jìn)行生長繁殖，因此還需要對分離后的微生物進(jìn)行鑒定。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!1.測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平

板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。

2．稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計(jì)活菌的數(shù)目，

但統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往比活菌數(shù)目低。3．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基分離該細(xì)菌。4．鑒定分解尿素細(xì)菌的方法是在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，據(jù)是否變紅進(jìn)行判斷。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!

[自讀教材·夯基礎(chǔ)]1．篩選菌株的思路

(1)自然界中目的菌株的篩選：①依據(jù)：根據(jù)它對

的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。②實(shí)例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的

，就是從熱泉中篩選出來的Taq細(xì)菌中提取出來的。生存環(huán)境TaqDNA聚合酶土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!(2)實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選：①原理：人為提供有利于

生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時

其他微生物的生長。②方法：利用選擇培養(yǎng)基分離。

a．選擇培養(yǎng)基：允許

微生物生長，同時

其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。

b．實(shí)例：選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基，以

作為唯一氮源，只有能合成

的微生物才能分解尿素。目的菌株抑制或阻止特定阻止或抑制尿素脲酶土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!②計(jì)數(shù)原則：一般選擇菌落數(shù)在

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。③結(jié)果分析：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目

。原因是當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是

。

(2)其他方法：利用

直接計(jì)數(shù)。30～300低一個菌落顯微鏡土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!

[跟隨名師·解疑難]1．選擇培養(yǎng)基的類型及作用

(1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。如加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。這里的加入指的是在培養(yǎng)基的培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入。

(2)改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。如培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可以分離固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時，也具有分離效果。

(3)改變微生物的培養(yǎng)條件。如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁![特別提醒]

教材中的實(shí)例說明了設(shè)置重復(fù)組的重要性。位同學(xué)只涂布了1個平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3個平板，但是，其中1個平板的計(jì)數(shù)值結(jié)果與另2個相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：①原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。②缺點(diǎn)：不能區(qū)分細(xì)菌的死活。③方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定的面積為1mm2和高為0.1mm的計(jì)數(shù)室，在1mm2的面積里又被劃分成25個(或16個)中格，每個中格進(jìn)一步劃分成16個(或25個)小格，但計(jì)數(shù)室都是由400個小格組成的。如圖所示。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁![自讀教材·夯基礎(chǔ)]有機(jī)質(zhì)中性3～8cm土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!(4)計(jì)數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，取同一

下的3個平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，求出

，并根據(jù)所對應(yīng)的

計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目稀釋度平均值稀釋度土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!1．當(dāng)次測定時為什么要將稀釋的范圍放寬一些？提示：為確保能從中選擇出菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2．為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果？提示：防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!2．結(jié)果分析與評價(jià)

(1)培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落：對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。

(2)樣品的稀釋操作是否成功：如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。

(3)重復(fù)組的結(jié)果是否一致：如果不同同學(xué)選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，需要分析產(chǎn)生差異的原因。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁![例1]下表是培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基配方，請回答下面的問題：編號成分含量①KH2PO41.4g

②Na2HPO42.1g

③MgSO4·7H2O0.2g

④葡萄糖10.0g

⑤尿素1.0g

⑥瓊脂15.0g

將上述物質(zhì)溶解后，用自來水定容到1000mL土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁![解析]碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)，所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。該培養(yǎng)基的配方中含有凝固劑——瓊脂，所以，配制的一定為固體培養(yǎng)基。絕大多數(shù)生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對微生物有選擇作用。選擇的原理是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。

[答案]

(1)葡萄糖尿素

(2)葡萄糖尿素

(3)該培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以分離得到產(chǎn)生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)共33頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!結(jié)果分析：

(1)測定的大腸桿菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是(

)A．一個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是23B．兩個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是22和26，取平均值24C．三個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26D．四個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、