微生物純培養(yǎng)的分離方法

關(guān)于微生物純培養(yǎng)的分離方法第1頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四微生物純種分離將多種混雜微生物，經(jīng)某種技術(shù)或方法分離成純種的過程純培養(yǎng)（pureculture）將在實驗室條件下從一個細(xì)胞或一種細(xì)胞群繁殖得到的后代稱為純培養(yǎng)。第2頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四微生物樣品多種混雜某種方法分散成單個微生物平板培養(yǎng)單菌落每個菌落為純種（純培養(yǎng)）單菌落轉(zhuǎn)接培養(yǎng)純種（純培養(yǎng)）微生物純種分離的原理和方法第3頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，稱為菌落。菌落第4頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四一個菌落是一個純種，也是一個純培養(yǎng)；單個微生物只在固體培養(yǎng)基上形成菌落；在液體培養(yǎng)基中不會形成菌落第5頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落第6頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四分區(qū)劃線法（蛇形線法）操作圖第一區(qū)劃線第二區(qū)劃線第三區(qū)劃線一、劃線法第7頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四分區(qū)劃線法適用范圍：

適用于濃度較大的樣品第8頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四連續(xù)劃線法操作圖連續(xù)劃線法適用范圍：適用于濃度較小的樣品第9頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四二、稀釋平板法從土壤中分離純微生物104/ml103/ml102/ml101/ml第10頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四1、稀釋傾注分離法第11頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四涂布平板法稀釋倒平板法2、稀釋涂布分離法第12頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四采用顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)以得到純培養(yǎng)，稱為單細(xì)胞（單孢子）分離法。第13頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四個體較小的微生物需采用顯微操作儀分離難度與細(xì)胞或個體的大小成反比營養(yǎng)瓊脂平板上不能形成菌落較大的微生物可使用毛細(xì)管提取三、單細(xì)胞挑取法五、小滴分離法第14頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四Eachcolonywasexaminedmicroscopically第15頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四四、選擇培養(yǎng)基分離法創(chuàng)造適于目的微生物生長條件原理促使目的微生物快速生長呈優(yōu)勢菌抑制非目的微生物生長從混雜微生物中分離目的微生物第16頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四1、利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離選擇培養(yǎng)基只允許特定微生物生長，而同時抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)基第17頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四土壤目的菌優(yōu)勢非目的菌選擇培養(yǎng)基直接分離單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培養(yǎng)目的菌落菌落周圍有透明蛋白水解圈1、利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離例一：分離篩選蛋白酶產(chǎn)生細(xì)菌第18頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四含牛奶選擇培養(yǎng)基目的菌生長平板營養(yǎng)選擇因子：牛奶或酪蛋白只允許分解利用蛋白質(zhì)的目的菌生長，淘汰非目的菌長出的目的菌并不一定是同種細(xì)菌，但皆產(chǎn)蛋白酶例一：分離篩選蛋白酶產(chǎn)生細(xì)菌第19頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四例二：分離篩選產(chǎn)高溫淀粉酶（65℃）細(xì)菌單細(xì)胞選擇培養(yǎng)基平板（淀粉為唯一C源）65℃培養(yǎng)淀粉水解透明圈目的菌菌落選擇因子：營養(yǎng)選擇因子淀粉環(huán)境選擇因子65℃高溫第20頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四人為創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭，在生長能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。2、富集培養(yǎng)法富集培養(yǎng)是分離微生物菌種最強(qiáng)有力的技術(shù)之一營養(yǎng)選擇因子和生理條件選擇因子可無窮盡組合，可從自然界選擇分離各類特異微生物第21頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四例：從土壤中分離能產(chǎn)生?－半乳糖苷酶的微生物富集培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基分離目的菌驗證第22頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四1.接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.接種鋤5.接種鏟6.接種匙7.接種刀8.接種刀9.剪刀10.鋼鉤11.鑷子12.彈簧接種槍13.接種、槍（日本式）涂布棒彈簧接種槍第23頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四接種環(huán)的滅菌接種環(huán)燒紅接種環(huán)稍冷卻接種工具第24頁，共27頁，2023年，2月20日，星期四挑選單個