衛(wèi)生化學(xué)-熒光分析法

衛(wèi)生化學(xué)——熒光分析法第1頁(yè)/共58頁(yè)2第五

章熒光分析法Fluorometry第2頁(yè)/共58頁(yè)3概述某些化合物在受到光輻射后，除了吸收某種波長(zhǎng)的光之外，還會(huì)發(fā)射比原來(lái)所吸收的波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光—光致發(fā)光現(xiàn)象光致發(fā)光熒光磷光分子熒光原子熒光熒光分析法：根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線位置及強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)鑒定和含量分析的方法。第3頁(yè)/共58頁(yè)4第4頁(yè)/共58頁(yè)5FLU與UV-Vis的比較FLUUV-Vis光譜性質(zhì)發(fā)射光譜吸收光譜被測(cè)物的性質(zhì)很強(qiáng)的紫外-可見(jiàn)光吸收有紫外-可見(jiàn)光吸收靈敏度高，10-10～10-12g/ml一般選擇性高低但在光譜分析中，熒光分析法不及紫外-可見(jiàn)分光光度法普遍，這主要是由于有機(jī)分子的結(jié)構(gòu)所決定的—能發(fā)熒光的物質(zhì)較少第5頁(yè)/共58頁(yè)6雙嘧達(dá)莫萘普生幾個(gè)常見(jiàn)的發(fā)熒光的藥物第6頁(yè)/共58頁(yè)7

黃曲霉毒素結(jié)構(gòu)第7頁(yè)/共58頁(yè)8苯并(a)芘世界公認(rèn)的三大強(qiáng)致癌物質(zhì)是黃曲霉毒素、苯并芘和亞硝胺第8頁(yè)/共58頁(yè)9核黃素環(huán)丙沙星第9頁(yè)/共58頁(yè)10第一節(jié)熒光分析法的基本原理

一）、熒光的產(chǎn)生

１．分子內(nèi)部能量之間的關(guān)系物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收與分子內(nèi)量子化的內(nèi)部運(yùn)動(dòng)緊密相關(guān)：

E總=E電+E振+E轉(zhuǎn)E電為電子運(yùn)動(dòng)的能級(jí)；位于紫外可見(jiàn)光區(qū)域E振為分子振動(dòng)的能級(jí)；主要用于紅外光譜分析E轉(zhuǎn)為分子轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)，很微弱，難以測(cè)到純粹的E轉(zhuǎn)一分子熒光的產(chǎn)生第10頁(yè)/共58頁(yè)11基態(tài)：電子自旋配對(duì)，多重度=2s+1=1，為單重態(tài)，以S0表示。激發(fā)單重態(tài)：分子吸收能量，電子自旋仍然配對(duì)，為單重態(tài)，稱為激發(fā)單重態(tài)，以S1，S2…表示激發(fā)三重態(tài)：分子吸收能量，電子自旋不再配對(duì)，為三重態(tài)，稱為激發(fā)三重態(tài)，以T1，T2….表示。三重態(tài)能級(jí)低于單重態(tài)(Hund規(guī)則)第11頁(yè)/共58頁(yè)122．分子的電子能級(jí)與激發(fā)過(guò)程

分子的電子能態(tài)的激發(fā)包含了電子從基態(tài)軌道躍遷到激發(fā)軌道，分子的能量隨著增加。

大多數(shù)分子含有偶數(shù)個(gè)電子，處于基態(tài)時(shí)，電子成對(duì)地填在能量的最低各軌道上。根據(jù)Pauling不相容原理：一個(gè)給定軌道的兩個(gè)電子，自旋方向一定相反，自旋量子數(shù)為1/2與-1/2，總自旋量子數(shù)S=0。

分子的多重性M=2S+1=1.

此種情形稱為單重基態(tài)(S0)，這些分子放在磁場(chǎng)中，沒(méi)有發(fā)生能級(jí)分裂。即基態(tài)沒(méi)有凈自旋。↑↓電子軌道第12頁(yè)/共58頁(yè)13當(dāng)基態(tài)的一個(gè)電子吸收光輻射后被激發(fā)到較高的電子能態(tài)時(shí)，通常電子不發(fā)生自旋方向的改變，此時(shí)兩個(gè)電子的自旋方向仍然相反，凈自旋s=0，這時(shí)分子處于激發(fā)單重態(tài)(S*)。某些情況下，電子在躍遷過(guò)程中還伴隨著自旋方向的改變，這時(shí)分子的兩個(gè)電子的自旋方向相同，自旋量子數(shù)都是1/2，總自旋量子數(shù)s=1，這時(shí)分子的多重性M=2S+1=3，稱為激發(fā)三重態(tài)(T*)。第13頁(yè)/共58頁(yè)14根據(jù)洪特規(guī)則(Hundprinciple)，處于分立軌上的非成對(duì)電子，平行自旋要比自旋成對(duì)更穩(wěn)定，因此，三重態(tài)總是比相應(yīng)的激發(fā)單重態(tài)具有更低的能量。3.

分子吸收輻射的特點(diǎn)分子吸收輻射是一種激發(fā)過(guò)程，根據(jù)波爾茲曼(Boltzmann)分布，當(dāng)分子吸收了紫外-可見(jiàn)光后，基態(tài)分子中的電子只能躍遷到激發(fā)單重態(tài)的各個(gè)不同振動(dòng)-轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)，不能直接躍遷到激發(fā)三重態(tài)的各個(gè)能級(jí)上。第14頁(yè)/共58頁(yè)15單重態(tài)和三重態(tài)的電子分布模式圖A單重基態(tài)B激發(fā)單重態(tài)C激發(fā)三重態(tài)EABC不是直接的躍遷！第15頁(yè)/共58頁(yè)16激發(fā)單重態(tài)激發(fā)三重態(tài)磁性抗磁順磁平均壽命10-8s10-4s-1s躍遷情況允許躍遷禁阻躍遷

能量高一些低一些

激發(fā)單重態(tài)與激發(fā)三重態(tài)的比較第16頁(yè)/共58頁(yè)174.

分子對(duì)所吸收到的輻射的處理根據(jù)能量最低原理：由于激發(fā)單重態(tài)的分子能量較高，因而激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，所以會(huì)通過(guò)輻射躍遷和無(wú)輻射躍遷等方式釋放出多余的能量而返回到基態(tài)—去激發(fā)過(guò)程，在去激發(fā)過(guò)程中以速度最快、激發(fā)態(tài)的壽命最短的途徑占優(yōu)勢(shì)。去極化過(guò)程無(wú)輻射躍遷輻射躍遷振動(dòng)弛豫(vibrationalrelaxation)內(nèi)部轉(zhuǎn)換(internalconversion)外部轉(zhuǎn)換(externalconversion)系間穿越(intersystemcrossing)熒光(fluorescence)磷光(phosphorescence)

第17頁(yè)/共58頁(yè)18分子中能級(jí)變換模式圖(Jablonski)S2S1S0T1吸收發(fā)射熒光發(fā)射磷光系間竄越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫能量l2l1l

3

外轉(zhuǎn)換l

2T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫第18頁(yè)/共58頁(yè)195.

相關(guān)名詞術(shù)語(yǔ)vibrationalrelaxation振動(dòng)弛豫：處于激發(fā)態(tài)的各振動(dòng)能級(jí)的分子通過(guò)與溶劑分子的碰撞而將部分能量釋放出來(lái)，其電子則返回到同一電子激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)的過(guò)程—只能發(fā)生在同一電子能級(jí)內(nèi)的不同振動(dòng)能級(jí)之間internalconversion內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換：當(dāng)兩個(gè)電子激發(fā)態(tài)之間的能量相差較小以致振動(dòng)能級(jí)發(fā)生重疊時(shí)，受激發(fā)分子常由高電子能級(jí)以無(wú)輻射方式轉(zhuǎn)移至低電子能級(jí)的過(guò)程—容易發(fā)生

第19頁(yè)/共58頁(yè)20externalconversion外部能量轉(zhuǎn)換：激發(fā)態(tài)的分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子發(fā)生碰撞而將部分能量以熱能的形式釋放出來(lái)—降低熒光強(qiáng)度intersystemcrossing體系間跨越：處于激發(fā)態(tài)的分子的電子發(fā)生自旋反轉(zhuǎn)而使分子的多重性發(fā)生改變的過(guò)程。如S1*的最低振動(dòng)能級(jí)同T1*的最高振動(dòng)能級(jí)重疊時(shí)，則有可能發(fā)生S1*

T1*—使熒光強(qiáng)度降低甚至熄滅容易發(fā)生在含有重原子分子或溶液中存在O2等順磁性物質(zhì)中。第20頁(yè)/共58頁(yè)21fluorescenceemission：激發(fā)單重態(tài)內(nèi)部轉(zhuǎn)換或振動(dòng)弛豫S1*的最低振動(dòng)能級(jí)發(fā)射hυ

S0的任一振動(dòng)能級(jí)熒光特點(diǎn)：1.不是單一的過(guò)程，借助了振動(dòng)弛豫和內(nèi)部轉(zhuǎn)換的過(guò)程

2.持續(xù)過(guò)程為10-9～10-7s3.發(fā)射出來(lái)的波長(zhǎng)大于吸收的激發(fā)波長(zhǎng)

4.呈現(xiàn)帶狀的光譜第21頁(yè)/共58頁(yè)22phosphorescenceemission：體系間跨越

S*T1*的最低振動(dòng)能級(jí)振動(dòng)弛豫發(fā)射hυ

S0的任一振動(dòng)能級(jí)磷光特點(diǎn)：1.不是單一的過(guò)程，借助了振動(dòng)弛豫和體系間的跨越

2.波長(zhǎng)大于熒光的波長(zhǎng)

3.持續(xù)過(guò)程為10-4～10s4.低溫條件下才可見(jiàn)區(qū)別熒光和磷光？第22頁(yè)/共58頁(yè)23二、熒光的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜熒光物質(zhì)分子具有兩個(gè)特征光譜：激發(fā)光譜(excitationspectrum)

表示不同激發(fā)波長(zhǎng)的輻射引起物質(zhì)發(fā)射某一波長(zhǎng)熒光的相對(duì)效率。

固定發(fā)射波長(zhǎng)，用不同波長(zhǎng)的激發(fā)光來(lái)激發(fā)熒光物質(zhì)，記錄熒光強(qiáng)度。2.

發(fā)射光譜(emissionspectrum)—熒光光譜(fluorescencespectrum)

表示所發(fā)射的熒光中各種波長(zhǎng)的相對(duì)強(qiáng)度。

固定激發(fā)波長(zhǎng)，掃描該波長(zhǎng)激發(fā)所引起熒光物質(zhì)分子發(fā)射不同波長(zhǎng)的相對(duì)強(qiáng)度。第23頁(yè)/共58頁(yè)24熒光光譜的性質(zhì)斯托克斯位移(Stokesshift)

熒光發(fā)射波長(zhǎng)總是大于激發(fā)波長(zhǎng)。原因：無(wú)輻射躍遷，使能量發(fā)生了損失。300400500nmFab硫酸奎寧的激發(fā)光譜(a)和發(fā)射光譜(b)第24頁(yè)/共58頁(yè)252.熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無(wú)關(guān)原因：熒光光譜只有一個(gè)發(fā)射帶—從S1*的最低

振動(dòng)能級(jí)向基態(tài)回落過(guò)程中發(fā)射輻射。3.熒光光譜與激發(fā)光譜呈鏡像關(guān)系F280360440520600nm激發(fā)光譜熒光光譜b4b3b2b1b0c1c2c3c4c0第25頁(yè)/共58頁(yè)26s0b4b3b2b1b0c0c1c2c3c4s1*V=4V=3V=2V=1V=0V=4V=3V=2V=1V=0?E4?E1?E3?E2?E3?E4?E2?E1蒽的能級(jí)躍遷第26頁(yè)/共58頁(yè)27二熒光與分子結(jié)構(gòu)熒光壽命與熒光效率

熒光壽命(fluorescencelifetime)——當(dāng)除去激發(fā)光源后，分子的熒光強(qiáng)度降低到最大熒光強(qiáng)度的1/e時(shí)所需的時(shí)間。利用分子熒光壽命的差別，可以進(jìn)行熒光物質(zhì)混合組分的分析。設(shè)t=時(shí)，F(xiàn)t為F0的1/e,則該公式可以表征熒光壽命。第27頁(yè)/共58頁(yè)28

熒光效率(fluorescenceefficiency)——指激發(fā)態(tài)分子發(fā)射熒光的光量子數(shù)與基態(tài)分子吸收激發(fā)光的光量子數(shù)之比。ψf=發(fā)射熒光的光子數(shù)吸收激發(fā)光的光子數(shù)如果熒光物質(zhì)從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)過(guò)程中沒(méi)有其他去極化過(guò)程與發(fā)射熒光相競(jìng)爭(zhēng)，那么熒光分子就可以將所吸收的輻射全部以熒光的形式發(fā)射出來(lái)。此時(shí)其熒光效率為1。第28頁(yè)/共58頁(yè)292.有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系

A.強(qiáng)的紫外-可見(jiàn)光吸收

分子中含有長(zhǎng)的共軛π鍵(不飽和度高)，則容易發(fā)生躍遷，且共軛性越強(qiáng)，熒光強(qiáng)度越大。B.較高的熒光效率具有剛性平面，共共平面性越強(qiáng)，則容易可保持較高的熒光效率。另外，一個(gè)有機(jī)物能否發(fā)熒光以及熒光的強(qiáng)弱還受取代基團(tuán)的影響。第29頁(yè)/共58頁(yè)30

苯λex=205nmλem=278nm

萘λex=286nmλem=321nm

蒽λex=356nmλem=404nm第30頁(yè)/共58頁(yè)31聯(lián)苯芴芴分子中的兩個(gè)苯環(huán)不能自由旋轉(zhuǎn)，為剛性分子第31頁(yè)/共58頁(yè)32Al3+8-羥基喹啉8-羥基喹啉鋁熒光增強(qiáng)第32頁(yè)/共58頁(yè)33反-1,2-二苯乙烯順-1,2-二苯乙烯熒光√熒光×第33頁(yè)/共58頁(yè)34取代基增強(qiáng)π電子共軛程度—使熒光波長(zhǎng)長(zhǎng)移NH2-,OH-,OCH3-等減弱π電子共軛程度—使熒光減弱或熄滅COOH-,NO2-,-C=O,SH-及鹵素原子等不影響π鍵—對(duì)熒光基本沒(méi)有影響如R-,SO3H-等第一類為給電子基團(tuán)第二類為吸電子基團(tuán)第34頁(yè)/共58頁(yè)353.熒光試劑

在熒光分光光度法中，常使用某些熒光試劑，使之與被分析物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，生成熒光效應(yīng)強(qiáng)的物質(zhì)—提高分析的靈敏度和選擇性熒光胺能與伯氨基反應(yīng)，生成的衍生物Ex=390nm,Em=480nm第35頁(yè)/共58頁(yè)36鄰苯二甲醛常作為氨基酸含量測(cè)定的熒光反應(yīng)試劑丹磺酰氯丹磺酰肼能與伯、仲胺基及酚羥基的生物堿反應(yīng)，產(chǎn)生比較強(qiáng)的熒光第36頁(yè)/共58頁(yè)37三影響熒光強(qiáng)度的外部因素1.溫度

T↑，熒光效率和熒光強(qiáng)度↓

。原因：分子間的碰撞加強(qiáng)，消耗了部分能量。2.溶劑

①

極性↑，熒光波長(zhǎng)↑，且熒光強(qiáng)度↑。

②

黏度↑，熒光強(qiáng)度↑原因:①

極性溶液中，熒光分子π→π*的?E↓

②

分子間的熱碰撞幾率降低那么磷光呢？第37頁(yè)/共58頁(yè)383.酸度

溶劑的pH值會(huì)使分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，如雙鍵位移，從而使光譜性質(zhì)發(fā)生變化。想想酸堿滴定中指示劑為什么會(huì)隨著pH值的改變而顏色發(fā)生變化呢？4.熒光熄滅劑(1)發(fā)生分子碰撞損失了熒光物質(zhì)的能量；(2)O2分子的順磁性，促進(jìn)了體系間的跨越，誘發(fā)S1*→T1*(3)

熒光物質(zhì)溶液濃度過(guò)大時(shí)(>1g/L)，產(chǎn)生自熄滅第38頁(yè)/共58頁(yè)395.散射光(1)瑞利散射光(Reileighscatteringlight)

光子與物質(zhì)分子發(fā)生彈性碰撞，沒(méi)有能量的交換。(2)拉曼光(Ramanscatteringlight)

光子與物質(zhì)分子發(fā)生非彈性碰撞，光子與物質(zhì)分子間有能量的交換—干擾熒光測(cè)定

尤其是波長(zhǎng)比入射光更長(zhǎng)的拉曼光，因其與熒光接近，因此必須采取措施消除。選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長(zhǎng)可消除拉曼光的干擾第39頁(yè)/共58頁(yè)40強(qiáng)度320448Ex=320nm硫酸喹寧350448強(qiáng)度320360Ex=320nm0.1mol/LH2SO4350400Ex=350nm硫酸喹寧Ex=350nm0.1mol/LH2SO4無(wú)干擾√有干擾×Raman光譜有何特點(diǎn)？第40頁(yè)/共58頁(yè)41第二節(jié)熒光定量的分析方法溶液中物質(zhì)的熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)吸收光量子的程度以及熒光效率有關(guān)—成正相關(guān)關(guān)系I0FI一般在垂直方向觀察或測(cè)量熒光強(qiáng)度溶液中熒光的測(cè)定1.熒光強(qiáng)度與物質(zhì)濃度的關(guān)系熒光分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理第41頁(yè)/共58頁(yè)42有關(guān)計(jì)算設(shè)溶液中熒光物質(zhì)濃度為C，液層厚度為L(zhǎng)。熒光強(qiáng)度正比于被測(cè)熒光物質(zhì)吸收的光強(qiáng)度，即：F∞(I0-I),F=K'(I0-I)

K'為常數(shù)，其值取決于熒光效率。根據(jù)Beer定律：I=I010-ECl第42頁(yè)/共58頁(yè)43若濃度C很小，ECl也很小，，當(dāng)ECl≤0.05時(shí)上式中括號(hào)中第二項(xiàng)以后的各項(xiàng)可以忽略。得F=2.3K'I0ECl=KC因此，在低濃度時(shí)，溶液的熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成正比—熒光定量分析的依據(jù)。注意：當(dāng)熒光物質(zhì)溶液的濃度太高時(shí)，則熒光響應(yīng)值與濃度之間就偏離了線性關(guān)系。第43頁(yè)/共58頁(yè)442.定量方法(1)校正曲線法

以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，建立線性方程。在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，常采用系列中某一對(duì)照品濃度作為基準(zhǔn)，將空白溶液的熒光強(qiáng)度讀數(shù)調(diào)至0，將該對(duì)照品溶液的熒光強(qiáng)度調(diào)至100%或50%，然后測(cè)定對(duì)照品系列中其他溶液的熒光強(qiáng)度F。

A.每次校正的樣品應(yīng)采用同一對(duì)照品溶液。

B.如果對(duì)照品對(duì)光不穩(wěn)定，則可以用另外一個(gè)與被測(cè)物熒光光譜相近的物質(zhì)作基準(zhǔn)來(lái)校正儀器。第44頁(yè)/共58頁(yè)45(2)比例法

如果標(biāo)準(zhǔn)曲線能夠通過(guò)原點(diǎn)，則可以直接進(jìn)行對(duì)比測(cè)定。如果空白溶液的F不能調(diào)至0，則按(3)聯(lián)立方程式法

用于多組分混合物的熒光分析。第45頁(yè)/共58頁(yè)46鹽酸洛美沙星200285323400

350445600

FF激發(fā)光譜熒光光譜第46頁(yè)/共58頁(yè)47測(cè)定法：用0.1mmol/L的鹽酸配制濃度為1.5ug/mL的溶液，進(jìn)行光譜掃描，得知其最大吸收波長(zhǎng)為285nm，發(fā)射波長(zhǎng)為485nm。同時(shí)用HCl溶液作空白對(duì)照。測(cè)得該濃度的洛美沙星的熒光值為Fs

,另按該法配制供試品溶液，同法測(cè)定熒光響應(yīng)值Fx

，按照比例法公式，計(jì)算，即得供試品溶液的藥物濃度。其中Cs=1.5ug/mL第47頁(yè)/共58頁(yè)48第三節(jié)熒光分光光度計(jì)1.熒光分光光度計(jì)由光源、激發(fā)單色器、發(fā)射單色器、樣品池和檢測(cè)系統(tǒng)組成。激發(fā)單色器樣品池吸收物發(fā)射單色器檢測(cè)器放大器指示器記錄器Xe燈第48頁(yè)/共58頁(yè)492.儀器的校正

A.靈敏度：直接影響方法的檢出限。一般用1ug/mL的硫酸奎寧進(jìn)行檢查。

B.波長(zhǎng)

C.光譜：影響測(cè)定的靈敏度和準(zhǔn)確度。原因：光源強(qiáng)度不穩(wěn)定；

檢測(cè)器對(duì)波長(zhǎng)的感應(yīng)不呈線性。采用雙光束光路，即用一個(gè)參比光來(lái)抵消測(cè)量誤差。第49頁(yè)/共58頁(yè)50第四節(jié)熒光分析新技術(shù)激光熒光分析(laserfluorometry)

優(yōu)點(diǎn)：?jiǎn)紊院?、?qiáng)度大、穩(wěn)定性高2.時(shí)間分辨熒光分析(time-resolvedfluorometry)

原理：利用不同物質(zhì)的熒光壽命的不同，在激發(fā)和檢測(cè)之間延緩的時(shí)間不同，以實(shí)現(xiàn)分別檢測(cè)的目的。抗干擾性強(qiáng)，可用于復(fù)雜的多組分的分析。第50頁(yè)/共58頁(yè)514.同步熒光分析(synchronousfluorometry)

原理：在熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光光譜中選擇一適宜的波長(zhǎng)差值?λ

（通常為λex與λem之差)，同時(shí)掃描發(fā)射波長(zhǎng)和激發(fā)波長(zhǎng)，得到同步熒光光譜。

Fsp(λex,λem)=KCFexFem

靈敏度很高。3.熒光免疫分析(fluoroimmunoassay)

原理：利用熒光標(biāo)記的抗原與抗體之間的反應(yīng)進(jìn)行分析。用于生物化學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)中蛋白及多肽的分析。第51頁(yè)/共58頁(yè)525.膠束增敏熒光分析(micellarsensitizedfluorometry)

原理：利用表面活性劑(SDS)，形成膠體溶液，來(lái)減弱被分析物由于分子熱運(yùn)動(dòng)所造成的能量損失甚至熒光熄滅現(xiàn)象。特點(diǎn)適用范圍廣靈敏度高穩(wěn)定第52頁(yè)/共58頁(yè)53學(xué)習(xí)要求1、熟悉分子內(nèi)部能級(jí)躍遷的模式及相關(guān)的概念2、理解熒光發(fā)射和磷光發(fā)射的過(guò)程3、理解激發(fā)光譜與熒光光譜的含義，掌握熒光光譜的特點(diǎn)4、熟悉熒光壽命與熒光效率的含義5、掌握影響有機(jī)物質(zhì)熒光強(qiáng)度的因素6、掌握熒光定量分析的方法依據(jù)第53頁(yè)/共58頁(yè)54練習(xí)題一、選擇題1.根據(jù)下列結(jié)構(gòu)，那種物質(zhì)的熒光效率最大

A苯B聯(lián)苯C蒽D萘2.下列物質(zhì)中，哪個(gè)的熒光強(qiáng)度最大

A.苯酚B.硝基苯C.苯甲酸D.苯甲醛第54頁(yè)/共58頁(yè)553.影響熒光強(qiáng)度因素有

A分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性B.分子的取代基團(tuán)

C溶液的溫度D.溶劑的性質(zhì)E.分子量的大小4.光和物質(zhì)分子發(fā)生碰撞，不發(fā)生能量的交換，僅是光子運(yùn)動(dòng)的方向發(fā)生改變，這種