SDS-PAGE電泳過程中常見問題以與解決方法

-.z.SDS－PAGE電泳過程中常見問題以及解決方法幾乎所有蛋白質(zhì)電泳分析都在聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)展，而所有條件總要確保蛋白質(zhì)解離成單個(gè)多肽亞基并進(jìn)可能減少其相互間的聚集，最常用的就是SDS－PAGE電泳技術(shù)，關(guān)于大家在此過程中經(jīng)常遇到的問題進(jìn)展一些討論：Q：SDS－PAGE電泳的根本原理？A：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn)SDS〔十二烷基硫酸鈉〕，SDS會(huì)與變性的多肽，并使蛋白帶負(fù)電荷，由于多肽結(jié)合SDS的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無關(guān)，因此SDS多肽復(fù)合物在丙稀酰胺凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關(guān)，在到達(dá)飽和的狀態(tài)下，每克多肽可與1.4g去污劑結(jié)合。當(dāng)分子量在15KD到200KD之間時(shí)，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系，符合下式：logMW=K-b*，式中：MW為分子量，*為遷移率，k、b均為常數(shù)，假設(shè)將分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知蛋白質(zhì)在一樣條件下進(jìn)展電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量。Q：配膠緩沖液系統(tǒng)對電泳的影響？A：在SDS－PAGE不連續(xù)電泳中，制膠緩沖液使用的是Tris－HCL緩沖系統(tǒng)，濃縮膠是pH6.7，別離膠pH8.9；而電泳緩沖液使用的Tris－甘氨酸緩沖系統(tǒng)。在濃縮膠中，其pH環(huán)境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動(dòng)效率低；而CL離子卻很高，兩者之間形成導(dǎo)電性較低的區(qū)帶，蛋白分子就介于二者之間泳動(dòng)。由于導(dǎo)電性與電場強(qiáng)度成反比，這一區(qū)帶便形成了較高的電壓剃度，壓著蛋白質(zhì)分子聚集到一起，濃縮為一狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品進(jìn)入別離膠后，由于膠中pH的增加，呈堿性，甘氨酸大量解離，泳動(dòng)速率增加，直接緊隨氯離子之后，同時(shí)由于別離膠孔徑的縮小，在電場的作用下，蛋白分子根據(jù)其固有的帶電性和分子大小進(jìn)展別離。所以，pH對整個(gè)反響體系的影響是至關(guān)重要的，實(shí)驗(yàn)中在排除其他因素之后仍不能很好解決問題的情況，應(yīng)首要考慮該因素。Q：樣品如何處理？A：根據(jù)樣品別離目的不同，主要有三種處理方法：復(fù)原SDS處理、非復(fù)原SDS處理、帶有烷基化作用的復(fù)原SDS處理。1、復(fù)原SDS處理：在上樣buffer中參加SDS和DTT〔或Beta巰基乙醇〕后，蛋白質(zhì)構(gòu)象被解離，電荷被中和，形成SDS與蛋白相結(jié)合的分子，在電泳中，只根據(jù)分子量來別離。一般電泳均按這種方式處理，樣品稀釋適當(dāng)濃度，參加上樣Buffer，離心，沸水煮5min，再離心加樣。2、帶有烷基化作用的復(fù)原SDS處理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并經(jīng)久結(jié)實(shí)的保護(hù)SH基團(tuán)，得到較窄的譜帶；另碘乙酸胺可捕集過量的DTT，而防止銀染時(shí)的紋理現(xiàn)象。100ul樣品緩沖液中10ul20％的碘乙酸胺，并在室溫保溫30min。3、非復(fù)原SDS處理：生理體液、血清、尿素等樣品，一般只用1％SDS沸水中煮3min，未加復(fù)原劑，因而蛋白折疊未被破壞，不可作為測定分子量來使用。Q：SDS電泳凝膠中各主要成分的作用？A:聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺為蛋白質(zhì)電泳提供載體，其凝固的好壞直接關(guān)系到電泳成功與否，與促凝劑及環(huán)境密切相關(guān)；制膠緩沖液：濃縮膠選擇pH6.7，別離膠選擇pH8.9，選擇tris－HCL系統(tǒng)，具體作用后面介紹；TEMED與AP：促凝作用，加速聚丙烯酰胺的凝固；十二烷基硫酸鈉〔SDS〕：陽離子去污劑，作用有四：去蛋白質(zhì)電荷、解離蛋白質(zhì)之間的氫鍵、取消蛋白分子內(nèi)的疏水作用、去多肽折疊。Q：提高SDS電泳分辨率的途徑？A：1、聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝膠的分辨率。建議做法：待凝膠在室溫凝固后，可在室溫下放置一段時(shí)間使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易導(dǎo)致凝固不充分，后者可導(dǎo)致SDS結(jié)晶。一般凝膠可在室溫下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。2、一般常用的有氨基黑、考馬斯亮藍(lán)、銀染色三種染料，不同染料又各自不同的染色方法，具體可參照郭堯君編著的"蛋白質(zhì)電泳技術(shù)手冊"P82-103。Q："微笑〞〔兩邊翹起中間凹下〕形帶原因？A：主要是由于凝膠的中間局部凝固不均勻所致，多出現(xiàn)于較厚的凝膠中。處理方法：待其充分凝固再作后續(xù)實(shí)驗(yàn)。Q："皺眉〞〔兩邊向下中間鼓起〕形帶原因？A：主要出現(xiàn)在蛋白質(zhì)垂直電泳槽中，一般是兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈。處理方法：可在兩板間參加適量緩沖液，以排除氣泡。Q：為什么帶出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象？A：主要是樣品融解效果不佳或別離膠濃度過大引起的。處理方法：加樣前離心；選擇適當(dāng)?shù)臉悠肪彌_液，加適量樣品促溶劑；電泳緩沖液時(shí)間過長，重新配制；降低凝膠濃度。Q：為什么帶出現(xiàn)紋理現(xiàn)象？A：主要是樣品不溶性顆粒引起的。處理方法：加樣前離心；加適量樣品促溶劑。Q：什么是"鬼帶〞，如何處理？A："鬼帶〞就是在跑大分子構(gòu)象復(fù)雜的蛋白質(zhì)分子時(shí)，常會(huì)出現(xiàn)在泳道頂端〔有時(shí)在濃縮膠中〕的一些大分子未知條帶或加樣孔底部有沉淀，主要由于復(fù)原劑在加熱的過程中被氧化而失去活性，致使原來被解離的蛋白質(zhì)分子重新折疊結(jié)合和亞基重新締合，聚合成大分子，其分子量要比目標(biāo)條帶大，有時(shí)不能進(jìn)入別離膠。但它卻于目標(biāo)條帶有一樣的免疫學(xué)活性，在WB反響中可見其能與目標(biāo)條帶對應(yīng)的抗體作用。處理方法：在加熱煮沸后，再添加適量的DTT或Beta巰基乙醇，以補(bǔ)充缺乏的復(fù)原劑；或可加適量EDTA來阻止復(fù)原劑的氧化。Q：為什么溴酚藍(lán)不能起到指示作用？A：我們在實(shí)驗(yàn)中常會(huì)遇到溴酚藍(lán)已跑出板底，但蛋白質(zhì)卻還未跑下來的現(xiàn)象。主要與緩沖液和別離膠的濃度有關(guān)。處理方法：更換正確pH值的Buffer；降低別離膠的濃度。Q：為什么電泳的條帶很粗？A：電泳中條帶很粗是常見的事，主要是未濃縮好的原因。處理方法：適當(dāng)增加濃縮膠的長度；保證濃縮膠貯液的pH正確〔6.7〕；適當(dāng)降低電壓；Q：為什么電泳電壓很高而電流卻很低呢？A：這種現(xiàn)象一般初學(xué)者易出現(xiàn)。比方電壓50v以上，可電流卻在5mA以下。主要是由于電泳槽沒有正確裝配，電流未形成通路。包括：a.內(nèi)外槽裝反；b.外槽液過少；c.電泳槽底部的絕緣體未去掉〔比方倒膠用的橡膠皮〕。處理方法：電泳槽正確裝配即可。Q：濃縮膠與別離膠斷裂、板間有氣泡對電泳有影響嗎？A：這主要出現(xiàn)在初學(xué)者中，一般對電泳不會(huì)有太大的影響。前者主要原因是拔梳子用力不均勻或過猛所致；后者是由于在解除制膠的夾子后，板未壓緊而致空氣進(jìn)入引起的。簡介聚丙烯酰胺凝膠電泳作用：用于別離蛋白質(zhì)和寡糖核苷酸。作用原理聚丙烯酰胺凝膠電泳是網(wǎng)狀構(gòu)造，具有分子篩效應(yīng)。它有兩種形式：〔1〕非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。而SDS僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子量的不同就可以分開蛋白質(zhì)。該技術(shù)最初由Shapiro于1967年建立，他們發(fā)現(xiàn)在樣品介質(zhì)和丙烯酰胺凝膠中參加離子去污劑和強(qiáng)復(fù)原劑后，蛋白質(zhì)亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小〔可以忽略電荷因素〕。作用SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級構(gòu)造。而強(qiáng)復(fù)原劑如巰基乙醇，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中參加復(fù)原劑和SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側(cè)鏈和SDS結(jié)合成蛋白-SDS膠束，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白原有的電荷量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和構(gòu)造差異。SDS一般采用的是不連續(xù)緩沖系統(tǒng)，于連續(xù)緩沖系統(tǒng)相比，能夠有較高的分辨率。濃縮膠的作用是有堆積作用，凝膠濃度較小，孔徑較大，把較稀的樣品加在濃縮膠上，經(jīng)過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個(gè)狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品液和濃縮膠選TRIS/HCL緩沖液，電極液選TRIS/甘氨酸。電泳開場后，HCL解離成氯離子，甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，因此一起向正極移動(dòng)，其中氯離子最快，甘氨酸根離子最慢，蛋白居中。電泳開場時(shí)氯離子泳動(dòng)率最大，超過蛋白，因此在后面形成低電導(dǎo)區(qū)，而電場強(qiáng)度與低電導(dǎo)區(qū)成反比，因而產(chǎn)生較高的電場強(qiáng)度，使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動(dòng)，形成以穩(wěn)定的界面，使蛋白聚集在移動(dòng)界面附近，濃縮成一中間層。此鑒定方法中，蛋白質(zhì)的遷移率主要取決于它的相對分子質(zhì)量，而與所帶電荷和分子形狀無關(guān)。補(bǔ)充信息聚丙烯酰胺凝膠電泳簡稱為PAGE〔Polyacrylamdegelelectrophoresis〕聚丙烯酰氨凝膠電泳，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種常用電泳技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種：化學(xué)聚合法和光聚合法?；瘜W(xué)聚合以過硫酸銨〔AP〕為催化劑，以四甲基乙二胺〔TEMED〕為加速劑。在聚合過程中，TEMED催化過硫酸銨產(chǎn)生自由基，后者引發(fā)丙烯酰胺單體聚合，同時(shí)甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產(chǎn)生甲叉鍵交聯(lián)，從而形成三維網(wǎng)狀構(gòu)造。PAGE根據(jù)其有無濃縮效應(yīng)，分為連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)兩大類，連續(xù)系統(tǒng)電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度一樣，帶電顆粒在電場作用下，主要靠電荷和分子篩效應(yīng)。不連續(xù)系統(tǒng)中由于緩沖液離子成分，pH，凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性，帶電顆粒在電場中泳動(dòng)不僅有電荷效應(yīng)，分子篩效應(yīng)，還具有濃縮效應(yīng)，因而其別離條帶清晰度及分辨率均較前者佳。不連續(xù)體系由電極緩沖液、濃縮膠及別離膠所組成。濃縮膠是由AP催化聚合而成的大孔膠，凝膠緩沖液為pH6.7的Tris-HC1。別離膠是由AP催化聚合而成的小孔膠，凝膠緩沖液為pH8.9Tris-HC1。電極緩沖液是pH8.3Tris-甘氨酸緩沖液。2種孔徑的凝膠、2種緩沖體系、3種pH值使不連續(xù)體系形成了凝膠孔徑、pH值、緩沖液離子成分的不連續(xù)性，這是樣品濃縮的主要因素。過程蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時(shí)，它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素。如果參加一種試劑使電荷因素消除，那電泳遷移率就取決于分子的大小，就可以用電泳技術(shù)測定蛋白質(zhì)的分子量。1967年，Shapiro等發(fā)現(xiàn)陰離子去污劑十二烷基硫酸鈉〔SDS〕具有這種作用。當(dāng)向蛋白質(zhì)溶液中參加足夠量SDS和巰基乙醇，SDS可使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵復(fù)原。由于十二烷基硫酸根帶負(fù)電，使各種蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物都帶上一樣密度的負(fù)電荷，它的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間原有的電荷差異，SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后，還可引起構(gòu)象改變，蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物形成近似"雪茄煙〞形的長橢圓棒，不同蛋白質(zhì)的SDS復(fù)合物的短軸長度都一樣，約為18A，這樣的蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物，在凝膠中的遷移率，不再受蛋白質(zhì)原的電荷和形狀的影響，而取決于分子量的大小由于蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物在單位長度上帶有相等的電荷，所以它們以相等的遷移速度從濃縮膠進(jìn)入別離膠，進(jìn)入別離膠后，由于聚丙烯酰胺的分子篩作用，小分子的蛋白質(zhì)可以容易的通過凝膠孔徑，阻力小，遷移速度快；大分子蛋白質(zhì)則受到較大的阻力而被滯后，這樣蛋白質(zhì)在電泳過程中就會(huì)根據(jù)其各自分子量的大小而被別離。因而SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用于測定蛋白質(zhì)的分子量。當(dāng)分子量在15KD到200KD之間時(shí)，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系，符合下式：logMW=K-b*，式中：MW為分子量，*為遷移率，k、b均為常數(shù)，假設(shè)將分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知蛋白質(zhì)在一樣條件下進(jìn)展電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量。SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳經(jīng)常應(yīng)用于提純過程中純度的檢測，純化的蛋白質(zhì)通常在SDS電泳上應(yīng)只有一條帶，但如果蛋白質(zhì)是由不同的亞基組成的，它在電泳中可能會(huì)形成分別對應(yīng)于各個(gè)亞基的幾條帶。SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳具有較高的靈敏度，一般只需要不到微克量級的蛋白質(zhì)，而且通過電泳還可以同時(shí)得到關(guān)于分子量的情況，這些信息對于了解未知蛋白及設(shè)計(jì)提純過程都是非常重要的。常見問題及分析1.配膠緩沖液系統(tǒng)對電泳的影響？在SDS－PAGE不連續(xù)電泳中，制膠緩沖液使用的是Tris－HCL緩沖系統(tǒng)，濃縮膠是pH6.7，別離膠pH8.9；而電泳緩沖液使用的Tris－甘氨酸緩沖系統(tǒng)。在濃縮膠中，其pH環(huán)境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動(dòng)效率低；而CL離子卻很高，兩者之間形成導(dǎo)電性較低的區(qū)帶，蛋白分子就介于二者之間泳動(dòng)。由于導(dǎo)電性與電場強(qiáng)度成反比，這一區(qū)帶便形成了較高的電壓梯度，壓著蛋白質(zhì)分子聚集到一起，濃縮為一狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品進(jìn)入別離膠后，由于膠中pH的增加，呈堿性，甘氨酸大量解離，泳動(dòng)速率增加，直接緊隨氯離子之后，同時(shí)由于別離膠孔徑的縮小，在電場的作用下，蛋白分子根據(jù)其固有的帶電性和分子大小進(jìn)展別離。所以，pH對整個(gè)反響體系的影響是至關(guān)重要的，實(shí)驗(yàn)中在排除其他因素之后仍不能很好解決問題的情況，應(yīng)首要考慮該因素。2.樣品如何處理？根據(jù)樣品別離目的不同，主要有三種處理方法：復(fù)原SDS處理、非復(fù)原SDS處理、帶有烷基化作用的復(fù)原SDS處理。1〕復(fù)原SDS處理：在上樣buffer中參加SDS和DTT〔或Beta巰基乙醇〕后，蛋白質(zhì)構(gòu)象被解離，電荷被中和，形成SDS與蛋白相結(jié)合的分子，在電泳中，只根據(jù)分子量來別離。一般電泳均按這種方式處理，樣品稀釋適當(dāng)濃度，參加上樣Buffer，離心，沸水煮5min，再離心加樣。2〕帶有烷基化作用的復(fù)原SDS處理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并經(jīng)久結(jié)實(shí)的保護(hù)SH基團(tuán)，得到較窄的譜帶；另碘乙酸胺可捕集過量的DTT，而防止銀染時(shí)的紋理現(xiàn)象。100ul樣品緩沖液中10ul20％的碘乙酸胺，并在室溫保溫30min。3〕非復(fù)原SDS處理：生理體液、血清、尿素等樣品，一般只用1％SDS沸水中煮3min，未加復(fù)原劑，因而蛋白折疊未被破壞，不可作為測定分子量來使用。3.SDS電泳凝膠中各主要成分的作用？聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺與為蛋白質(zhì)電泳提供載體，其凝固的好壞直接關(guān)系到電泳成功與否，與促凝劑及環(huán)境密切相關(guān)；制膠緩沖液：濃縮膠選擇pH6.7，別離膠選擇pH8.9，選擇tris－HCL系統(tǒng)，TEMED與AP：AP提供自由基，TEMED是催化劑，催化自由基引起的聚合反響進(jìn)展；十二烷基硫酸鈉〔SDS〕：陽離子去污劑，作用有四：去蛋白質(zhì)電荷、解離蛋白質(zhì)之間的氫鍵、取消蛋白分子內(nèi)的疏水作用、去多肽折疊。4.提高SDS電泳分辨率的途徑？聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝膠的分辨率。建議做法：待凝膠在室溫凝固后，可在室溫下放置一段時(shí)間使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易導(dǎo)致凝固不充分，后者可導(dǎo)致SDS結(jié)晶。一般凝膠可在室溫下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。一般常用的有氨基黑、考馬斯亮藍(lán)、銀染色三種染料，不同染料又各自不同的染色方法，具體可參照郭堯君編著的"蛋白質(zhì)電泳技術(shù)手冊"P82-103。5."微笑〞〔兩邊翹起中間凹下〕形帶原因？主要是由于凝膠的中間局部凝固不均勻所致，多出現(xiàn)于較厚的凝膠中。處理方法：待其充分凝固再作后續(xù)實(shí)驗(yàn)。6."皺眉〞〔兩邊向下中間鼓起〕形帶原因？主要出現(xiàn)在蛋白質(zhì)垂直電泳槽中，一般是兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈。處理方法：可在兩板間參加適量緩沖液，以排除氣泡。7.為什么帶出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象？主要是樣品融解效果不佳或別離膠濃度過大引起的。處理方法：加樣前離心；選擇適當(dāng)?shù)臉悠肪彌_液，加適量樣品促溶劑；電泳緩沖液時(shí)間過長，重新配制；降低凝膠濃度。8.為什么帶出現(xiàn)紋理現(xiàn)象？主要是樣品不溶性顆粒引起的。處理方法：加樣前離心；加適量樣品促溶劑。9.什么是"鬼帶〞，如何處理？"鬼帶〞就是在跑大分子構(gòu)象復(fù)雜的蛋白質(zhì)分子時(shí)，常會(huì)出現(xiàn)在泳道頂端〔有時(shí)在濃縮膠中〕的一些大分子未知條帶或加樣孔底部有沉淀，主要由于復(fù)原劑在加熱的過程中被氧化而失去活性，致使原來被解離的蛋白質(zhì)分子重新折疊結(jié)合和亞基重新締合，聚合成大分子，其分子量要比目標(biāo)條帶大，有時(shí)不能進(jìn)入別離膠。但它卻于目標(biāo)條帶有一樣的免疫學(xué)活性，在WB反響中可見其能與目標(biāo)條帶對應(yīng)的抗體作用。處理方法：在加熱煮沸后，再添加適量的DTT或Beta巰基乙醇，以補(bǔ)充缺乏的復(fù)原劑；或可加適量EDTA來阻止復(fù)原劑的氧化。10.為什么溴酚藍(lán)不能起到指示作用？我們在實(shí)驗(yàn)中常會(huì)遇到溴酚藍(lán)已跑出板底，但蛋白質(zhì)卻還未跑下來的現(xiàn)象。主要與緩沖液和別離膠的濃度有關(guān)。處理方法：更換正確pH值的Buffer；降低別離膠的濃度。11.為什么電泳的條帶很粗？電泳中條帶很粗是常見的事，主要是未濃縮好的原因。處理方法：適當(dāng)增加濃縮膠的長度；保證濃縮膠貯液的pH正確〔6.7〕；適當(dāng)降低電壓；12.為什么電泳電壓很高而電流卻很低呢？這種現(xiàn)象一般初學(xué)者易出現(xiàn)。比方電壓50v以上，可電流卻在5mA以下。主要是由于電泳槽沒有正確裝配，電流未形成通路。包括：a.內(nèi)外槽裝反；b.外槽液過少；c.電泳槽底部的絕緣體未去掉〔比方倒膠用的橡膠皮〕。處理方法：電泳槽正確裝配即可。13.濃縮膠與別離膠斷裂、板間有氣泡對電泳有影響嗎？這主要出現(xiàn)在初學(xué)者中，一般對電泳不會(huì)有太大的影