微生物的生態(tài)53課件

第八章微生物的生態(tài)一、微生物在自然界中的分布二、微生物和自然界物質(zhì)循環(huán)三、微生物和污水處理四、微生物的生物環(huán)境①土壤是微生物的“大本營(yíng)由于土壤具備了各種微生物生長(zhǎng)發(fā)育所需要的營(yíng)養(yǎng)、水分、空氣、酸堿度、滲透壓和溫度等條件，所以土壤是微生物生活的良好環(huán)境。土壤是微生物的“大本營(yíng)”；土壤是人類最豐富的“菌種資源庫(kù)”。（一）土壤中的微生物一、微生物在自然界中的分布②土壤中各種微生物含量

細(xì)菌（～108）＞放線菌*（～107）＞霉菌*（～106）＞酵母菌（～105）＞藻類（～104）＞原生動(dòng)物（～103）通過(guò)土壤微生物的代謝活動(dòng)，可改變土壤的理化性質(zhì)，進(jìn)行物質(zhì)轉(zhuǎn)化，因此，土壤微生物是構(gòu)成土壤肥力的重要因素。（一）土壤中的微生物在自然界的江、河、湖、海等各種淡水與咸水水域中都生存著相應(yīng)的微生物。（二）水體中的微生物(1)淡水型水體微生物在潔凈的湖泊和水庫(kù)蓄水中，因有機(jī)物含量低，故微生物數(shù)量很少（10～103／ml),可認(rèn)為是水體環(huán)境中“土生土長(zhǎng)”的土居微生物或土著種。典型的清水型微生物以化能自養(yǎng)微生物和光能自養(yǎng)微生物為主，如硫細(xì)菌、鐵細(xì)菌和衣細(xì)菌等，以及含有光合色素的藍(lán)細(xì)菌、綠硫細(xì)菌和紫細(xì)菌等。霉菌中也有一些水生性種類，例如Saprolegnia（水霉屬）和Achlya（綿霉屬）的一些種可生長(zhǎng)于腐爛的有機(jī)殘?bào)w上。單細(xì)胞和絲狀的藻類以及一些原生動(dòng)物常在水面生長(zhǎng)，它們的數(shù)量一般不大。（2）腐敗型水生微生物

流經(jīng)城市的河水、港口附近的海水、滯留的池水以及下水道的溝水中，由于流入了大量的人畜排泄物、生活污物和工業(yè)廢水等，因此有機(jī)物的含量大增，同時(shí)也夾入了大量外來(lái)的腐生細(xì)菌.腐敗型水生微生物尤其是細(xì)菌和原生動(dòng)物大量繁殖，每毫升污水的微生物含量達(dá)到107～108個(gè)。其中數(shù)量最多的是無(wú)芽孢革蘭氏陰性細(xì)菌，如變形桿菌屬、E．coli等的一些種。這些微生物在污水環(huán)境中大量繁殖，逐漸把水中的有機(jī)物分解成簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物，同時(shí)它們的數(shù)量隨之減少，污水也就逐步凈化變清。還有一類是隨著人畜排泄物或病體污物而進(jìn)入水體的動(dòng)植物致病菌，一般難以長(zhǎng)期生存，但由于水體的流動(dòng)，也會(huì)造成病原菌的傳播甚至疾病的流行。水中微生物的含量對(duì)該水源的飲用價(jià)值影響很大。一般認(rèn)為，作為良好的飲用水，其細(xì)菌含量應(yīng)在100個(gè)／ml以下，當(dāng)超過(guò)500個(gè)／ml時(shí)，即不適合作飲用水了。(4)水體評(píng)價(jià)對(duì)飲用水來(lái)說(shuō)，更重要的指標(biāo)是其中微生物的種類。因此，在飲用水的微生物學(xué)檢驗(yàn)中，不僅要檢查其總菌數(shù)，還要檢查其中所含的病原菌數(shù)。由于水中病原菌的含量總是較少，難以直接找到，但只要通過(guò)檢查水樣中的指示菌——E．coli數(shù)即可知道該水源被糞便污染程度，從而間接推測(cè)其他病原菌存在的概率。檢驗(yàn)E．coli可用以前介紹過(guò)的伊紅美藍(lán)鑒別性培養(yǎng)基（EMB）。根據(jù)我國(guó)有關(guān)部門所規(guī)定的飲用水標(biāo)準(zhǔn)，自來(lái)水中細(xì)菌總數(shù)不可超過(guò)100個(gè)／ml（37℃，培養(yǎng)24小時(shí)），E．coli數(shù)不能超過(guò)3個(gè)／L。

(4)水體評(píng)價(jià)在自然水體尤其是快速流動(dòng)的水體中，存在著對(duì)有機(jī)或無(wú)機(jī)污染物的自凈作用。其原因是多方面的，雖有物理性的稀釋作用和化學(xué)性的氧化作用，但更重要的卻是各種生物學(xué)和生物化學(xué)作用，例如好氧菌對(duì)有機(jī)物的分解作用，原生動(dòng)物對(duì)細(xì)菌等的吞噬作用，噬菌體對(duì)宿主的裂解作用，以及微生物產(chǎn)生的凝膠物質(zhì)對(duì)污染物的吸附、沉降作用等，這就是“流水不腐”的重要原因?？諝庵胁⒉缓⑸锷L(zhǎng)繁殖所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和充足的水分，還有日光中有害的紫外線的照射，因此不是微生物良好的生存場(chǎng)所。然而，空氣中還是含有一定數(shù)量的微生物。這是由于土壤、人和動(dòng)植物體等物體上不斷以微粒、塵埃等形式飄逸到空氣中而造成的。（三）、空氣中的微生物凡含塵埃越多的空氣，其中所含的微生物種類和數(shù)量也就越多。因此，灰塵可被稱作“微生物的飛行器”。一般在畜舍、公共場(chǎng)所、醫(yī)院、宿舍、城市街道的空氣中，微生物的含量最高，而在大洋、高山、高空、森林地帶、終年積雪的山脈或極地上空的空氣中，微生物的含量就極少由于塵埃的自然沉降，所以越近地面的空氣，其含菌量越高。然而，微生物在高空中分布的記錄卻越來(lái)越高。在本世紀(jì)30年代，人們首次用飛機(jī)證實(shí)在20km的高空存在著微生物；70年代中期又發(fā)現(xiàn)在30km的高空存在著微生物；70年代末，人們用地球物理火箭，從74km的高空采集到處在同溫層和大氣中層的微生物，其中包括兩種細(xì)菌和四種真菌，（藤黃分枝桿菌），（蠅卷霉），（黑曲霉），（點(diǎn)青霉），后來(lái)，又從85km的高空找到了微生物。這是目前所知道的生物圈的上限。（三）、空氣中的微生物室外空氣中的微生物，主要有各種球菌、芽孢桿菌、產(chǎn)色素細(xì)菌和對(duì)干燥和射線有抵抗力的真菌孢子等。室內(nèi)空氣中的微生物含量更高，尤其是醫(yī)院的病房、門診間因經(jīng)常受病人的污染，故可找到多種病原菌，例如結(jié)核分枝桿菌、白喉棒桿菌、溶血鏈球菌、金黃色葡萄球菌、若干病毒（麻疹病毒，流感病毒）以及多種真菌孢子等?？諝庵形⑸锏臍馊苣z對(duì)動(dòng)植物病害的傳播、發(fā)酵工業(yè)中的污染以及工農(nóng)業(yè)產(chǎn)品的霉腐等都有很重要的關(guān)系。因此，在發(fā)酵工廠中，在空氣進(jìn)入空氣壓縮機(jī)前有時(shí)要用粗過(guò)濾器過(guò)濾掉顆粒較大的微生物。（三）、空氣中的微生物測(cè)定空氣中微生物的數(shù)目可用培養(yǎng)皿沉降法或液體阻留法等方法進(jìn)行。凡須進(jìn)行空氣消毒的場(chǎng)所，例如醫(yī)院的手術(shù)室、病房、微生物接種室或培養(yǎng)室等處可以用紫外線消毒、福爾馬林等藥物的熏蒸或噴霧消毒等方法進(jìn)行。為防止空氣中的雜菌對(duì)微生物培養(yǎng)物或發(fā)酵罐內(nèi)的純種培養(yǎng)物的污染，可用棉花、紗布（8層以上）、石棉濾板、活性炭或超細(xì)玻璃纖維過(guò)濾紙進(jìn)行空氣過(guò)濾。（三）、空氣中的微生物控制其溫度、濕度、氧氣和養(yǎng)料等微生物賴以生長(zhǎng)繁殖的外界環(huán)境條件；采用有效的化學(xué)抑菌劑、殺菌劑或物理殺菌劑，以抑制它們的生長(zhǎng)繁殖或直接殺死它們；在工業(yè)產(chǎn)品加工、包裝過(guò)程中，盡量保持環(huán)境衛(wèi)生并嚴(yán)防雜菌的污染等。防止工業(yè)產(chǎn)品霉腐的方法污染食品的微生物主要是曲霉屬、青霉屬、鐮孢霉屬、鏈格孢霉屬、擬青霉屬、根霉屬、毛霉屬等2．食品上的微生物據(jù)調(diào)查，在目前知道的5萬(wàn)多種真菌中，已知至少其中有兩百多個(gè)種可產(chǎn)生一百余種真菌毒素。在這些真菌毒素中有14種能致癌，其中的2種是劇毒的致癌劑，內(nèi)中之一黃曲霉菌株產(chǎn)生的黃曲霉毒素，凡長(zhǎng)有大量霉菌的糧食，一般都含有多種真菌毒素，極有可能存在致癌的真菌毒素，黃曲霉毒素有B1、B2、G1、G2、M1和M2等多種衍生物，其中以B1的毒性為最高。含黃曲霉毒素最多的食品是花生及花生制品、玉米、“紅變米”、“黃變米”、自制的醬（發(fā)現(xiàn)其中約12.5％含黃曲霉毒素）等。

黃曲霉毒素是于1960年起逐漸被認(rèn)識(shí)和發(fā)現(xiàn)的。當(dāng)時(shí)在英國(guó)東南部的農(nóng)村相繼有約10萬(wàn)只火雞死于一種病因不明的“火雞X病”。經(jīng)多方研究，發(fā)現(xiàn)從巴西進(jìn)口的花生粉中，污染有大量的黃曲霉，并證明由它所分泌的黃曲霉毒素，就是“火雞X病”的根源，以后又證實(shí)它可引起鴨、兔、貓、豬等多種動(dòng)物和人的肝臟中毒。黃曲霉毒素?zé)o菌動(dòng)物：凡在其體內(nèi)外檢查不到任何正常菌群的動(dòng)物。它是將剖腹產(chǎn)的鼠、兔、猴、豬、羊等或特殊孵育的雞等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，放在無(wú)菌培養(yǎng)裝置中進(jìn)行精心培養(yǎng)而成的。

悉生生物：凡已人為地接種上某已知純種微生物的無(wú)菌動(dòng)物或無(wú)菌植物，意即“了解其生物區(qū)系的生物”。2．無(wú)菌動(dòng)物與悉生生物微生物學(xué)的奠基人巴斯德早在1885年就提出“如果在動(dòng)物體內(nèi)沒有腸道細(xì)菌的話，則它們的生命是不可能維持下去的?！币虼?，用悉生生物學(xué)的觀點(diǎn)來(lái)看待每一個(gè)高等動(dòng)物或高等植物的正常個(gè)體時(shí)，它們實(shí)際上都是一個(gè)與有關(guān)正常菌群形成一體的“共生復(fù)合體”。①在沒有正常菌群存在的狀態(tài)下，其免疫系統(tǒng)的機(jī)能特別低下，若干器官變小，這在原來(lái)充滿大量細(xì)菌的盲腸中表現(xiàn)得尤為突出；②營(yíng)養(yǎng)要求變得特殊，例如需要維生素K；③對(duì)屬于非致病菌的Bacillussubtilis（枯草桿菌）和Micrococcus（藤黃微球菌）等變得極為敏感，并易患??；④對(duì)原來(lái)易患的阿米巴痢疾，因這種原生動(dòng)物得不到細(xì)菌作食物，所以無(wú)菌動(dòng)物反而不易患了。無(wú)菌動(dòng)物和附生微生物與動(dòng)物體表面存在著大量正常菌群一樣，在植物體表面也存在著正常微生物區(qū)系。3．根際微生物在自然界中，碳及含碳化合物以多種狀態(tài)存在著。其中周轉(zhuǎn)最快的是大氣中的CO2（含量為0.032％）、溶于水中的CO2,H2CO3中的碳；極少周轉(zhuǎn)的是含碳巖石（石灰石、大理石）和化石燃料（煤、石油、天然氣等）中所含的碳。(一)微生物與C循環(huán)(三)、硫素循環(huán)硫是生命物質(zhì)所必需的元素，其需要量大約是氮素的十分之一（在生物體內(nèi)C∶N∶S=100∶10∶1）。硫元素在自然界中的貯量十分豐富。硫素循環(huán)類似于氮素循環(huán)，其各個(gè)環(huán)節(jié)都有相應(yīng)的微生物參與。三、微生物和污水處理水源的污染是危害最廣、最大的污染。污水的種類很多，有生活污水、工業(yè)有機(jī)污水（如屠宰、造紙、淀粉和發(fā)酵工業(yè)等的污水）、工業(yè)有毒污水（農(nóng)藥、炸藥、石油化工、電鍍、印染、制革等工業(yè)污水）和其他污水等。其中所含的各種有害物質(zhì)，例如農(nóng)藥、炸藥（TNT、黑索金等）、多氯聯(lián)苯（PCB）、多環(huán)芳烴（致癌劑）、酚、氰和丙烯腈等的污染后果尤為嚴(yán)重。在污水處理方法中，最關(guān)鍵、最有效和最常用的方法是微生物處理法。(一)污水處理中的特殊微生物在自然界中，存在著各種能分解相應(yīng)污染物的微生物類型。例如，已知的能分解氰的微生物就有諾卡氏菌屬、腐皮鐮孢霉、木素木霉和假單胞菌屬等14個(gè)屬的49個(gè)種。一些高分子化合物也是嚴(yán)重污染環(huán)境的化合物，其中的芳香族磺酸鹽可被Pseudomonasputida（惡臭假單胞菌）所降解；1-苯基-十一烷磺酸鹽（ABS）可被Bacillus（芽孢桿菌屬）的菌種所降解。(二)微生物處理污水的原理用微生物凈化污水的過(guò)程，就是在污水處理裝置這一小型生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)，利用各種生理生化性能的微生物類群間的相互配合而進(jìn)行的一種物質(zhì)循環(huán)過(guò)程。當(dāng)高BOD5的污水進(jìn)入污水處理裝置后，其中的自然微生物區(qū)系在好氧條件下，根據(jù)其中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或有毒物質(zhì)的情況，在客觀上造成了一個(gè)選擇性的培養(yǎng)條件，并隨著時(shí)間的推移，發(fā)生了微生物區(qū)系的有規(guī)律的更迭，從而使水中的有機(jī)物或毒物不斷被降解、氧化、分解、轉(zhuǎn)化或吸附沉降，進(jìn)而達(dá)到去除污染物和沉降、分層的效果。自然去除廢氣后的低BOD5清水，可流入河道。而經(jīng)好氧性微生物處理后的廢渣——活性污泥或生物膜的殘余物，是比原來(lái)污水的BOD5更高的有機(jī)物，它們可通過(guò)厭氧處理（又稱污泥消化或沼氣發(fā)酵）而生產(chǎn)出有用的沼氣和有機(jī)肥料。即“五日生化需氧量”。是一種表示水中有機(jī)物含量的間接指標(biāo)，一般指在20℃下，1L污水中所含的有機(jī)物（主要是有機(jī)碳源），在進(jìn)行微生物氧化時(shí)，5日內(nèi)所消耗的分子氧的毫克數(shù)（或ppm數(shù)）。在水處理技術(shù)中，污水處理前后水中BOD5值之差，即可理解為這一處理過(guò)程對(duì)有機(jī)物處理效率的高低。BOD5的測(cè)定，起始于英國(guó)（1870年），目的是為了判斷河水污染的程度以保護(hù)河流。由于英國(guó)的泰晤士河水自源頭至大海流程僅5天左右，且英國(guó)夏天河水的平均溫度在20℃左右，故至今全世界還一直以這一條件為依據(jù)來(lái)測(cè)定BOD5。（1）BOD5（biologicaoxygendemand）使用強(qiáng)氧化劑使1L污水中的有機(jī)物質(zhì)迅速進(jìn)行化學(xué)氧化時(shí)所消耗氧的毫克數(shù)，稱COD或化學(xué)需氧量。污水中除有機(jī)物外，其中的許多無(wú)機(jī)物也能被氧化而產(chǎn)生COD值COD能在短時(shí)間中測(cè)得，有利于指導(dǎo)現(xiàn)場(chǎng)操作。使用的氧化劑一般有KMnO4和K2Cr2O7。KMnO4的氧化力較弱。實(shí)際使用對(duì)常采用K2Cr2O7，作氧化劑，并把測(cè)得的數(shù)值稱為CODcr。同一污水的BOD5與COD值是不一致的，但一般都呈明顯的比例關(guān)系。2）COD（chemicaloxygendemand）(三)污水處理的裝置又稱生化曝氣法。最早由英人Ardern和Lockett創(chuàng)建于1914年。經(jīng)多年修正、改進(jìn)，至今一直是污水處理中的主要方法?；钚晕勰啵阂环N由細(xì)菌、原生動(dòng)物和其他微生物群體與污水中的懸浮有機(jī)物、膠狀物和吸附物質(zhì)在一起構(gòu)成的凝絮團(tuán)，在污水處理中具有很強(qiáng)的吸附、分解和利用有機(jī)物或毒物的能力。1.活性污泥法（activatedsludgeprocess）活性污泥中以細(xì)菌和原生動(dòng)物為主。細(xì)菌有生枝動(dòng)膠菌、浮游球衣菌、亞硝化單胞菌屬、蛭弧菌屬等?；钚晕勰嗳コ鬯哪芰κ菢O高的，它對(duì)生活污水的BOD5去除率可達(dá)95％左右，懸浮固體去除率也達(dá)95％左右，對(duì)污水中的病原細(xì)菌和病毒的去除率均很高。為使對(duì)特殊污染物具有較強(qiáng)的分解效果，還應(yīng)人為地補(bǔ)充一些有機(jī)氮源和磷素營(yíng)養(yǎng)，并培育、接種入相應(yīng)的優(yōu)良分解微生物。如：接入某些鐮孢霉屬和諾卡氏菌屬的一些菌種就能更好地分解氰化物；接入能生長(zhǎng)在0.2％酚溶液中的幾種假單胞菌，例如，食酚假單胞菌和解酚假單胞菌，就能更好地分解污水中的酚?；钚晕勰嗍墙陙?lái)一種利用自然生態(tài)系統(tǒng)凈化污水并具有良好節(jié)能效果的方法。氧化塘是一個(gè)面積大、能接受陽(yáng)光照射的淺池，污水從一端流入，從另一端溢流而出。在氧化塘中存在著三種作用。優(yōu)點(diǎn)是投資少、設(shè)備簡(jiǎn)、操作容易，缺點(diǎn)是它所占據(jù)的土地面積大。

2.氧化塘法（oxidationponds或lagoon）（1）有機(jī)物的好氧性分解和厭氧消化；前者主要由好氧細(xì)菌進(jìn)行，后者則主要由厭氧菌進(jìn)行；（2）光合作用：主要由藻類和水生植物進(jìn)行；（3）藻類細(xì)胞的消除：由各種動(dòng)物進(jìn)行。所以用氧化塘法處理污水實(shí)際上是一個(gè)菌藻共生的生態(tài)系統(tǒng)。①大量以活性污泥或脫落生物膜形式出現(xiàn)的廢渣，必須加以進(jìn)一步處理，否則會(huì)形成“二次污染”；②對(duì)一些BOD5，超過(guò)10000mg／L的有機(jī)廢水，如屠宰廢水等的處理效果很差；③要消耗大量動(dòng)力。上述污水處理方法中存在的問(wèn)題用厭氧消化法即沼氣發(fā)酵正好能克服上述三項(xiàng)困難，此外，還能產(chǎn)生大量的生物能——沼氣，化廢為寶，因此近年來(lái)已受到各方面的重視。按其生物化學(xué)本質(zhì)來(lái)說(shuō)，就是一種由產(chǎn)甲烷菌進(jìn)行的甲烷形成過(guò)程。1906年，V.L.Omeliansky提出了甲烷形成的一個(gè)階段理論，即由纖維素等復(fù)雜有機(jī)物經(jīng)甲烷細(xì)菌分解而直接產(chǎn)生CH4和CO2。3.沼氣發(fā)酵I6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%r#rZoWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5E2A+x*x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLa