GMP質(zhì)量體系05、紫外分光光度法操作規(guī)程

____________________________________________________________________________________________________第3頁(yè)共3頁(yè)文件名稱(chēng)紫外分光光度法操作規(guī)程文件編號(hào)JB-TZ-005-A編制人編制日期年月日復(fù)制份數(shù)審核人審核日期年月日頒發(fā)部門(mén)質(zhì)量管理部批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期年月日生效日期分發(fā)部門(mén)質(zhì)檢科、質(zhì)?？?、質(zhì)量管理部編訂依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版目的：建立一個(gè)紫外分光光度法試驗(yàn)操作規(guī)程。范圍：物料檢驗(yàn)。責(zé)任：檢驗(yàn)員、質(zhì)檢科長(zhǎng)、質(zhì)?？崎L(zhǎng)、質(zhì)量總監(jiān)。內(nèi)容：分光光度法分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。常用波長(zhǎng)范圍為：（1）200~400nm的紫外光區(qū)，（2）400~760nm的可見(jiàn)光區(qū)，（3）2.5~25μm（按波數(shù)計(jì)為4000-1~400-1cm）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)，可見(jiàn)光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測(cè)量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器應(yīng)按照國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進(jìn)行校正檢定。單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比，其關(guān)系如下式：式中：A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是（），即吸收度換算成溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm的吸收度數(shù)值；C為100mL中所含被測(cè)物質(zhì)的重量，（按干燥品或無(wú)水物計(jì)算）g；L為液層厚度，cm。物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后，可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸收度，即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定，故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。紫外分光光度法文件名稱(chēng)紫外分光光度法操作規(guī)程文件編號(hào)JB-TZ-005-A1、儀器的校正和檢定由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。常用汞燈中的較強(qiáng)譜線237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm與576.96nm，或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正，鈥玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm、與637.5nm波長(zhǎng)處有尖銳吸收峰，也可作波長(zhǎng)校正用，但因來(lái)源不同會(huì)有微小的差別，使用時(shí)應(yīng)注意。吸收度的準(zhǔn)確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱(chēng)定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在下表規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算其吸收系數(shù)。規(guī)定的吸收系數(shù)如下表，相對(duì)偏差可在±1%以?xún)?nèi)。波長(zhǎng)，nm235257313350（最?。ㄗ畲螅ㄗ钚。ㄗ畲螅┪障禂?shù)124．5144．048．62106．6雜散光的檢查可按下表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在下表規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。試劑濃度%（g/ml）測(cè)定用波長(zhǎng)nm透光率%碘化鈉亞硝酸鈉1.005.00220340<0.8<0.82、對(duì)溶劑的要求測(cè)定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求；即用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)）測(cè)定其吸收度，溶劑和吸收池的吸收度，在220—240nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.40；在241—250nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.20；在251—300nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.10，在300nm以上時(shí)不得超過(guò)0.05。3、測(cè)定法測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)±2nm以?xún)?nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±1nm以?xún)?nèi)；否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度，并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3—0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度會(huì)偏低；狹縫寬度的選擇應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。文件名稱(chēng)紫外分光光度法操作規(guī)程文件編號(hào)JB-TZ-005-A用作鑒別和檢查項(xiàng)目的方法，分別按各品種項(xiàng)下的方法進(jìn)行。鑒別項(xiàng)下吸收度讀數(shù)的范圍可根據(jù)配制供試液時(shí)稀釋倍數(shù)及制劑的實(shí)際含量確定。用于含量測(cè)定的方法一般有以下幾種：（1）對(duì)照品比較法按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100±10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度：Cx=(Ax/Ar)Cr式中Cx為供試品溶液的濃度；Ax為供試品溶液的吸收度；Cr為對(duì)照品溶液的濃度；Ar為對(duì)照品溶液的吸收度。（2）吸收系數(shù)法按各種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。（