微生物學第7章細菌與病毒的微生物學檢查20091106課件

第7章

細菌與病毒的微生物學檢查法LaboratoryDiagnosisofBacterialandViralInfectionsInstructorinMicrobiologyDept.ofHMUNov.6,2009病原學檢查程序標本分離培養(yǎng)鑒定怎么辦培養(yǎng)基制備細菌培養(yǎng)法三段劃線、純培養(yǎng)無菌技術油鏡使用、細菌形態(tài)學觀察革蘭染色法生化反應觀察藥敏試驗血清學診斷核酸檢測標本染色鏡檢血平板觀察可疑菌落染色鏡檢純培養(yǎng)甘露醇發(fā)酵試驗血漿凝固酶試驗耐熱核酸酶試驗動物試驗藥敏試驗化膿性球菌的分離鑒定程序MicrobiologyLab標本的采集與送檢原則無菌操作感染部位、病變部位采集標本不同時間采集不同標本盡量在使用抗生素前采集檢查特異性抗體，采急性期和恢復期雙份血清及時送檢第一節(jié)細菌感染的微生物血檢查法形態(tài)學檢查細菌染色檢查法暗視野檢查形態(tài)和染色性有明顯特征的病原菌革蘭染色結果比較抗酸染色革蘭染色陽性菌革蘭染色陰性菌（葡萄球菌）（大腸埃希菌）結核分枝桿菌

M．Tuberculosis確定細菌性感染最可靠的方法培養(yǎng)特征形態(tài)特征

病原菌的分離和鑒定：Flamesterilizewireloop,metalforceps,etcbeforeandafteruseinahoodedBunsenburner糖發(fā)酵試驗H2S試驗枸櫞鹽利用試驗細菌代謝產物的檢測得到細菌純培養(yǎng)物后，用糖發(fā)酵試驗、吲哚試驗、硝酸鹽還原試驗等對細菌的酶系統(tǒng)和其代謝產物的檢查，是鑒別細菌的重要方法之一。特別是有些細菌特征基本相同，因此有必要經分離培養(yǎng)后用生化試驗進行鑒定。但步驟繁雜耗時。隨著現(xiàn)代化技術的發(fā)展，細菌檢測的技術水平也不斷地提高，正在逐步實現(xiàn)快速化、微量化、自動化和標準化。生化反應血清學鑒定利用含已知的特異性抗體的免疫血清，對細菌（志賀菌屬、沙門菌屬）進行群和型的鑒別常用方法是玻片凝集試驗毒力檢測半數(shù)致死量LD50

半數(shù)感染量ID50Elek平板

紙碟法試管法小杯法凹孔法

最低抑菌濃度（MIC）是能夠抑制細菌生長的最低藥物濃度；最低殺菌濃度（MBC）是指能夠殺滅細菌最低藥物濃度；MIC和MBC的值越低，表示細菌對該藥越敏感藥物敏感試驗二、病原菌成分檢測抗原的檢測用已知的特異性抗體檢測未知的細菌抗原成分核酸的檢測核酸雜交PCR細菌核酸的檢測基因探針DNA印跡雜交(southernblot)質粒指紋圖譜分析PCRPCRMachine聚合酶鏈反應（PCR）PCR產物的檢測三、抗體的檢測輔助診斷抗體存在于血清或其他體液中

Immunologyevaluatesapatientimmunesystembydetectingthebodiesresponse(anantibody)toaforeignagent(orantigen).Thepresenceofantigenscanbedetectedtoo細菌感染的血清學診斷血清學試驗舉例凝集試驗肥達反應補體結合試驗鉤體病中和試驗抗O試驗HANAAinHand

Aboutthesizeofabrick,theHANAAbiodetectionsystemcanbeheldinonehandandweighslessthanakilogram.Thesystemwasdesignedforemergencyresponsegroups,suchasfirefightersandpolice,whoareoftenfirstonthesceneatsiteswherebioterrorismmayhaveoccurred.Eachhandheldsystemcantestfoursamplesatonce—eitherthesametestonfourdifferentsamplesorfourdifferenttestsonthesamesample.HANAAcanprovideresultsinlessthan30minutes,comparedwiththehourstodaysthatregularlaboratoryteststypicallytake.

BioSensorsThistechniqueisessentiallyanELISA(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay)method,howeverwithanextremelysensitiveall-electronicdetectionsystem.Tinycomputerchipcandetecttoxins

The"labonachip,"itsdeveloperssay,couldhavepotentialapplicationsinlawenforcement,environmentalpollutiondetection,militarymedicalcare,orforanyonewhoneedsacheapandportablemethodofidentifyingthepresenceofspecifictoxinsorDNAwithoutthebenefitofalaboratory.

"Thisdevicecouldbedevelopedintosomethingmedicsuseinthefieldtogetanswersinamatterofminutesratherthanhours."Researchonthefluorescencemicroscopydetectionsystem,whichprovidesacheapandportablemethodforidentifyingspecifictoxinsorDNA,wasfundedbytheNationalScienceFoundation.

UCBERKELEYPHOTO第二節(jié)

病毒感染的微生物學檢測法

一、形態(tài)學檢查電子顯微鏡光學顯微鏡

內基小體（Negribody），可輔助診斷狂犬病掃描電鏡透射電鏡狂犬病病毒天花病毒

冠狀病毒

SARS冠狀病毒二、病毒分離培養(yǎng)的方法采集標本抑制雜菌（青、鏈霉素）病毒分離易感動物----出現(xiàn)病狀雞胚------病變或死亡細胞培養(yǎng)---細胞病變病毒鑒定（血清學方法）動物接種雞胚培養(yǎng)組織培養(yǎng)

細胞培養(yǎng)原代細胞二倍體細胞傳代細胞細胞培養(yǎng)技術三、病毒在細胞內增殖的鑒定指標細胞病變效應（cytopathiceffect，CPE）

紅細胞吸附（hemadsorption）紅細胞凝集（hemagglutination）病毒干擾作用（viralinterference）中和試驗（neutralizationtest，NT）正常細胞病變細胞病毒的定量TCID50病毒感染性和毒力的指標是50%組織細胞感染量（50%tissuecultureinfectiousdose）PFU空斑形成試驗（plaqueformation）用于病毒濃度的精確定量空斑形成試驗紅細胞吸附hemadsorption

病毒在細胞內增殖，病毒或其血凝素會出現(xiàn)于感染細胞膜上，使感染細胞能與紅細胞結合。檢測正粘病毒和副粘病毒的間接指標Hemadsorptionofmonkeyredbloodcells紅細胞凝集hemagglutination

一種檢測含血凝素病毒的方法四、病毒成分的檢測病毒核酸的檢測

核酸雜交技術核酸擴增技術基因芯片（genechip）病毒抗原的檢測熒光標記技術、ELISA或放射免疫標記技術將已知的抗病毒血清先與病毒懸液混合在一起，在一定溫度條件下作用一定時間后，接種于敏感細胞進行培養(yǎng)，觀察病毒致細胞病變作用或