準確性的指標靈敏度與特異度等教案資料

腫瘤(zhǒngliú)免疫學檢驗第一頁，共38頁。概述腫瘤免疫學檢驗主要涉及腫瘤免疫學診斷(zhěnduàn)和腫瘤患者免疫功能狀態(tài)的評估。而目前臨床上用于腫瘤免疫學診斷(zhěnduàn)項目主要是腫瘤標記物檢測，但目前使用腫瘤標記物都是腫瘤非特異性標記物，不僅由腫瘤細胞產(chǎn)生，存在腫瘤患者血液和體液中；也可以正常體細胞產(chǎn)生，健康者血液和體液中也會存在一定量腫瘤標記物，因此，如果將腫瘤標記物作為腫瘤診斷(zhěnduàn)指標時，對臨床上使用的腫瘤標記物進行生物參考區(qū)間評價和診斷(zhěnduàn)性能評價就顯得非常重要，本單元主要以AFP和PSA為例以達到舉一反三作用。第二頁，共38頁。實驗一

血清AFP參考(cānkǎo)區(qū)間建立實驗第三頁，共38頁。實驗室應為檢驗項目提供可靠的參考區(qū)間，才能(cáinéng)使臨床對健康普查者的檢驗結(jié)果作出判斷，對病人檢驗結(jié)果有大致的了解，發(fā)揮檢驗報告的作用。因此獲得檢驗項目可靠的參考區(qū)間是實驗室的重要任務。參考區(qū)間的評價一般包括參考區(qū)間的建立和參考區(qū)間的驗證實驗。第四頁，共38頁。實驗(shíyàn)目的掌握血清AFP參考區(qū)間建立實驗的原理和方法學，以ModularAnalyticsE170自動電化學發(fā)光免疫分析(fēnxī)系統(tǒng)測定AFP參考區(qū)間的建立流程為例加以說明。第五頁，共38頁。實驗(shíyàn)原理先確定AFP參考區(qū)間建立時的納入人群(rénqún)的標準，選擇參考個體，按該項目的檢測要求收集標本并在檢測系統(tǒng)性能良好的狀態(tài)下進行AFP濃度的檢測，收集檢測結(jié)果，統(tǒng)計分析，確定化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)AFP測定的參考區(qū)間。第六頁，共38頁。試劑(shìjì)與器材選用與檢測儀器相配套的試劑、校準(jiàozhǔn)品及其他輔助試劑。按照納入人群的標準，選擇參考人群的新鮮血清標本。第七頁，共38頁。操作步驟根據(jù)文獻和實驗研究，總結(jié)對該項目檢測結(jié)果產(chǎn)生的生物變異和分析干擾的因素，供選擇參考個體(gètǐ)時用。確定參考個體(gètǐ)的選擇原則（或排除非參考個體(gètǐ)的原則），編寫與之對應的調(diào)查表。依據(jù)調(diào)查表和其他有關(guān)記錄，挑選候選的參考個體(gètǐ)。應按照項目在臨床使用的要求選擇參考個體(gètǐ)，在選擇參考個體(gètǐ)對象時，要兼顧各年齡段，同時應考慮是否有分組的必要（最常見的是分年齡組和性別組）。依據(jù)排除原則，剔去不符要求的候選對象。第八頁，共38頁。將采集標本前和采集時對受檢查的要求，詳細告訴(ɡàosù)各個受檢參考個體，做好準備，要求予以配合。規(guī)范地采集標本，做好分析前的標本預處理。按照相應規(guī)程做好標本采集、處理、運送和保存，此外，還應考慮標本采集時的環(huán)境條件，標本采集者技術(shù)熟練要求和服務態(tài)度等。在良好的控制條件下，用事先指定的分析方法對標本進行檢測，獲得參考值結(jié)果。分析樣品的檢驗方法應有方法學可靠性評價，測定過程有完整質(zhì)量控制措施第九頁，共38頁。結(jié)果計算(jìsuàn)和分析繪制分布圖，了解數(shù)據(jù)的分布特性。若數(shù)據(jù)呈高斯正態(tài)分布，或者數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換后亦呈高斯分布，可按士1.96S表示95％數(shù)據(jù)分布范圍，或者士2.58S表示99％分布范圍等確定參考(cānkǎo)限和參考(cānkǎo)區(qū)間。第十頁，共38頁。參考對象群體值的特定百分數(shù)（通常是95％）非參數(shù)和參數(shù)分析：是否正態(tài)分布確定參考范圍的最小樣本量隨機至少(zhìshǎo)120個觀察對象第十一頁，共38頁。注意事項

為確保參考(cānkǎo)范圍數(shù)據(jù)的可靠性，建議至少取120個參考(cānkǎo)值數(shù)據(jù)，若還需分組統(tǒng)計，則每個分組應有120個數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)中的疑似離群點的判斷，建議將疑似離群點和其相鄰點的差值D和數(shù)據(jù)全距R相除，D/R若大于等于1/3考慮為離群點。若有2個或以上疑似離群點，可將最小的疑似離群點作如上處理，若都大于1/3，則所有疑似點都剔去；若都小于1/3，則保留所有數(shù)據(jù)。若有離群點被剔除后，應即將其他數(shù)據(jù)補上。若數(shù)據(jù)不呈高斯正態(tài)分布，則可用非參數(shù)法處理。最常見的是以百分位數(shù)法確定2.5％和97.5％位數(shù)的參考(cānkǎo)限，以此確定95％參考(cānkǎo)區(qū)間。第十二頁，共38頁。方法(fāngfǎ)評價建立參考區(qū)間是實驗室開展新的檢驗項目前必然要進行(jìnxíng)的一項工作，但由于其需要標本例數(shù)多，對人群的納入標準要求嚴格；大多實驗室參照試劑說明書、教材、或其它權(quán)威資料轉(zhuǎn)移為本實驗室的參考區(qū)間，但需對此類選用的參考區(qū)間進行(jìnxíng)驗證評審。采用簡單的方法予以證實，如選取20位健康者，有90%以上的測定結(jié)果在參考區(qū)間內(nèi)，即說明實驗室選用的參考區(qū)間有效。第十三頁，共38頁。思考題

請設計(shèjì)建立AFP參考區(qū)間的抽樣人群的納入標準？溫州醫(yī)學院陶志華第十四頁，共38頁。實驗(shíyàn)二

血清PSA診斷前列

腺癌的性能評價實驗(shíyàn)第十五頁，共38頁。PSA（前列腺特異性抗原）是一個分子量大約為34000道爾頓的糖蛋白。在正常的、良性肥大的和惡性變的前列腺組織內(nèi)以及前列腺液和精液內(nèi)均可發(fā)現(xiàn)PSA。血清(xuèqīng)PSA作為前列腺癌診斷指標時，具有較好診斷靈敏度，但存在診斷特異度較低問題，目前，不推薦將PSA檢測作為對普通人群或?qū)o癥狀患者的癌癥篩查項目，也不應當作為判斷是否存在惡性疾病的一個絕對性依據(jù)。有必要對臨床使用的血清(xuèqīng)PSA診斷前列腺癌的效能進行評價。第十六頁，共38頁。實驗(shíyàn)目的本實驗(shíyàn)項目是如何評價定量檢測項目對疾病診斷價值。本實驗(shíyàn)以血清PSA定量測定為例，評價血清PSA對前列腺癌診斷價值。第十七頁，共38頁。實驗(shíyàn)原理對選擇的納入研究對象的患者采取血液，進行PSA定量檢測；對納入研究對象的患者采取前列腺組織穿刺病理檢查(jiǎnchá)，將研究對象分為前列腺癌組和前列腺增生組。根據(jù)PSA定量檢測結(jié)果制作ROC曲線，根據(jù)不同cutoff值，評價其診斷的的準確性（靈敏度、特異度、診斷準確度等）和有效性（陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比、陰性似然比）。第十八頁，共38頁。臨床診斷試驗結(jié)果與患病情況(qíngkuàng)的關(guān)系診斷試驗分定性試驗和定量(dìngliàng)試驗。定性試驗的結(jié)果分為陽性和陰性結(jié)果定量(dìngliàng)試驗結(jié)果也可根據(jù)臨床診斷截斷值轉(zhuǎn)化為陽性和陰性結(jié)果。第十九頁，共38頁。試驗(shìyàn)結(jié)果與疾病的關(guān)系真陽性(yángxìng)（truepositiveTP）假陽性(yángxìng)（falsepositiveFP）真陰性（truenegativeTN）假陰性（falsenegativeFN）

罹患疾病情況

患病健康試

陽性

TP(a)FP(b)驗

陰性

FN(c)TN(d)第二十頁，共38頁。疾病診斷的金標準(biāozhǔn)金標準（goldstandard）：是指通過活檢、尸檢、外科手術(shù)、隨訪等所作出的決定性診斷。診斷試驗：是指一般檢查方法，具有(jùyǒu)費用低，操作方便，對病人無損害，快速等優(yōu)點。第二十一頁，共38頁。診斷試驗性能(xìngnéng)評價指標包括準確性和有效性兩方面的指標(zhǐbiāo)：準確性的指標(zhǐbiāo)：靈敏度與特異度等。有效性的指標(zhǐbiāo)：預告值和似然比等。第二十二頁，共38頁。準確度評價(píngjià)指標1.診斷靈敏度（sensitivity,Se）又稱敏感度、敏感性，指在患病者中，應用該診斷試驗檢查得到(dédào)陽性結(jié)果的百分比。反映診斷試驗正確識別患病者的能力,該值愈大愈好。靈敏度＝×100%

＝×100%

患病

TP(a)FP(b)

FN(c)TN(d)第二十三頁，共38頁。2.診斷(zhěnduàn)特異度(specificity,Sp)又稱特異性，指在非某病者中，應用(yìngyòng)該試驗獲得陰性結(jié)果的百分比。反映正確鑒別非患者的能力，該值愈大愈好。特異度＝×100%

＝×100%

健康TP(a)

FP(b)FN(c)

TN(d)第二十四頁，共38頁。3.診斷(zhěnduàn)準確度（accuracy，AC）是指所有試驗個體中，診斷試驗能準確劃分患者(huànzhě)和非患病者的百分比。反映診斷試驗正確診斷患者(huànzhě)與非患者(huànzhě)的能力。診斷準確度＝×100%

＝×100%TP(a)FP(b)FN(c)TN(d)第二十五頁，共38頁。試劑(shìjì)與器材用于定量(dìngliàng)PSA檢測的相應儀器與試劑。第二十六頁，共38頁。操作步驟確定研究對象的納人排除標準：納入以前列腺增生為癥狀就診于本院泌尿外科的患者。排除膀胱炎癥和膀胱癌患者。確定金標準：采用前列腺組織穿刺病理檢查，根據(jù)病理結(jié)果將研究對象分為前列腺癌組和前列腺增生組。確定抽樣方法和樣本含量的確定估計：采用簡單隨機抽樣。根據(jù)檢驗(jiǎnyàn)水準α取值、患病率和允許誤差的要求，計算試驗所需要的病例數(shù)。第二十七頁，共38頁。標本的采集與檢測：患者均于前列腺檢查前抽取非抗凝靜脈血，離心5min分離血清，測定血清PSA含量。測量采用單盲原則，在未知被測標本所代表患者的確診診斷的前提下完成(wánchéng)所有的檢測工作。第二十八頁，共38頁。結(jié)果(jiēguǒ)計算將病理檢查結(jié)果和PSA定量檢測結(jié)果分別輸入SPSS13.0軟件ROCCurve分析的statevaribale應變量(二分類變量)和Testvariable自變量(連續(xù)型變量)，Valueofstatevaribale中設定二分類變量的臨界點。運行結(jié)果：（1）ROC曲線,可直觀地看到曲線形狀;（2）areaunderthecurve：曲線下方的面積,包括面積值,顯著性分析,置信區(qū)間;（3）Coordinatesofthecurve：ROC曲線各點對應(duìyìng)的靈敏度和誤判率。制作的ROC曲線。第二十九頁，共38頁。計算診斷效能評價指標：根據(jù)臨床診斷需求，確定(quèdìng)臨床診斷截斷值，再確定(quèdìng):診斷準確性評價指標診斷靈敏度、診斷特異性和診斷特異性等診斷有效性評價指標陽性預測值、陰性預測值、陽性似然比和陰性似然比等結(jié)果(jiēguǒ)計算第三十頁，共38頁。實驗(shíyàn)結(jié)果根據(jù)實驗結(jié)果，正確評價在本院使用PSA定量檢測對前列腺癌的診斷(zhěnduàn)價值？第三十一頁，共38頁。思考題如何保證實驗過程中血清PSA定量檢測(jiǎncè)結(jié)果一致性和準確性？如何制作ROC曲線？溫州醫(yī)學院陶志華第三十二頁，共38頁。病案討論

腫瘤(zhǒngliú)免疫學檢測第三十三頁，共38頁。某患者(huànzhě)，男，38歲。乙型肝炎病史十年，因急性黃疸收治入院，入院后當天就進行血漿置換治療。實驗室檢查為：病案(bìngàn)討論一第三十四頁，共38頁。實驗室檢測(jiǎncè)結(jié)果檢查時間血清學檢查項目AFP（ng/ml）Alb（g/L）T-Bil(μmol/L)D-Bil(μmol/L)I-Bil(μmol/L)ALT（U/L）入院時28.017.5238.7237.31.41680.4入院第2天47.222.3214.9213.11.81370.9入院第4天68.826.4147.5145.42.1860.9入院第7天112.729.287.484.92.5