生化實(shí)驗(yàn)(五)-(綜合性實(shí)驗(yàn)一) 血糖的測定 - (葡萄糖氧化酶法)(對比法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法)

血糖的測定實(shí)驗(yàn)五

(葡萄糖氧化酶法)（綜合性實(shí)驗(yàn)一）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅赫莆彰嘎?lián)法測定血糖含量的基本原理。熟悉分光光度計(jì)的操作。掌握血糖正常水平及其測定的臨床意義。復(fù)習(xí)血糖的來源、去路及其調(diào)節(jié)的有關(guān)理論知識。

葡萄糖為一含醛基的已糖，在pH7.0條件，葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase,GOD）可催化血樣中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及過氧化氫。后者在過氧化物酶（peroxidase,POD）的作用下與苯酚，4-氨基安替毗啉氧化縮合成紅色醌式物質(zhì)，在505nm處有最大吸收峰。標(biāo)本中葡萄糖含量與吸光度成正比，可求得血樣中葡萄糖的含量。二、基本原理：β-D葡萄糖+O2+H2Oβ-D葡萄酸+H2O2葡萄糖氧化酶(GOD)H2O2

+4-氨基安替吡啉+苯酚H2O+紅色醌式物質(zhì)過氧化物酶(POD)原理505nm有最大吸收峰

正常血糖水平為80—120毫克／100ml，在糖尿病及腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)和腦下垂體機(jī)能亢進(jìn)的患者血中葡萄糖含量可顯著升高，饑餓時(shí)，血糖水平可下降。【器材】硬質(zhì)中試管容量瓶、燒杯、玻璃棒電子天平微量移液器【試劑】工作液（酶酚混合試劑）葡萄糖雙蒸水待測樣品三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑：取硬質(zhì)中試管三支，分別標(biāo)以1、2、3號，按下表操作：混勻后同時(shí)將三支試管置于37℃水浴中，保溫10分鐘，在波長505nm處比色。以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管吸光度。（即測得A樣和A標(biāo)）四、實(shí)驗(yàn)操作：葡萄糖氧化酶法測定血糖的含量原理：步驟：空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣品管工作液1.5mL1.5mL1.5mL蒸餾水0.03mL標(biāo)準(zhǔn)液（10mM）0.03mL樣品0.03mL

取3根試管，分別加入試劑混合均勻后，37攝氏度孵育10min，505nm比色，以空白管試劑調(diào)零，分別讀取標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管的吸光值，并計(jì)算樣品的實(shí)際濃度。葡萄糖+O2+H2O葡萄糖氧化酶葡萄糖酸+H2O22H2O2+4-氨基安替吡啉+酚過氧化物酶

醌亞胺+4H2O結(jié)果：請記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)并列出計(jì)算公式葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制配制10mmol/L葡萄糖溶液：

準(zhǔn)確稱量0.18g葡萄糖粉末；

用雙蒸水溶解，充分溶解后，定容至100ml。標(biāo)準(zhǔn)曲線試管編號012345610mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ml）00.0050.010.0150.0200.0250.030雙蒸水（ml）0.0300.0250.0200.0150.0100.0050酶酚混合液（ml）1.501.501.501.501.501.501.50【計(jì)算】待測樣品中葡萄糖濃度（mmol/L）＝——————×10