沈萍微生物學(xué)第三章

第三章微生物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)

與功能本節(jié)重點：革蘭氏陽性細(xì)菌與革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成的比較。革蘭氏染色步驟與機(jī)制。四種缺壁細(xì)菌的形成、特點及應(yīng)用細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造模式圖細(xì)胞構(gòu)造

一般構(gòu)造細(xì)胞壁，細(xì)胞膜，細(xì)胞質(zhì)，核區(qū)，內(nèi)含物

特殊構(gòu)造鞭毛，菌毛，性毛，芽孢，糖被第一節(jié)原核微生物

一.細(xì)胞壁概念功能分類依據(jù)1.革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)：一連續(xù)層20—80nm化學(xué)組成:(1).肽聚糖

單體結(jié)構(gòu)—雙糖單位，四肽尾，肽橋及種類雙糖單位

M—G—M—G—M—G—M—GN-乙酰葡萄糖胺N-乙酰胞壁酸β-1，4糖苷鍵短肽：

由四個氨基酸組成L-丙氨酸D-谷氨酸L-賴氨酸（G+）或（m-二氨基庚二酸，G-）D-丙氨酸肽橋

連接前后2個四肽尾分子的橋梁肽橋的變化很多主要肽橋類型類型甲肽尾上連接點肽橋乙肽尾上連接點實例1第四氨基酸—CO-NH—第三氨基酸E.Coli2第四氨基酸—(Gly)5—第三氨基酸S.aureus3第四氨基酸—D-Lys—第二氨基酸星星木棒桿菌4第四氨基酸—（肽尾）1-2—第三氨基酸藤黃微球菌肽聚糖單體單層肽聚糖溶菌酶:能使肽聚糖中G---M----G處斷裂每隔6個左右斷裂一次。青霉素:能抑制轉(zhuǎn)肽酶的活性，使G+中的短肽不能交聯(lián)，低滲使細(xì)胞膜破裂而死亡。所以青霉素只作用在正在迅速繁殖的細(xì)胞中。(2).磷壁酸也稱垣酸，是G+菌細(xì)胞壁所特有成分；屬于高分子酸性多糖；一般占細(xì)胞壁含量的10%--50%。分為兩類：壁磷壁酸和膜磷壁酸壁磷壁酸：與肽聚糖分子（M）共價結(jié)合膜磷壁酸：分子穿過肽聚糖分子層直接與細(xì)胞膜上的磷脂進(jìn)行共價結(jié)合形成種類（1）甘油磷壁酸甘油磷酸重復(fù)單位（2）核糖醇磷壁酸核糖醇磷酸重復(fù)單位

結(jié)構(gòu):功能：提高M(jìn)g2+濃度貯藏磷元素防吞噬表面抗原噬菌體受體自溶素

2.革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁（1）肽聚糖（2）.外膜（外壁）

組成：脂多糖，磷脂，脂蛋白脂多糖（LPS）位于G-細(xì)胞壁的最外層8-10nm；脂多糖的結(jié)構(gòu)------類脂A、

核心多糖、

O-特異側(cè)鏈構(gòu)成；LPS是多變的，決定了G-菌抗原決定簇的多樣性（3）外膜蛋白:

脂蛋白——用于連接脂多糖和肽聚糖孔蛋白——參與物質(zhì)的運輸外壁層的作用：

是G-的致病物質(zhì)—內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ)；有吸附Mg2+、Ca2+等陽離子的作用；決定了G-的表面抗原性；是許多噬菌體的表面吸附受體。

細(xì)胞壁的功能（1）維持外形：（2）保護(hù)細(xì)胞（3）輔助鞭毛運動：（4）正常細(xì)胞分裂所必需（5）與細(xì)菌的抗原性，噬菌體的敏感性，陽離子吸附，毒性等有關(guān)

（3）.外膜蛋白（4）.周質(zhì)空間

概念：在革蘭氏陰性細(xì)菌中，一般指外膜與細(xì)胞膜之間的狹小空間。

革蘭氏陽性細(xì)菌細(xì)胞壁與革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁在結(jié)構(gòu)和組成上的差異比較見下表3、古生菌的細(xì)胞壁類型：熱原體屬-----無細(xì)胞壁甲烷桿菌屬-----假肽聚糖（β-1，3鍵）甲烷八疊球菌-----獨特多糖細(xì)胞壁鹽球菌屬------硫酸化多糖細(xì)胞壁鹽桿菌屬-----糖蛋白細(xì)胞壁甲烷球菌、甲烷微菌、甲烷螺菌屬---蛋白質(zhì)細(xì)胞壁假肽聚糖結(jié)構(gòu)

雙糖連接鍵肽橋肽尾肽聚糖假肽聚糖菌類細(xì)菌古生菌糖苷鍵β－1，4β－1，3二糖G－MG－乙酰塔羅糖胺糖醛酸短肽L－型、D－型、4肽全L－型、3肽肽橋(Gly)5-CO-NH-L-Glu原生質(zhì)體：G+菌除去細(xì)胞壁后剩余的部分。球形體：G-菌處理后細(xì)胞壁不能完全除去，為球形體。L型菌：專指那些實驗室或宿主通過自發(fā)突變而形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺陷菌株。支原體：自然界自然進(jìn)化的缺壁細(xì)菌是支原體它細(xì)胞膜中含有甾醇，因此仍有較高的機(jī)械強(qiáng)度4.缺壁細(xì)菌L-細(xì)菌原生質(zhì)體球狀體支原體獲得方式自發(fā)突變?nèi)芫?/p>

G+溶菌酶

G-長期進(jìn)化遺傳穩(wěn)定+--+振蕩等敏感-++-含甾醇---+5.革蘭氏染色機(jī)制1884年丹麥C.Gram創(chuàng)立方法步驟

結(jié)晶紫初染碘液媒染酒精脫色沙黃復(fù)染結(jié)果：紫色------G+菌紅色------G-菌關(guān)鍵步驟：酒精脫色機(jī)理：

95%乙醇的作用：蛋白質(zhì)變性、脫水、溶脂革蘭氏陽性菌肽聚糖的含量高，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)緊密，細(xì)胞壁厚，含脂量低，當(dāng)它被酒精脫色時，引起細(xì)胞壁肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的孔經(jīng)縮小以至關(guān)閉，從而阻止不溶性結(jié)晶紫-碘復(fù)合物的逸出，故菌體呈深紫色；而革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁的肽聚糖的含量低，網(wǎng)層結(jié)構(gòu)疏松且薄，脂含量高，當(dāng)用酒精脫色時，脂類物質(zhì)溶解，增加了細(xì)胞壁的通透性，結(jié)果結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物就被乙醇抽提出來而復(fù)染成紅色。二.細(xì)胞壁以內(nèi)的構(gòu)造---原生質(zhì)體1.細(xì)胞質(zhì)膜概念:

是緊靠在細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)、包圍細(xì)胞質(zhì)的一層柔軟而富有彈性的半透性薄膜厚7-8nm，占細(xì)胞干重的10%。(1)．細(xì)胞膜化學(xué)組成:蛋白質(zhì)50-70%，磷脂20-30%，少量的糖2%蛋白質(zhì)與膜的透性酶的活性有關(guān)。

(2).結(jié)構(gòu)模型:液態(tài)鑲嵌模型要點：1.脂質(zhì)雙分子層2.蛋白質(zhì)在膜中不對稱分布，形成通道3.蛋白質(zhì)在脂質(zhì)間可相對移動4.脂質(zhì)排列的有序性(3).細(xì)胞膜的功能

①具有選擇透性，②維持細(xì)胞內(nèi)正常滲透壓的屏障作用。③是產(chǎn)能代謝的場所。④具有物質(zhì)合成的功能。如合成細(xì)胞壁組分的酶⑤鞭毛的著生點并提供其運動能量特點：（1）一般不含膽固醇，但有藿烷類化合物（2）膜上有電子傳遞系統(tǒng)

間體

概念：是一種細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)皺而形成的囊狀構(gòu)造。功能：與一些酶分泌有關(guān)與DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂有關(guān)2.細(xì)胞質(zhì)和內(nèi)含物

細(xì)胞膜包圍的除核區(qū)以外的所有物質(zhì)的總稱。為無色半透明、粘稠的膠狀物。

主要成分為水（80%）、蛋白質(zhì)、核酸、脂類、并含有少量糖、無機(jī)鹽及顆粒狀內(nèi)含物。細(xì)胞質(zhì)富含核酸，因而嗜堿性強(qiáng)，幼齡著色均勻。

.核糖體-----

70S50S大亞基+30小亞基=70S原核60S大亞基+40小亞基=80S真核蛋白質(zhì)的合成場所

貯藏物-----類型聚β-羥丁酸PHB（或PHA）------碳源

異染粒---------------磷源

藻青素---------------氮源硫滴------------------硫源磁小體---------------Fe3O4羧酶體-------------固定CO2，.其他：羧酶體----自養(yǎng)生物

氣泡-------水生生物3.核區(qū)：原核---無核膜，一個閉合環(huán)狀的雙鏈DNA分子，其長度可達(dá)0.25～3.0mm，裸露它分散于細(xì)胞質(zhì)中，在細(xì)胞內(nèi)是高度折疊纏繞,核區(qū)一般呈球狀、棒狀、啞鈴狀,生長迅速時可在一個細(xì)胞內(nèi)找到幾個（2—4個）（一般1-2個)質(zhì)粒----在許多細(xì)菌存在有細(xì)胞染色體外或附加于染色體上的遺傳物質(zhì)，稱為質(zhì)粒。（cccDNA），

質(zhì)粒能夠自我復(fù)制；分子量比細(xì)菌染色體??；每個菌體內(nèi)有一個或多個質(zhì)粒；決定次要性狀；可整合，可脫落；細(xì)胞間可轉(zhuǎn)移；思考題1、解釋：磷壁酸、脂多糖，周質(zhì)空間間體2、試述革蘭氏陽性細(xì)菌與革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁在結(jié)構(gòu)和組成的差異。3、試述革蘭氏染色的機(jī)理。4、四種缺壁細(xì)菌的比較。第三章微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能（續(xù)）本節(jié)重點：細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)，特點，功能在實踐中的意義其他原核微生物的主要特征芽孢的耐熱機(jī)制1.芽孢①概念-----某些細(xì)菌在其生長發(fā)育的后期，在細(xì)胞內(nèi)形成一個圓形或橢圓形、厚壁、含水量低、抗逆性強(qiáng)的休眠結(jié)構(gòu)，稱為芽孢，又稱內(nèi)生孢子。芽孢不是繁殖體②產(chǎn)芽孢的種類：桿菌:G+有兩屬：好氣性的芽孢桿菌屬（Bacillus）厭氣性梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)球菌：生孢八疊球菌屬(Sporosarcina)螺旋菌：無

③芽孢的構(gòu)造：

孢外壁：有的芽孢無此層，主要含脂蛋白透性差芽孢衣：含疏水性角蛋白，抗酶解、多價陽離子不易透過皮層：

主要含芽孢肽聚糖及DPA-Ca(吡啶二羧酸鈣鹽），體積大，滲透壓高核心：

芽孢壁,芽孢膜,芽孢質(zhì)、芽孢核區(qū)

④芽孢的形成過程：A.DNA濃縮，束狀染色體形成B.細(xì)胞膜內(nèi)陷，細(xì)胞發(fā)生不對稱分裂C.前芽孢的雙層膜形成，抗逆性提高D.兩層之間填充芽孢肽聚糖，合成DPA，積累鈣離子，形成皮層E.芽孢衣合成F.芽孢囊裂解，芽孢游離枯草桿菌的芽孢形成過程約需8h⑤滲透調(diào)節(jié)皮層膨脹學(xué)說：A.芽孢衣：對多價陽離子和水分的透性差，對溶菌酶、蛋白酶的抗性強(qiáng)。B.皮層的離子強(qiáng)度高，引起了皮層的高滲透壓，使皮層奪取核心部分的水分，使核心部分的生命物質(zhì)處于高度失水狀態(tài)，因而產(chǎn)生極強(qiáng)的耐熱性。芽孢萌發(fā)時吸水膨脹，耐熱性喪失伴孢晶體蘇云金芽孢桿菌，在形成芽孢的同時，產(chǎn)生堿溶性晶體內(nèi)含物，一般一個細(xì)菌產(chǎn)生一個，稱為伴孢晶體。呈斜方體、長斜方體、方體或不規(guī)則形生物農(nóng)藥對200種昆蟲有殺死作用2.糖被----位于某些細(xì)菌細(xì)胞壁外的一層厚度不定的透明膠狀物質(zhì)。分類：莢膜，微莢膜，粘液層成分：90%水，多糖，多肽，蛋白質(zhì)功能：抗干燥，防吞噬，貯藏養(yǎng)料，便于吸附，信息識別，堆積廢物應(yīng)用：菌種鑒定，藥物，生化試劑工業(yè)原料，污水處理S層———位于原核微生物細(xì)胞壁外，有大量蛋白質(zhì)或糖蛋白亞基以方塊形或六角形排列的連續(xù)層。3.鞭毛概念：菌體表面伸出長絲狀，波曲狀附屬物。長15—20μm，直徑0.01—0.02μm。波浪運動，速度快20—80μm/s。觀察方法：凹玻片法，暗視野，染色，半固體穿刺構(gòu)造：基體，鉤形鞘，鞭毛絲著生方式－－－功能：運動栓菌試驗：在基質(zhì)上固定鞭毛抗體，鞭毛會被鞭毛抗體結(jié)合，鞭毛就固定在基質(zhì)上了在顯微鏡下觀察菌的運動情況如果菌是旋轉(zhuǎn)運動，就說明鞭毛是螺旋運動的

鞭毛與菌毛比較鞭毛菌毛成分鞭毛蛋白，繩索狀菌毛蛋白，中空螺旋長度軟、長、粗硬、短、細(xì)數(shù)量少多功能運動附著著生壁內(nèi)基體生于質(zhì)膜上菌類許多桿菌G－細(xì)菌性菌毛－－傳遞遺傳物質(zhì)細(xì)菌的二分裂桿菌二分裂格形暗網(wǎng)菌三分裂蛭弧菌復(fù)分裂細(xì)菌的固體培養(yǎng)特征

菌落（colony）：是指在固體培養(yǎng)基上，由一個細(xì)菌或孢子生長、繁殖形成的肉眼可見的群體。

菌落特征:濕潤,較光滑，較透明，較粘稠，易挑起，質(zhì)地均勻，菌落正反面及邊緣與中央部位的顏色一致。

生物學(xué)意義:微生物分類鑒定的指征之一。

菌苔（bacteriallawn）：是指在固體培養(yǎng)基上由許多細(xì)菌或孢子生長、繁殖形成的肉眼可見、相互連成一片的大量菌落群體。2、細(xì)菌的半固體培養(yǎng)特征半固體培養(yǎng)基：含0.35-0.4%瓊脂穿刺接種法：用途：觀察細(xì)菌是否擴(kuò)散生長，判斷細(xì)菌運動性及是否含鞭毛。3、細(xì)菌的液體培養(yǎng)特征

多數(shù)呈渾濁狀，少數(shù)形成沉淀、菌醭、菌膜等。其他幾種原核微生物一、放線菌1,主要特征：菌落放射狀而得名，呈絲狀分支細(xì)胞的原核微生物。適于中性偏堿環(huán)境許多種能產(chǎn)生抗生素2,形態(tài)與結(jié)構(gòu)形態(tài)菌絲體結(jié)構(gòu)基質(zhì)菌絲氣生菌絲孢子絲結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁有肽聚糖革蘭氏染色陽性細(xì)胞結(jié)構(gòu)與細(xì)菌基本相同繁殖菌絲斷裂片段生殖孢子生殖放線菌形態(tài)

放線菌孢子絲放線菌菌落特征小而致密，干燥，表面粉狀，密絨狀二、藍(lán)細(xì)菌

藍(lán)細(xì)菌與光合作用植物相似之處:

含葉綠素a（chlorophylla）和光合系統(tǒng)Ⅱ，具有放氧性光合作用,

藍(lán)細(xì)菌與真核生物本質(zhì)的區(qū)別:藍(lán)細(xì)菌無葉綠體，無真核，有70S核糖體，而且細(xì)胞壁中含有肽聚糖，對青霉素和溶菌酶十分敏感，這些特性使得藍(lán)細(xì)菌無可置疑的被劃入細(xì)菌之列。

1、形態(tài)大小

細(xì)胞一般比細(xì)菌大，通常3~10μm，但也有大到60μm的。形態(tài)多樣化：細(xì)胞形態(tài)球狀或桿狀，單生或團(tuán)聚；呈絲狀、或分枝絲狀、或螺旋狀，有的含異形胞。圖1-25幾種藍(lán)細(xì)菌的典型形態(tài)1、藍(lán)桿菌屬；2、聚球藍(lán)菌屬；3、粘聚球藍(lán)菌屬；4、皮果藍(lán)菌屬；5、魚腥藍(lán)菌屬；6、螺旋藍(lán)菌屬；7、費氏藍(lán)菌屬2、藍(lán)細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)3、藍(lán)細(xì)菌的繁殖與培養(yǎng)特征

單細(xì)胞的種類行二分裂或復(fù)分裂；

絲狀藍(lán)細(xì)菌還常有通過其絲狀體斷裂形成短的鏈絲段(hormogonium)方式繁殖；

少數(shù)種類如管胞藍(lán)細(xì)菌屬通過形成內(nèi)孢子(endospore)繁殖。

藍(lán)細(xì)菌液體培養(yǎng)通常不渾濁。4、藍(lán)細(xì)菌生物學(xué)意義

（1）在生物進(jìn)化史上的作用：

藍(lán)細(xì)菌（cyanobacteria）種類十分龐雜的古老的原核生物，因為它的發(fā)展使得地球大氣由無氧狀態(tài)變?yōu)橛醒鯛顟B(tài)。

藍(lán)細(xì)菌與某些植物[如蕨類Azolla（滿江紅屬）的葉腔中，裸子植物Cycas（蘇鐵屬）和Gunnera（根乃拉草屬）的根中]等進(jìn)行共生固氮，

因此還可在貧瘠的沙質(zhì)海灘和荒漠的巖石上找到它們，故有“先鋒生物”的美稱。（2）一些有著經(jīng)濟(jì)價值的藍(lán)細(xì)菌如：發(fā)菜念珠藍(lán)細(xì)菌（Nostocflagelliforme）、地耳（N.commune）、盤狀螺旋藍(lán)細(xì)菌（Spirulinaplatensis）、以及市場上銷售的各種“螺旋藻”產(chǎn)品等。（3）有的藍(lán)細(xì)菌是污染湖泊中發(fā)生“赤潮”及“水華”的原兇。三、支原體

支原體是介于細(xì)菌與立克次氏體之間的原核微生物，因不含有細(xì)胞壁，在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，往往呈分枝的絲狀體，故稱之為支原體(mycoplasma)。

最早是從患胸膜肺炎的牛體中分離出來的，稱為胸膜肺炎支原體。。

支原體生物學(xué)意義：許多支原體引起動物——牛、綿羊、山羊、豬、禽和人類的病害；一些類支原體也引起植物病害；因濾過性,常會造成實驗室組織培養(yǎng)物污染。1、形態(tài)大小

細(xì)胞很小，直徑約為150～300nm，能透過細(xì)菌濾器。在大小僅為50～200nm的納米細(xì)菌（nanobacteria）被發(fā)現(xiàn)之前，曾被認(rèn)為是整個生物界中尚能找到的能獨立營養(yǎng)的最小型生物。

細(xì)胞多形，易變，呈球狀或長短不一的絲狀及分枝狀。肺炎支原體（Mycoplasmapneumoniae）電鏡照片，顯示其多形性。（a）透射電鏡照片（X47，880）；（b）掃描電鏡照片（X26，000）。結(jié)構(gòu)特點1）胞膜含甾醇2）無細(xì)胞壁，對抑制壁合成抗生素不敏感3）“油煎蛋”菌落4）基因組小，0.6~1.1Mb5）二分裂和出芽繁殖3、繁殖與培養(yǎng)特征一般以二等分裂方式進(jìn)行繁殖。寄生或腐生。能在含血清、酵母膏或甾醇等營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上生長。菌落特征：菌落小，直徑一般僅為0.1～1mm，呈特有的“油煎蛋”狀。液體培養(yǎng)特征：不混濁?！坝图宓啊睜钏?、立克次氏體

1909年，美國醫(yī)生H.T.Ricketts（1871～1910）首次發(fā)現(xiàn)落基山斑疹傷寒的病原體，并于1910年犧牲于此病。因該類微生物專性寄生，不能人工培養(yǎng)，故后人為紀(jì)念其發(fā)現(xiàn)者，稱這類病原菌為立克次氏體（rickettsia）。

生物學(xué)意義：是人類斑疹傷寒、恙蟲熱和Q熱等嚴(yán)重傳染病的病原體。主要通過產(chǎn)生內(nèi)毒素致人死亡。1）G－，寄生（有壁，不能獨立生活，細(xì)胞較大0.3-2μm）2）對熱敏感，56C以上30min即可殺死，對四環(huán)素，青霉素等抗生素敏感3）二分裂繁殖，宿主一般為節(jié)肢動物，可從傷口侵入人體4）基因組很小，1.1Mb5）致病性：在宿主血流中大量增殖，并產(chǎn)內(nèi)毒素1、特點立克次氏體2、形態(tài)大小細(xì)胞體積0.3～0.6μm×0.8～2μm。似一般細(xì)菌大小，無濾過性。細(xì)胞形態(tài)多樣，有球狀、桿狀或絲狀。3、細(xì)胞結(jié)構(gòu)含有細(xì)胞壁，革蘭氏染色陰性。立克次氏體細(xì)胞膜因較疏松而“滲漏性”較大，

易從宿主細(xì)胞獲得NAD+和輔酶A。

基因組很小，如Rickettsiaprowazeki的基因組為1.1Mb，僅含834個基因。

3、抗性對熱敏感，一般在56℃以上經(jīng)30min即被殺死。立克次氏體對許多抗細(xì)菌的抗生素如四環(huán)素和青霉素是敏感的。4、代謝系統(tǒng)存在產(chǎn)能系統(tǒng)，但缺乏完整的產(chǎn)能代謝途徑，不能氧化葡萄糖或有機(jī)酸，只能氧化谷氨酸和谷氨酰氨產(chǎn)能，所以立克次氏體一旦離開宿主就會很快死去。立克次氏體以二分裂方式繁殖。嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生，須用雞胚卵黃囊、敏感動物組織細(xì)胞及敏感實驗動物進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

生活史中必須由蚤、螨等吸血節(jié)肢動物作為媒介，而在動物間傳代，因此立克次氏體也被稱為蟲媒微生物。5、繁殖與培養(yǎng)特征五、衣原體（chlamydia）

衣原體是一類在真核細(xì)胞內(nèi)營專性寄生的小型革蘭氏陰性原核生物。由于它沒有產(chǎn)能系統(tǒng)，需要來自宿主的ATP，故有“能量寄生物之稱”，1956年，湯飛凡教授等自沙眼中分離到病原體后才逐步證明衣原體是一類特殊的具細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生物。

主要生物學(xué)意義：引起鸚鵡熱等