獸醫(yī)病理學檢驗技術(shù)

PAGEPAGE96/96第三篇獸醫(yī)病理學檢驗技術(shù)第一章動物尸體剖檢技術(shù)尸體剖檢是運用病理剖檢學和其他有關(guān)學科的知識，通過檢查尸體的各組織、器官的病理變化來診斷疾病或研究疾病發(fā)生、發(fā)展和結(jié)局的規(guī)律，直接為臨床實踐和科學實驗服務(wù)。剖檢時，必須對病尸的病理變化做到全面觀察，客觀描述，詳細記錄，并運用通過尸體剖檢，查明病畜死亡的確切原因，及早做出正確的診斷，提出妥當?shù)奶幚硪庖?，并對同群動物采取相?yīng)的應(yīng)急防護措施，阻止疫情的蔓延，最大限度的降低經(jīng)濟損失。此外，尸體剖檢資料的積累，為各種疾病的綜合研究，可提供重要的數(shù)據(jù)。第一節(jié)尸體剖檢的準備及注意事項做好剖檢前的準備工作和了解應(yīng)注意的有關(guān)事項是十分重要的。因為剖檢的對象往往都是由于疾病嚴重，不能治愈而死亡的動物，其中有許多是患傳染性疾病，有些傳染病例如炭疽、結(jié)核和布氏桿菌病等，還是人畜共患的傳染病，所以，剖檢前，術(shù)者既要防止環(huán)境污染，造成病原的擴散，又要注意自身防御，預防本身的直接感染；既要注意剖檢過程中所用器械的選擇及準備，又要考慮到在操作過程中可能發(fā)生的種種意外的情一般來講，在進行剖檢前應(yīng)注意做好如下工作。地的疾病流行情況，死畜生前的病史，其中包括發(fā)病的時間、臨床癥狀、化驗結(jié)果和診治情況等，以便形成一個初步的印象，把握剖檢時的重點。更重要的是通過調(diào)查，使我物死亡后的3～24h內(nèi)進行為宜，不可過遲，否則會因動物死后發(fā)生的腐敗和自溶而失去剖檢的意義。另外，剖檢的時間最好在白天，因為在燈光下剖檢時，一些病變的顏色往往不易辨認，容易造成誤診。塑料布或其他代用品，以便在其上剖檢，借以減少環(huán)境污染的機會，這樣還有利于對尸體及周圍被污染的環(huán)境進行消毒處理。尸體的運輸尸體一般多是用車輛搬運至剖檢場地。搬運尸體(特別是炭疽、開天然孔予以堵塞，并用較濃的消毒液噴灑體表各部，在確認足以防止病原擴散的情況下方可搬運。此后，對運送尸體的車輛和與尸體接觸的繩索等用具均應(yīng)嚴密消毒。注射器、針頭和天平等。如果沒有上述剖檢器械，也可用一般的刀、剪來代替。剖檢時常用的消毒液有：0.1％新吉爾滅、0.05％洗必泰或3％～5％來蘇兒及石炭酸等。常用的固定液有：10％甲醛或95％酒精。此外，為了預防剖檢人員的感染或意外的傷害，還應(yīng)準備3％碘酊、2％硼酸水、70％酒精以及脫脂棉、紗布和肥皂等。須穿著工作服、戴工作帽、穿膠鞋或膠靴。有條件時還可在工作服外罩上膠皮或塑料圍裙，穿著膠皮衣、戴膠皮手套等。尚不具備此條件時，則應(yīng)在手臂上涂抹凡士林或其他油類，防止血水等直接浸染皮膚而造成感染。在剖檢過程中若不慎將手指或身體的其他部位割傷或碰破時，應(yīng)依情況而停止剖檢，對傷口立即進行消毒并妥善包扎。如損傷較重時，不宜再繼續(xù)進行剖檢，而剩余的工作應(yīng)由助手來完成。當血液或其他滲出物噴人2％硼酸水洗眼或用清水立即沖洗干凈。起投入坑內(nèi)，在其上撒布較厚層生石灰或噴灑較多的消毒液進行嚴格消毒，這在剖檢傳染病尸體時尤為重要。消毒后用土掩埋，坑表土層應(yīng)高出地面0.5m，而且坑圍地面也應(yīng)嚴密消毒。此外，在嚴冬季節(jié)，特別是東北和西北等地，常因凍土層較厚而不易挖坑時則可用木柴澆上柴油或汽油等將尸體焚燒。0.2％高錳酸鉀溶液浸洗數(shù)分鐘，再用2％～3％草酸溶液洗滌，令皮膚退去棕褐色之后，再用清水沖洗干凈即可。剖檢所用的器械和穿戴的防護衣等均須消毒并洗凈。在消毒前，應(yīng)先將附著于器械或衣物上的膿汁和血液等用清水洗凈，然后再浸入消毒液中充分消毒，最后再用清水洗凈。膠皮手套洗凈后，須立即擦干，撒上滑石粉以備再用。金屬器械經(jīng)消毒后要擦干或再涂薄層的凡士林，以免生銹。第二節(jié)尸體剖檢前的外部檢查外部檢查就是在剖檢之前對尸體外部形態(tài)所進行的觀查。在做外部檢查時常須把所見之變化和已掌握的臨床資料有機地結(jié)合起來，進行認真的分析和思考。這對剖檢時確定重點、方法和步驟均可提供重要的線索，有時還可作為判斷病因的重要依據(jù)。外部檢查除對畜別、品種、年齡、性別、毛色和體態(tài)特征等進行登記外，還須特別注意對尸體的營養(yǎng)狀態(tài)、皮膚、可視黏膜和尸體變化等進行詳細的檢查。斷。瘦弱動物的體表骨型標志顯而易見；營養(yǎng)佳良的尸體，其背腰平直、臀部及四肢的肌肉豐滿，被毛富有光澤，皮下脂肪多，皮膚富有彈性。象之外，還應(yīng)注意體表有無褥瘡、潰瘍、膿腫、外傷、腫瘤、外寄生蟲、新舊創(chuàng)傷、骨檢查時應(yīng)注意其開閉狀態(tài)，有無分泌物、排泄物，并詳細觀察這些物質(zhì)的性狀、數(shù)量、色澤、氣味和濃度等。對天然孔的詳細檢查有助于進一步注意相應(yīng)系統(tǒng)的內(nèi)部病變。尸體變化動物死亡后，雖然其呼吸和心跳已完全停止，神經(jīng)活動也喪失，但在一定時間內(nèi)尸體中各組織器官的細胞還在進行新陳代謝，使得尸體組織和器官無時不在變化著。在機體死亡的同時，殘存于體內(nèi)的各種微生物由于部分或全部地解除了機體對于是使尸體逐漸發(fā)生一系列形態(tài)改變，其中最常見的有尸冷、尸僵、尸斑、尸體自溶和腐敗等。正確地辨認尸體變化可以避免把某些死后變化誤認為生前的病理變化。生速度主要與死亡的時間、尸體的營養(yǎng)、季節(jié)、環(huán)境和畜齡有關(guān)。檢查尸溫、了解尸冷的變化有助于確定動物死亡的時間。動物一般于死后1～6h開始，其順序是：先從頭部的肌肉開始，繼之則按頸部、前肢、24～48h尸斑是指尸體倒臥側(cè)皮膚所出現(xiàn)的不規(guī)則斑紋或斑塊。尸斑一般于動物死后1～2h這種現(xiàn)象一般于動物死后24h左右出現(xiàn)。注意，尸斑一般僅出現(xiàn)于尸體的倒臥側(cè)，除重力作用的因素外，往往沒有任何病理變化。的作用而發(fā)生的自體消化，常見于胃腸和胰臟。腐敗是指尸體的組織或器官中的蛋白質(zhì)被細菌分解的過程，主要由體內(nèi)的腐敗菌所引起。尸體自溶與腐敗的速度，常受周圍環(huán)境如氣溫、濕度、氣流以及疾病的性質(zhì)影響。一般而言，溫度高、濕度大，氣流不良或死于敗血癥和大面積化膿性炎癥的動物，尸體自溶與腐敗不僅出現(xiàn)的早、快，而且表現(xiàn)明顯，反之則慢而弱。注意，尸體自溶和腐敗?？墒股暗牟±碜兓l(fā)生改變或破壞，給病理剖檢帶來很大的困難。因此，動物死后，應(yīng)盡早進行剖檢，以免尸體自溶和腐敗后影響檢查結(jié)果。第三節(jié)各種動物的剖檢術(shù)式尸體剖檢在實際的運用中是將剖檢與檢查結(jié)合在一起進行的，即邊剖檢邊檢查。在此為了教給初學者一個緊促而連續(xù)的剖檢方法，故將剖檢術(shù)式與檢查方法分開敘述。尸體剖檢時常根據(jù)動物的種類不同，而術(shù)式也有一定的差異，分別介紹如下：體腔前均先剝皮，但死于傳染病的動物，為了防止病原擴散，一般不予剝皮。剝皮時尸體多取仰臥位。其方法是：先由下頜間隙至腹部正中線以直線切開皮膚，切至臍部時向左右分為兩線，繞開乳房或陰莖，然后又匯合為一條線止于尾根部。尾部使尾部連在皮膚上，然后剝四肢的皮膚。四肢剝皮時，多先從球節(jié)作一環(huán)行切線，沿腱圖3-1)。頭部剝皮時可先在口輪和眼輪周圍作環(huán)狀切線，然后由下頜間隙正中線開始向兩側(cè)剝開皮膚，外耳部連在皮上一并剝離。雖然剝皮時的切線先由下頜間隙至尾根的正中切線，但剝皮的順序一般卻先從四肢開始，之后，再由左右側(cè)胸腹壁的兩側(cè)剝至背正中線。剝皮時，多以右手持刀，左手拉緊皮膚，刀刃輕切向皮膚與皮下織相結(jié)合處，只切割皮下組織，不要使過多的皮肌和皮下脂肪附于皮上，也不要割破皮膚。切離前后肢剝皮后，為了便于采出臟器的操作，通常采用尸體的右側(cè)臥位。切離前肢時先沿肩胛骨前緣切斷臂頭肌和頸斜方?。辉僭诩珉喂堑暮缶壡袛啾抽熂?；在肩血管、神經(jīng)下鋸肌和菱形肌等，即可取下前肢。后肢的切離可在股骨大轉(zhuǎn)子部切斷臀淺肌的肌膜，臀中肌和臀深肌的肌腹；股后肌群(股二頭肌、半腱肌和半膜肌)；再將后肢向背側(cè)牽引，再由內(nèi)側(cè)切斷股內(nèi)側(cè)肌群(股薄肌、內(nèi)收肌等)和髖關(guān)節(jié)的圓韌帶與副韌帶即可取下后肢。弓至劍狀軟骨部作以弧形切線，再從肷窩至恥骨部做一直行切線，即可打開腹腔。切開腹腔的方法是：用刀先將腹壁的肌層和脂肪層切開，暴露出腹膜，再用刀尖將腹膜切一小口，將左手食指和中指插入腹腔內(nèi)，手指的背面向腹內(nèi)彎曲，使腸管和腹膜之間有一空隙，刀尖夾于兩手指間，刀刃向上，沿上述弧形切線滑切至劍狀軟骨部；此后，左手伸入膚窩的切口內(nèi)，將腹壁提起，右手持刀，以刀刃的后三分之一小心地將腹肌和腹膜一起切開，一直切至恥骨部。這樣就打開了腹腔，暴露出腹腔臟器。腸管的采出采出腸管的順序是：小腸、小結(jié)腸、大結(jié)腸和盲腸，其方法如下。3-22cm處切斷腸系膜，直到回盲系膜處再進行二重結(jié)扎，并從中間切斷，全部小腸即可采出（見圖3。小結(jié)腸的采出先將小結(jié)腸還于腹腔內(nèi)，再將直腸內(nèi)的糞球向前方擠壓，并從直腸的起始部切斷，然后，左手抓住小結(jié)腸斷端向前方牽引，右手持刀切斷后腸系膜，于胃狀膨大部附近作二重結(jié)扎，切斷小結(jié)腸后取出。大結(jié)腸和盲腸的采出：先用手觸模前腸系膜動脈根，檢查有無寄生蟲性動脈瘤。之后，將上、下結(jié)腸動脈和中盲腸動脈及側(cè)盲腸動脈自腸壁上分離出來，在距前腸系膜動脈根約30cm處切斷。然后將斷端交由助手牽引，術(shù)者用左手握住小結(jié)腸斷端向自身的外前方牽引，用右手剝離附著于大結(jié)腸胃狀膨大部和盲腸底部的胰臟，并將胃狀膨大部、盲腸底部和背部聯(lián)結(jié)的結(jié)締組織充分剝離，即可將大結(jié)腸和盲腸全部采出(見圖3-４)。脾臟的采出左手抓住脾頭向外牽引，使其各部的韌帶保持緊張，右手持刀切斷脾腎韌帶、脾膈韌帶、脾胃韌帶和脾門部的動、靜脈，即可將脾與大網(wǎng)膜一同取出。注意：當脾臟有明顯病變時則應(yīng)在采取腸管之前將脾采出。胃和十二指腸的采出采取胃和十二指腸之前，若發(fā)現(xiàn)胰管和膽管有異常，則應(yīng)將胃、十二指腸、胰臟和肝臟一同采出；尚無異常，則從膈的食管裂孔切開膈肌，抓住食管用力向腹腔內(nèi)牽引并切斷，再切斷胃肝韌帶、肝十二指腸韌帶、十二指腸右腎韌帶、輸膽管和胰管等，即可取出胃和十二指腸。胰臟和肝臟的采出胰臟可從左葉開始逐漸切離；或?qū)⒁扰K附于肝門部與肝臟一同采出；也可隨腔動脈和腸系膜一道取出。采取肝臟時須注意門靜脈與后腔靜脈有無血栓形成，之后切斷左三角韌帶、圓韌帶、鐮狀韌帶、后腔靜脈和冠狀韌帶，最后切斷右三角韌帶和門靜脈，肝臟即可取出。腎臟和腎上腺的采出采腎時應(yīng)先檢查輸尿管，若有病變時可將整個泌尿系統(tǒng)一并采出。采腎時一般先取左腎，沿腰肌剝離其周圍的脂肪層，切斷腎門部的血管和輸尿管，即可將之取出。右腎用同樣的方法取出。腎上腺多與腎臟同時采出，有時亦可單獨取出。肌等軟組織切除，并切除與胸廓相連的腹壁，然后將腮的左半部從季肋部切下，并在倒數(shù)第三、四肋間切以可容納四指大小的切口。此時，助手應(yīng)站在尸體的背側(cè)部，用右手的四指從切口伸入胸腔，抓住肋骨用力向身前方牽引，使肋骨上部與肋椎關(guān)節(jié)處保持緊張狀態(tài)。術(shù)者右手持鋸，站在尸體的腹側(cè)從肋椎關(guān)節(jié)下部附近鋸斷左側(cè)肋骨，鋸至第一肋骨時，再用刀或鋸將肋軟骨與胸骨相接部切斷或鋸斷，這樣即可除去左側(cè)胸壁而打開胸腔。為了防止鋸斷肋骨之銳利的斷端扎傷剖解人員，常須用錘子把肋骨的斷端砸平，打鈍。心臟的采出先在心包左側(cè)中央部作十字形切口，并將手洗凈，把食指和中指插入心包腔，提起心尖，檢查心包液的量和性狀(見圖3-５)。之后擴大心包切口，使心臟充分暴露。沿心臟縱溝左右兩側(cè)各1～2cm處，分別切開左右心室，此后，將左手拇指與中指分別伸人左右心室的切口，輕輕向上牽引，使與心臟相連的主動脈、肺靜脈、肺動脈、前后腔靜脈和奇靜脈等保持緊張狀態(tài)，右手持刀在心基部附近將各血管切斷，取出心臟。連的各組織保持緊張狀態(tài)，用右手持刀將之切斷，即可采出肺臟（見圖3。骨盆腔臟器的采出多在保持各器官的生理聯(lián)系條件下采出。其方法是：先用鋸暴露出盆腔器官(見圖3口腔及頸部器官的采出口腔和頸部器官多一起采出，其步驟是：①在左下頜骨的第一日齒前的齒缺處鋸斷下頜骨支；②切斷被覆于上下臼齒外側(cè)的咬肌和頰肌，再切斷下頜骨支內(nèi)側(cè)面的翼肌和后緣部的腮腺、下領(lǐng)關(guān)節(jié)的韌帶及冠狀突周圍的肌肉；③用手握住下頜骨斷端用力向后上方提拉，即可除去下頜骨而暴露出口腔器官（見圖喉、氣管和食管周圍的組織切離，直到胸腔入口處，將它們一并取出（見圖3-９。2～3cm3-10、3-11)。取腦：沿鋸線剪開硬腦膜，再以枕骨著地的方式用左手握住上頜骨齒缺部將頭直立，并輕輕用力與地來回碰擊，使腦組織與顱腔分離，接著用剪刀或外科刀將顱腔內(nèi)的神經(jīng)、血管切斷，細心地采取大腦、小腦、延髓和腦垂體。鼻腔的打開鼻腔剖開的方法有兩種：一是于頭骨距正中線0.5cm把頭骨分為兩半。其中一半帶有鼻中隔，再用刀將鼻中隔沿其附著部切斷取下，于是兩側(cè)的鼻腔就完全打開。另一種方法是先用鋸在第一臼齒前緣鋸斷上頜骨，然后再沿兩眼的前緣用鋸橫行鋸斷，最后用鋸沿距正中線0.5cm處縱行鋸斷鼻骨和硬腭，打開鼻腔，隨即按第一種方法采出鼻中隔，或是再在正中線另一側(cè)相距o.5cm處作一縱線，即可打開鼻腔，取出鼻中隔。脊髓的采出采取脊髓也有兩種方法。簡便的方法是：先切除脊柱背側(cè)棘突與椎弓上的軟組織，用鋸鋸下一段椎骨(約5～15cm用力向外頂出脊髓。另一種方法是：將棘突兩側(cè)的椎弓用鋸鋸開，再用鑿子掀起已分離的椎弓部，即可見脊髓被膜，用刀或剪切斷與脊髓相聯(lián)系的神經(jīng)，便可取出脊髓。上述各體腔的打開和內(nèi)臟的采出，是通常進行系統(tǒng)剖解所采用的程序。但程序的規(guī)定和選擇首先應(yīng)服從于檢查的目的，而不應(yīng)一成不變。在實際工作中應(yīng)根據(jù)具體情況的需要，適當?shù)馗淖冺樞蚧蛉∩崮承└苯獬绦?。反芻動物獨特的剖檢構(gòu)造，故在剖檢的方法上亦有相應(yīng)的改變?，F(xiàn)以牛為例，將之與馬騾的不同之剖檢術(shù)式作以簡介。剖檢牛尸時通常采取左側(cè)橫臥位。其剝皮、斷肢、打開口腔取舌以及頸部器官、打開盆腔采出盆腔器官的方法均與馬的相同，茲僅就腹腔、胸腔和顱腔的打開及特殊器官采取的要點敘述如下：在剖開腹腔后，僅在劍狀軟骨部可以看見胃、右側(cè)肋骨后緣為肝臟、膽囊和皺胃，右肷部為盲腸，而其余的器官均被網(wǎng)膜所覆蓋。因此，為了便于腹腔器官的采取，應(yīng)先將網(wǎng)膜切除，然后再依次采出十二指腸、胃和其他器官。大網(wǎng)膜的切除以左手牽引網(wǎng)膜，右手執(zhí)刀，將淺層及深層大網(wǎng)膜分別從其附著部(十二指腸降部、皺胃大彎、瘤胃的左溝及右溝)切離；再將小網(wǎng)膜從其附著部(肝臟的臟面、瓣胃的壁面、皺胃幽門部和十二指腸起始部)切離。此時，就顯露出胃、小腸和腸盤。十二指腸的采出先找到位于皺胃上面的十二指腸，并在此作雙重結(jié)扎，于結(jié)扎之間切斷；同時，還應(yīng)將十二指腸系膜、膽管和胰管等與十二指腸的聯(lián)系切斷；然后再在右腎附近的S10～12cm指腸。胃的采出將瘤胃向后方牽引，于是在膈的后方露出食管。在膈的食管裂孔處結(jié)扎食管，并于結(jié)扎的前方切斷食管，然后將瘤胃之食管斷端交由助手，并用力向后下方牽引瘤胃，術(shù)者用刀切離胃與膈、肝等處聯(lián)結(jié)的組織，最后，兩手抓住瘤胃壁與助手一起用力向后下方牽引，即可將四個胃一道采出。腸管的采出大腸和小腸多一起采出。先在骨盆腔內(nèi)找出直腸，并將直腸內(nèi)的糞便向前方擠壓，并于其末端做一結(jié)扎；接著在結(jié)扎的后方切斷直腸；用手握住直腸斷端，由后向前把降結(jié)腸從背側(cè)脂肪組織中分離出來，并切離腸系膜和前腸系膜動脈根部的組織，全部腸管即可采出。腹腔內(nèi)其他臟器如肝臟、腎臟等采出方法與馬的相同。胸腔臟器的采出牛的胸腔剖開和器官的采取法與馬的相同。此處僅就羊的胸腔臟器的采出法作以簡介。羊的體積小，剖檢多取背臥位，打開胸腔的方法是：先用刀或骨剪切斷肋軟骨和胸骨聯(lián)結(jié)部，再把刀伸入胸腔，劃斷脊柱左右兩側(cè)的肋骨與胸椎連接的胸膜和肌肉，接著將兩手伸人胸腔，按壓左右側(cè)的胸壁肋骨，把肋胸關(guān)節(jié)折裂，使胸腔敞開，便于將胸腔內(nèi)的心臟、肺臟、氣管和血管等一起采出或分別采出。成左右兩半，然后除去。取腦的方法與馬的相同。小異。剖檢患傳染病的動物時一般不能剝皮。剖檢的方法是：先切斷左右肩胛骨內(nèi)側(cè)的肌肉和肌膜等與前肢相連的軟組織，使其僅以外部少量肌肉和皮膚等軟組織與軀體相連而分別向左右攤開，令軀體前部加以固定。接著再將左右髖關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)及前后部的肌肉、皮膚等軟組織切斷，并加壓使髖關(guān)節(jié)折裂，于是左右后肢就分別向后軀的兩側(cè)攤開，使后軀加以固定。此時，整個尸體就保持著仰臣姿勢。至恥骨聯(lián)合部小心地切開皮膚、腹肌和腹膜，然后再沿左右肋弓和最后肋骨，分別從劍狀軟骨后部的切口止腰椎橫突作一弧形切線，這樣就把腹壁切成兩個大小相等的楔形，再將其向兩側(cè)翻開，于是就暴露出腹腔臟器。腹腔臟器的采取有兩種方法：一種是整取法，即把腹腔的所有器官一起取出，然后分別檢查。此法的優(yōu)點是省時間，便操作。其步驟是：先由膈后切斷食管，牽住胃部的斷端向后上方牽引，并切斷肝與膈的聯(lián)系，小腸與前腸系膜動脈根的聯(lián)系等；然后再由骨盆腔切斷直腸，并將與腸盤等相連的軟組織、血管和神經(jīng)等一并切除。這樣就可將胃、肝、胰、脾、大腸和小腸等腹腔臟器一起采出。另一種方法是分取法，即按脾、小腸、大腸、胃、腎、胰和肝的順序分別采出。此方法的優(yōu)點是便于詳細檢查、及時發(fā)現(xiàn)病變及其與周圍的聯(lián)系，并由此而決定采出臟器的順序和方法。脾臟和網(wǎng)膜的采出脾臟多位于左季肋部。采取時先將之提起，并在接近脾臟部切斷網(wǎng)膜和其他的聯(lián)系，取出脾臟。接著再將網(wǎng)膜從其附著部分切離采出。帶及回腸。在離盲腸約15cm處，二重結(jié)扎回腸并于結(jié)扎之間將之切斷。然后握住回腸斷端向外上方牽引，并切斷腸系膜直至十二指腸空腸曲。在空腸起使部再作二重結(jié)扎并切斷，將空腸和回腸取出。大腸的采出先在骨盆腔內(nèi)分離出直腸，再將其內(nèi)的糞便擠向前方腸內(nèi)并做一次結(jié)扎，然后在結(jié)扎的后方切斷直腸。接著左手握住直腸的斷端，用力向外后方牽引，右手執(zhí)刀切斷與其相連的腸系膜，直至前腸系膜根部；再分離結(jié)腸與十二指腸和胰臟的聯(lián)系，切斷前腸系膜根部的血管、神經(jīng)和結(jié)締組織以及結(jié)腸與背部之間的聯(lián)系，即可取出大腸。取出大腸之后可依次將胃和十二指腸、胰臟、肝臟、腎臟及腎上腺采出。采出的方法與馬的相同。胸腔臟器的采取打開胸腔和采取胸腔臟器的方法與羊的相同。相連的肌肉，左手指伸入下頜間隙將舌牽出，剪斷舌骨，把舌、咽喉和氣管一并采出。在剖檢小豬、兔子等小動物時，?？勺韵骂M沿頸部、腹部正中線至肛門切開，暴露出胸腹腔，切開恥骨聯(lián)合后顯露出骨盆腔，然后將口腔、頸部、胸部、腹部和骨盆腔內(nèi)的臟器一起采出。顱腔打開的方法既可按照馬的方法進行，亦可按下法進行，即在清除頭部皮膚和肌肉的基礎(chǔ)上，先在兩側(cè)眶上突后緣作一橫鋸線，再從此鋸線兩端經(jīng)額骨、頂骨側(cè)面至V此時，可將鼻端向下把頭立起，用錘敲擊枕嵴，即可揭開顱頂，露出腦組織。腦的采取方法與馬的相同。家禽尸體的剖檢術(shù)式家禽尸體于剖檢前，先用清水或消毒液將其羽毛浸濕，以防拔毛時其絨毛飛起，使病原擴散或污染環(huán)境。家禽尸體常用的固定方法有兩種：一是用力將兩大腿向外翻壓，直至兩髖關(guān)節(jié)脫臼，于是兩肢就平行攤起而使尸體固定。家禽由于其體積小，臟器輕，故可將它的頸、胸和腹腔等臟器一并采出，這樣可使心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)等前后相關(guān)的臟器保持其固有的聯(lián)系，而有利于對系統(tǒng)性病變的研究和分析，同時也有利于觀察各系統(tǒng)之間的相互關(guān)系。家禽尸體剖檢的術(shù)式是：在固定前，先將尸體的羽毛拔凈，然后由喙角沿體中線通過胸腹部直至泄殖腔而切開皮膚，接著用剪刀自泄殖腔起至胸骨部而剪開腹腔；再用外然后握住龍骨的后緣用力向上方翻拉，并切斷周圍的軟組織，即可除去胸骨打開胸腔。繼之，再用骨剪剪開喙角，打開口腔，將舌、食管、嗉囊從頸部剝離下來。最后用外科手術(shù)刀的刀柄，鈍性分離肺臟、切除橫膈膜；鈍性將腹腔臟器分離到泄殖腔后用刀切除直腸，將包括生殖器官在內(nèi)的臟器一同采出。臟器采出后，再分別予以整理，進行詳細觀察。此外，有時為了檢查特殊病變?nèi)缒[瘤等，亦可按中小動物的剖檢方式，分別采取腹腔和胸腔的臟器。鼻腔可用骨剪剪開，并輕輕壓迫鼻部來觀察鼻腔及其內(nèi)容物。然后輕輕拔離，將前端的嗅腦、腦垂體及視神經(jīng)交叉等部逐一剪斷，即可將整個大腦和小腦全部采出。2％來蘇兒或其它消毒藥液先把毛浸濕，固定四肢或切斷肩胛骨內(nèi)側(cè)和髖關(guān)節(jié)周圍的肌肉，使四肢攤開(僅以部分皮膚與體軀相連)。然后沿腹壁正中線切開劍狀軟骨至肛門之間的腹壁，再沿左右最后肋骨縱切腹壁至脊柱部，使腹腔臟器全部暴露。首先，檢查腹腔臟脾臟一起采出，分別檢查。也可按脾、胃、腸、肝、腎的次序分別采出。切開胸腔和采取胸腔器其方法是：先用剪刀剪斷肋軟骨和胸骨連結(jié)部，再把刀伸入胸腔，劃斷脊往左右兩側(cè)的肋骨和胸椎連接部的胸膜和肌肉，再用雙手開胸腔，并按壓一起采出。一并采出。骨盆腔和顱腔的剖檢，按剖檢牛、馬的方法施行。兔腦和脊髓的采出，盡量用骨剪剪開顱腔采腦。脊髓一般不作眼觀檢查，僅用骨剪剪斷脊椎直接放入l0％固定液內(nèi)，供組織學檢驗。根據(jù)剖檢需要也可用骨剪沿椎弓剪開脊椎管采出脊髓。體表、皮下、各臟器和器官的檢驗同其它動物。第四節(jié)尸體剖檢后的內(nèi)部檢查它包括伴隨剖檢過程而進行的形位檢查和對采出的各組織和器官所進行的器官檢查。系等所進行的檢查，主要包括皮下、剝皮后和打開各體腔時的檢查。正常的肌肉呈紅褐色，富有光澤，肌肉與肌肉之間、肌纖維束之間均結(jié)合緊密，形態(tài)完好。一般因窒息而死時，肌肉呈暗紅色；肌肉發(fā)生營養(yǎng)不良時，色澤變淡，多呈蒼白色而無光澤；敗血性傳染病和藥物中毒時，肌肉內(nèi)可見到淤點或淤斑；血斑病常見肌肉內(nèi)浸潤大量血液而使大塊肌肉呈彌漫性紫紅色；惡性水腫或氣腫疽時，部分肌肉中常有大量氣體、漿液和出血性浸潤并伴有嚴重的壞死性變化，肌肉的表面出現(xiàn)許多小氣泡，斷面則呈蜂窩狀；患某些寄生蟲時肌肉可見有包囊或結(jié)節(jié)。此外，當發(fā)現(xiàn)瘺管、潰瘍、腫瘤、肌炎和鈣鹽沉積等病變時，也應(yīng)及時地予以認真檢查。察分泌物的有無、數(shù)量多少和性狀如何；然后再檢查各乳房的乳頭有無病變；繼之沿腹正中線切開，使之分為左右兩半割下。若發(fā)現(xiàn)乳房中有硬結(jié)或其他病變時，可再作幾個平面予以詳細檢查。檢查切面時應(yīng)注意觀察乳汁的含量、血液的充盈程度、排乳管的性狀以及實質(zhì)、間質(zhì)的性狀和對比關(guān)系，有無結(jié)節(jié)、壞死、膿腫、纖維化、鈣化、囊腫和腫瘤等。公畜的生殖器官檢查先由腹壁將外生殖器切離至骨盆邊緣，陰囊檢查后，可留待與骨盆腔中的內(nèi)生殖器官同時檢查。當發(fā)現(xiàn)有隱睪或腫瘤時，而又有必要進一步闡明其蔓延的程度時，應(yīng)與輸精管、泌尿系統(tǒng)一起取出或單獨取出進行檢查。檢查切面有無炎癥或?qū)Ч苤杏袩o結(jié)石。性狀；腹膜是否光滑，有無充血、出血和纖維素性滲出物附著等；腹腔內(nèi)有無異常內(nèi)容物，如氣體、血凝塊、胃腸內(nèi)容物、膿汁、寄生蟲和腫瘤等；腹腔臟器的形態(tài)和位置；橫膈膜的緊張程度，有無前移、后陷和破裂等變化。下列順序依次進行檢查；胸水的數(shù)量和性狀；胸膜的性狀；胸腔內(nèi)有無異物；肺臟的體積、色澤、表面光滑度和有無破損等；胸腺的有無，大小如何，有無異常，脂化和萎縮的程度如何；心包有無外傷，表面是否光滑，有無粘連，心包腔內(nèi)的積液如何，心臟的大小，形態(tài)及房室充盈程度，心外膜有無變化，同時檢查主動脈和肺動脈起始部是否有異常。等有無明顯變化。臟器的檢查是指對已采出的各器官進行的檢查。這是病理尸檢的一個重要環(huán)應(yīng)客觀、形象地描述，并將檢查時所獲得病理變化及時記錄下來。在檢查病變時，為了客觀而形象地描述各器官、組織病變的大小、色澤和硬度等，雞蛋大；表示面積時多用一分、五分硬幣大、手掌大；表示形狀時可用圓形、橢圓形、一般的習慣是次色在前，主色在后，如黃白色、紫紅色等。還常用實物或某些液體的色澤來形容，如青石板色、葡萄酒樣、紅豆湯樣等，有時各種色澤交錯在一起時常用斑紋狀，大理石樣和檳榔樣等實物之結(jié)構(gòu)性花紋予以比擬。④描述硬度時常用堅硬、堅實、脆弱、柔軟等來形容，有時也用致密或疏松來描述。⑤描述彈性時常用橡皮樣或面團樣等表示。臟器檢查的順序常服從于檢查的目的，也就是說它的順序是靈活的，不能墨守陳規(guī)。本文為了敘述方便，則按臟器通常所采取的先后順序進行描述。腹腔器官的檢查胃的檢查先檢查形狀，看其體積大小、漿膜的色澤，有無粘連，胃壁有無穿孔或破裂等。若發(fā)現(xiàn)有破裂時，一定要弄清是生前還是死后發(fā)生的。生前胃破裂的特點是：裂緣腫脹，附有暗紅色血液凝塊，腹腔內(nèi)有較多的胃內(nèi)容物，胃體積變小或空虛。死后胃破裂的特征為：裂緣不腫脹，無血液凝塊附著，裂口部有較多的胃內(nèi)容物，胃體積膨大。外形檢查完畢后，用腸剪由賁門而沿胃大彎至幽門打開胃腔（3-1中毒可疑時，應(yīng)用干凈無毒的器具采取部分胃內(nèi)容物以備毒物化驗之用。之后，傾去胃內(nèi)容物，檢查胃黏膜的色澤、表面皺裂分布情況、有無黏液或量多少、性狀如何，黏膜有無腫脹、充血、出血、潰瘍、肥厚和炎癥等病變。此外，還應(yīng)十分細心觀察有腺部與無腺部交界處的變化，馬騾等動物常在此見到胃癌；豬等家畜此處常易發(fā)生潰瘍。反芻動物胃的檢查方法：先把瘤胃、網(wǎng)胃、瓣胃之間的結(jié)締組織分離干凈，然后使胃部有血管和淋巴結(jié)的一面向上，即按皺胃在左、瘤胃在右的位置，平放于地上，用剪刀沿皺胃小彎部開始剪開胃壁；剪止皺胃與瓣胃交界處時，則沿瓣胃的大彎部剪開，至瓣胃與網(wǎng)胃口時，又沿網(wǎng)胃之大彎剪開，最后再沿瘤胃的上下緣剪開。這樣胃的各部分即可全部展開。如網(wǎng)胃有創(chuàng)傷性炎癥時，可順食道溝剪開，以保持網(wǎng)胃大彎的完整性，便于檢查瘤胃。反芻動物的胃內(nèi)容物檢查時應(yīng)注意有無異物和胃壁有無創(chuàng)傷等。腸管的檢查先檢查腸管漿膜的色澤，有無粘連、充血、出血以及破裂、損傷等變化，有無腫瘤、腫塊、結(jié)糞塊和寄生蟲結(jié)節(jié)等異物。剪開腸管的方法是：小腸由十二指腸結(jié)腸由盲結(jié)口開始沿大結(jié)腸縱帶剪開(見圖3-14)；小結(jié)腸則沿其系膜附著部剪開。各部腸管剪開時要做到邊剪開邊檢查，注意腸內(nèi)容物的數(shù)量、性狀、氣味，有無血液、膿液、異物和寄生蟲等。傾去腸內(nèi)容物后，須注意腸黏膜的色澤、表面的光滑度，有無充血、出血、糜爛、潰瘍、憩室、腸結(jié)石、寄生蟲和腫瘤，檢查腸壁的厚度和硬度等。在檢查脾臟的檢查先觀察脾門部的血管和淋巴結(jié)，看其有無異常，形態(tài)位置和體積等有無變化。接著檢查脾臟的外形，用尺測量脾臟的長度、寬度、厚度并稱其重量。然后觀察頭部至脾尾部切開，然后依次再做兩個切面檢查(見圖3-15)。切脾臟時運刀用力要均勻，切面要平滑，切忌擠壓或拉鋸式切開。切開后注意觀察切面的色澤、血量的多少和性狀，有無結(jié)節(jié)、壞死灶、梗死和膿腫等。繼之可用刀背或刀刃輕輕地刮脾臟的切面，借以檢查脾髓的質(zhì)度和血量。肝臟的檢查先測量其長度、寬度和厚度，稱其重量。然后檢查其形態(tài)、大小、色澤，被膜的性狀和表面的光滑度，邊緣的厚薄、實質(zhì)的硬度，有無結(jié)節(jié)、出血、血腫和壞死灶，肝門的淋巴結(jié)、血管和肝管的性狀。最后切開肝臟(見圖3-16)，觀察切面的色澤、含血量，肝小葉的結(jié)構(gòu)是否清晰，有無膿腫、寄生蟲結(jié)節(jié)和壞死灶等。有膽囊的動物，還應(yīng)沿膽總管切開膽囊，檢查其膽汁的量、色澤和氣味。注意觀察膽管黏膜有無炎癥、損傷、寄生蟲和疤痕狹窄等情況，膽囊內(nèi)有無異物和膽結(jié)石等。胰臟的檢查先觀察其大小、色澤和硬度，有無腫脹和炎癥等。再沿胰臟的長徑作切面，檢查有無出血、寄生蟲、膿腫和壞死灶等變化，必要時可用探針插入胰管，并沿之切開，檢查其管腔的內(nèi)容物和管壁的性狀。有時由于胰臟的壞死而使大量胰酶流人周圍的組織，使周圍的組織出血和脂肪壞死，此時，檢查應(yīng)須注意胰臟組織本身的破損與周圍組織之間的關(guān)系。腎臟的檢查除先檢查其形態(tài)、大小、色澤和質(zhì)地外，還應(yīng)注意其包膜的性狀、包膜下有無血腫，腎臟表面有無腫塊和隆凸于體表的囊腫以及腎表面的光滑度等。此后，圖3-l7查完畢后，應(yīng)檢查腎盂，主要觀察其容積的大小，有無積尿、積膿和結(jié)石等。其黏膜面是否光滑，有無損傷、糜爛和潰瘍等變化。最后，用刀尖在腎臟切面的邊緣處扎下一小塊腎組織，由此用手向腎切面的相反方向牽拉，剝離腎被膜。之后，注意觀察腎表面的色澤、光滑度，有無出血點，瘢疤斑和梗死灶等病變。腎上腺的檢查：先檢查其形態(tài)、大小、色澤和質(zhì)地，并可將兩側(cè)腎上腺進行比較檢查。然后作縱切或橫切來檢查其皮質(zhì)與髓質(zhì)的厚度及色澤有無變化。正常的皮質(zhì)部常因蓄積較多的類脂質(zhì)而呈不同的黃色，若缺乏類脂質(zhì)則黃色消失。在檢查切面時，還須注意其有無明顯的出血點和化膿灶等。胸腔器官的檢查心臟的檢查首先檢查冠狀溝和左右縱溝的脂肪含量和性狀，此處有無出血等。接著觀察心臟的外形，各心房和心室是否發(fā)生膨脹，其程度如何，色澤有無變化，心外膜有2cm處分別平行做一切口，然后將左手指伸人心腔，把2cm處各做一平行切口，并將切口延至心尖部與左側(cè)的心切口相連接，切口再通過房室口切至左心房及右心房(3-18)。至此，心臟即全部剖開，各個心腔完全暴露，即可進行詳細地檢查。須注意，在切開心臟的過程中，即應(yīng)詳細檢查心腔中血液的含量和性狀。觀察心腔有無畸形；內(nèi)膜的色澤、光滑度、透明度，有無出血、損傷和寄生蟲寄生；各瓣膜是否肥厚，有無血栓形成、組織增生和缺損；腱索有無變粗、短縮等病變。還須注意各部心壁的厚度、色澤、質(zhì)地，有無出血、瘢痕、變性和壞死等病變。此外，還應(yīng)檢查主動脈和肺動脈的內(nèi)膜，觀察其色澤、光滑度，有無缺損、壞死和鈣化等病變；冠狀溝動脈內(nèi)膜的光滑度，有無狹窄、出血，管壁的厚度，有無損傷及鈣化等。肺臟的檢查一般先檢查肺門淋巴結(jié)和縱膈淋巴結(jié)。注意其大小、色澤、質(zhì)地和切面狀況，有無充血、出血、壞死、化膿和增生等變化。繼之，檢查肺臟的外形，觀察其體積、顏色，表面的光滑度，有無出血、炎性滲出物附著，有無機化和粘連，有無萎陷氣腫灶、化膿灶以及高出于肺表面的腫塊。然后用手觸摸各肺葉，檢查其質(zhì)地是否柔軟有無硬塊、硬結(jié)。接著可用刀剪沿氣管而剪至左右支氣管及肺見圖3-19)。檢查支氣管壁的厚度，黏膜的性狀，是否光滑和完整，有無黏液、炎癥、寄生蟲和異物等。檢查肺動脈，看其分支內(nèi)是否有血栓或栓子存在。最后可將左右肺葉做縱切或橫切 (見圖1-20)，檢查各切面的色澤，含血量和有無炎癥、結(jié)節(jié)、肺空洞以及肺實質(zhì)、間質(zhì)、支氣管和血管的變化。口腔、鼻腔及頸部器官的檢查口腔的檢查位于口腔的所有器官和組織一般均須予以檢查，尤其是伴有消化不良等胃腸道疾病時更是如此。檢查時應(yīng)注意其牙齒的數(shù)量是否齊全，有無齲齒，牙齒的磨滅及是否平整，有無缺齒和過長齒等?？谇火つさ纳珴桑袩o外傷、潰瘍和爛斑，硬腭有無腫脹，表面是否光滑。舌的黏膜，特別是舌系帶兩側(cè)有無出血，舌面上有無舌苔，其咽喉的檢查檢查咽喉部分的黏膜及扁桃體時，須注意有無炎癥、壞死、化膿、出血和寄生蟲寄生等變化。檢查食道時應(yīng)先觀察其外形是否均勻一致，有無節(jié)段性粗細不一鼻腔的檢查首先檢查上、中、下鼻道是否完好，有無損傷或畸形，然后再觀察鼻黏膜的色澤，上皮有無腫脹，黏膜面有無出血、炎性水腫、結(jié)節(jié)、糜爛、潰瘍、穿孔及疤痕等。骨盆腔器官的檢查膀胱的檢查檢查時應(yīng)注意膀胱的大小、尿量與輸尿管和尿道相接處是否有異常，膀胱壁有無損傷和破裂。然后從膀胱頂端沿其腹側(cè)中線向尿道公畜生殖器的檢查一般先檢查包皮及龜頭，看其有無糜爛和潰瘍，有無增生、肥厚和腫瘤的形成等。然后由尿道口沿陰莖腹側(cè)中線至尿道骨盆部剪開，檢查尿道黏膜的狀態(tài)，有無出血、異物、寄生蟲、狹窄、糜爛、潰瘍和結(jié)石等。檢查陰莖時可將之橫切數(shù)段，觀之有無病變。睪丸和副睪檢查時要注意其外形、大小、質(zhì)地和切面的結(jié)構(gòu)等。觀察切面時還應(yīng)注意其有無充血、出血、疤痕、結(jié)節(jié)、化膿和壞死等。最后檢查輸精管，精囊及其附屬的腺體等。后用腸剪沿子宮體背側(cè)剪開子宮頸、子宮體直至左右兩側(cè)子宮角。此后，主要檢查子宮黏膜的色澤、黏膜面的性狀、內(nèi)容物的性質(zhì)，子宮壁的厚度，肌層是否有肌瘤的存在，子宮壁有無缺損和破裂。此外，還須注意子宮闊韌帶和周圍結(jié)締組織的狀況。檢查產(chǎn)后敗血癥時要特別注意血管、淋巴管和淋巴結(jié)的狀態(tài)。輸卵管的檢查一般均采取觸摸法，看其是否一致，軟硬度是否均勻，有無變粗或狹腦組織的內(nèi)部檢查一般用10％甲醛固定數(shù)日后進行檢查為宜。但有些病例需在剖檢的現(xiàn)場就查明腦組織的病變，如腦溢血、腫瘤、寄生蟲等。腦實質(zhì)切開的方法是：先用已浸水而濕潤過的腦刀，沿腦正中溝自前向后，由上而下，一刀經(jīng)過胼胝體、彎隆、松果體、四疊體、小腦蚓突、延腦、腦橋和延髓等，將腦切成兩半。切開后應(yīng)及時檢查脈絡(luò)叢的性狀及側(cè)腦室有無積水，第三腦室、大腦導水管及第四腦室的性狀，其內(nèi)有無腫瘤和寄生蟲等。腦脊液的性狀如何，有無混濁發(fā)紅等變化。接著再橫切腦組織(相距2cm瘤和寄生蟲等病變(見圖3-21)。腦垂體的檢查，先看其大小和重量，外形有無異常，然后從中部將其切開，觀察切面的色澤、質(zhì)地、光澤和濕潤度等。脊髓的檢查主要觀察其軟脊膜的狀態(tài)，有無充血、出血等變化，脊髓液的性狀和數(shù)量，脊髓的外形、色澤和質(zhì)地。在橫斷面上主要檢查其灰質(zhì)、白質(zhì)和中央管之間有無病變等。肌病、氣腫疽、惡性水腫等應(yīng)十分注重肌肉的檢查外，而其他病例的肌肉，一般根據(jù)檢查目的而選擇，但對肉眼上有明顯變化的部分，則應(yīng)進行檢查。肌肉的檢查應(yīng)注意其色澤、硬度，有無出血、水腫、壞死和炎癥等病變。尤其應(yīng)指出的是：在臨床上具有跛行或運動障礙的家畜，死后剖檢時應(yīng)注意肌肉深部有無膿腫，有的病例還須注意肌肉腫瘤的存在。關(guān)節(jié)的檢查多針對有關(guān)節(jié)病(如關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)扭傷、韌帶撕裂等)的關(guān)節(jié)而言的，主要檢查關(guān)節(jié)的外形，有無腫大增粗，其性質(zhì)如何，關(guān)節(jié)囊是否膨滿，有無外傷、骨折正常關(guān)節(jié)軟骨表面光滑、濕潤，富有彈性并有良好的光澤。在病理情況下關(guān)節(jié)軟骨面有時出現(xiàn)蟲蝕樣斑痕，表面粗糙，失去光澤；有的關(guān)節(jié)軟骨大部或全部被破壞吸收，關(guān)節(jié)面上是粗糙的骨端；有時破壞的關(guān)節(jié)面上有成骨性肉芽組織增生，在構(gòu)成關(guān)節(jié)的兩骨端也可見到成骨性肉芽組織增生，有時并發(fā)纖維化。骨和骨髓的檢查骨的檢查也是有選擇性進行的，即主要檢查發(fā)生疾病或疑似有病的骨組織，如局部骨組織的炎癥、骨壞死、骨折、骨軟癥和佝樓病以及放線菌病等。一般先檢查外部變化，即與骨相鄰近的軟組織有何明顯的異常，其部有無化膿、出血和壞死，然后除去附于骨面的軟組織來檢查骨膜的變化和骨骼本身的病變。正常的骨組織表面致密光滑，堅硬、呈黃白色；在疾病過程中有時骨組織局部有化膿或壞死，有時整個骨骼表面粗糙、疏松、刀切易入。骨髓的檢查在造血系統(tǒng)患病時十分重要。檢查方法是：將長骨沿縱軸鋸開，注意骨端與骨干的狀態(tài)、紅骨髓、黃骨髓的性質(zhì)，含量比例和分布情況。正常成齡動物的長骨骨干中以黃髓為主，而在骨骺端僅可見到少量紅髓。在病理情況下，特別是慢性貧血時，則可見黃髓又變成紅髓而形成造血灶的現(xiàn)象。在急性消耗性疾病過程中，黃骨髓中的脂肪細胞往往發(fā)生萎縮，而由大量的漿液所取代，發(fā)生所謂的骨髓膠樣萎縮。由于骨髓組織的機能復雜，代謝旺盛，所以大部分的病理變化必須在顯微鏡下來辨認。因此，除眼觀檢查外，還須采取組織標本進行組織學檢查。此外，在野外剖檢時為了迅速地采取骨髓并做細胞學檢查，可采取以下方法進行，即在長骨（如股骨等）22/3有骨質(zhì)，露出骨髓，挖取少量骨髓即可做涂片，然后，用姬－瑞氏染色法染色進行細胞學檢查。第五節(jié)病理剖檢的記錄病理剖檢的記錄是死亡報告的主要依據(jù)，也是對疾病進行綜合分析、研究，從中找出死因的原始材料。因此，做好記錄是病理剖檢過程中的一個重要環(huán)節(jié)。剖檢者應(yīng)本著認真負責的科學態(tài)度，客觀地、如實地、完整地記錄剖檢過程中所觀察到的各種病理變化。以詳細的觀察和分析，從實際出發(fā)，將看得見、摸得出、聽得到、嗅得著的各種病理變化加以辨認和記錄下來。對各種臟器和組織的檢查及其記錄，為了防止遺漏，通常應(yīng)有序的進行，即先用肉眼觀察其大小(有的應(yīng)稱重量)、外表形態(tài)、色澤等；然后動手探查組織的硬度；繼之用刀切開臟器，觀察其切面的形態(tài)和色澤等。在記錄時須用形象而又通俗易懂的語言加以表達，切忌用抽象的病理術(shù)語或名詞來代替對病變的描述。因為用后者的記錄方法常使人茫然，不利于有更多的人通過閱讀記錄材料來參加討論分析疾病的病理變化過程和導致動物死亡的原因。如肝臟發(fā)生脂肪變性時，應(yīng)描述肝臟的特殊顏色(淡黃或土黃)，切面富于油膩，用刀可以刮下滑脂樣物，在水面上形成一層明顯的油光等。而不能用“肝呈脂肪變性”或“肝發(fā)生脂肪變性”等抽象的術(shù)語來表示。如果病變有時難以用文字記錄時，則可繪圖加以補充說明。其次，剖檢記錄應(yīng)做到簡繁結(jié)合，即重點病變要詳寫，次要病變宜簡寫。這兩種記錄方法各有利弊。前者記錄法重點常較突出，記錄病變較完整，可發(fā)現(xiàn)各系統(tǒng)在疾病過程中的相互關(guān)系，而后者記錄法則有利于分析和研究每一系統(tǒng)在發(fā)病過程中的順序及其影響和發(fā)展的過程，同時對所觀察的病理變化以及各臟器的描述較為全面而且不易遺漏。但無論如何，遇到特殊的情況和復雜的病變時，均應(yīng)重點突出，詳略得當。如遇到肝有膿腫并穿過膈膜而達肺臟引起肺膿腫時，則應(yīng)將這一系列連貫的病變所涉及的組織范圍、病變特點、性質(zhì)及病灶的形狀等寫在一起，而不應(yīng)分開。這樣重點突出，集中事實，按重點病變的發(fā)展程序，就可寫的明確而詳細。記錄時一般常將重點的病變放在各臟器變化中的首位，同時對于其他病變的描寫，也要合乎要求，做到詳簡適當?？傊瑧?yīng)根據(jù)具體情況，斟酌記錄方式，目的是將病理變化記的正確詳細，有條不紊，并符合客觀病程發(fā)展的規(guī)律，使人看后不但能全面了解病變，而且能依此而做出正確的診斷。即邊檢查邊記錄。不具條件時，如只有一個人在剖檢時，亦可在剖檢完畢后立即補記，切不可延時過長，以防搞混記錯。病變的描述，要客觀地用通俗易懂的語言加以表達，切不可用病理學術(shù)語或名詞來代替病變的性質(zhì)。如病變有時用文字難以描述時，可繪圖補充說明。為了描述不失真，用詞必須明確，不能含糊不清，使所描述的組織器官的變化，能反映出它本來的面貌，現(xiàn)據(jù)描述的范圍，加以簡要敘述。180360條件所限，也可用常見實物比喻，如針尖大、米粒大、黃豆大、蠶豆大、雞蛋大等。切形狀一般用實物比擬。如圓形、橢圓形、菜花狀、葡萄叢狀、結(jié)節(jié)狀等。粉末樣物、光滑或粗造、發(fā)光、晦暗等。色)兩種以上的顏色，應(yīng)用黃白中雜有紅等等。為了表示病變顏色的分布情況，常用彌漫性、塊狀、點狀、條狀等。對顏色的狀態(tài)的表示，常用指壓著其有無改變而定，如指壓退色等。濕度一般用于濕潤、干燥等。透明度一般用于暗晦無光、混濁、半透明等。切面常用微突、詳細結(jié)構(gòu)不清、景象模糊、血樣物流出，呈海綿狀等。砂粒狀、顆粒狀、結(jié)節(jié)狀等。氣味常用惡臭、酸敗味等。管狀結(jié)構(gòu)常用擴張、狹窄、閉塞、彎曲等。一般材料、臨床病歷摘要、臟器及組織的病理變化和病理診斷等。種、畜別、畜號、畜齡、毛色、特征、用途、死亡時間、剖檢地點和剖檢時間等。有助于分析病理變化，找出死亡的原因，而且有利于日后的資料參考。臨床病史主要包括：主訴、發(fā)病時間、發(fā)病過程、主要癥狀、臨床診斷、治療經(jīng)過以及各有關(guān)流行病學材料和實驗室的各項檢驗結(jié)果等。臟器的病理變化主要是把外部檢查和內(nèi)部檢查的詳細情況客觀地予以記錄。在記錄時，應(yīng)包括各系統(tǒng)器官的病變，因為這些變化都是互相有聯(lián)系的。有時在肉眼看來似乎不明顯、不重要的變化，可能就是診斷疾病的重要線索，如果忽略不記，就會給診斷帶來困難。只有詳盡全面的記錄，才能概括出某種疾病的全貌。但是，大多數(shù)疾病的病變總是較明顯地定位于某些器官、某個系統(tǒng)。因此，記錄時應(yīng)抓住主要矛盾，突出重點，有主有次。此外，剖檢時不僅要注意形態(tài)的病變，還須詳細研究生物病原和毒物寄生蟲病學和毒物學的檢查結(jié)果敘述清楚。病理剖檢學診斷病理剖檢學診斷是依據(jù)各器官的病理變化，并進行綜合分綜合分析而做出的。對于死亡原因的探討，不但在病理學上具有重要意義，而且也是臨床獸醫(yī)人員亟待搞清的問題。因為只有徹底弄清疾病的死因，才能對之進行有效地治療和積極的預防。通常將疾病引起的死亡，按其引起死亡的速度而分為急死和慢死。慢死在死亡前常有明顯的癥狀可見，而急死多只在死前僅有輕微的癥狀，甚至完全沒有癥狀，所以，臨床獸醫(yī)人員對于急死的病因更迫切需要了解。總的來說，死亡通常發(fā)生以下幾種情況：生命活動的最主要器官(首先是腦和心臟，其次是肝臟、腎臟和腎上腺等)發(fā)生了嚴重的不可復性損傷而引起的死亡。構(gòu)成整體的各器官機能嚴重的失調(diào)，如由于大量失血、窒息、某些藥物或麻醉劑的急性中毒和休克等引起的死亡。異體質(zhì)性死亡，即對某些本不能引起動物死亡的物質(zhì)而導致少數(shù)動物發(fā)生的死亡。這主要是因為個別體質(zhì)型對某些物質(zhì)特別敏感之故?？傊?，在探查死因的過程中，須將每一個病例在剖檢時所獲得的形態(tài)變化資料進行科學的分析，認真地進行去偽存真，去粗取精，由此知彼，由表及里的制作功夫，同時進一步深入地綜合分析、討論，這樣才能正確地找出動物死亡的真正原因。附：動物剖檢記錄登記表動物剖檢記錄登記表單位畜別畜號品種性別畜齡毛色特征用途死亡時間剖檢地點剖檢時間臨床診斷綜合診斷臨床病例摘要（包括各項化驗結(jié)果）檢記錄內(nèi)容一、外部檢查二、內(nèi)部檢查病理學診斷主檢××單位畜別畜號品種性別畜齡毛色特征用途死亡時間剖檢地點剖檢時間臨床診斷綜合診斷臨床病例摘要（包括各項化驗結(jié)果）檢記錄內(nèi)容一、外部檢查二、內(nèi)部檢查病理學診斷第二章病理組織學切片技術(shù)第一節(jié)制作組織切片的主要器材切片機顯微鏡觀察的標本要求一定的薄度，否則光線不能透過，一般的標本切片為5～10μm。切片機是制片室最重要的工具，切片機的種類很多，常用的可分為三類：石蠟切片機、火棉膠切片機和冰凍切片機。1～251～401μm，可隨意調(diào)節(jié)。切片機的后面有一個大齒輪，此輪與前進的中軸相連接。切片機的右側(cè)有一轉(zhuǎn)動機火棉膠切片機：火棉膠切片機均為滑動式，又稱滑動切片機。它與石蠟切片機的刀臺可前后滑動；另一條為斜形滑動軌道，上置載物臺及推進器，兩者相接觸，用推進器來控制載物臺所伸的高度。載物臺由低向高推進，所伸的高度即切片的厚度。有調(diào)節(jié)切片厚度的微動裝置，切片刀每來回移動一次，材料塊就按厚度計所調(diào)節(jié)的切片厚度伸高一次，從而獲得一定厚度的一張切片。這種切片機需配有冷凍裝置，一般為二氧化碳鋼瓶、半導體制冷器或自動冷凍機等。新鮮組織或已固定的組織，經(jīng)制冷后即可切片，因而適用于制作臨床病理組織快速檢查及組織化學研究用的切片。冷凍切片機不易切出較薄的切片，且不宜作連續(xù)切片。切片刀異，分為石蠟切片刀、火棉膠切片刀、冰凍切片刀及硬組織切片刀四種。硬組織切片刀為刨刃式，刀刃在刀身的一側(cè)，主要用于切不脫鈣的骨組織，使用較少。其它三種切片刀的形狀及結(jié)構(gòu)基本相同。切片時將刀柄取下。刀背套是一種金屬或硬塑料制的半圓形有彈性的鞘，其大小及長短按切片刀來裝配。磨刀具要獲得良好的切片，切片刀的鋒利與否是一個極為重要的因素。切片刀經(jīng)多次使用后，刀刃會變鈍或損傷，因此切片刀需經(jīng)常研磨，切片刀的研磨有手工磨刀和機械磨刀兩種。手工磨刀需備有磨刀石。磨刀石種類很多，有天然石、人工石和平板玻璃等。機械磨刀就是用磨刀機代替手工磨刀。它不僅減輕了人力勞動，而且提高了磨刀效率，節(jié)省了時間。熔蠟箱及包埋工具市售的熔蠟箱及培養(yǎng)箱，均有自動控制恒溫的調(diào)節(jié)裝置。熔蠟箱的溫度，按使用石蠟的熔點為準，熔蠟箱的溫度以高于石蠟熔點2～3℃為宜。培養(yǎng)箱的溫度一般在37～40℃，用于烤片。于一塊銅板或玻璃板上，根據(jù)組織塊的數(shù)目和大小移動銅（鋁）塊，這樣便圍成一個長方形或正方形框，以包埋組織塊。此外，也可用較厚的硬紙，折成長方形紙盒來包埋組織塊。載玻片及蓋玻片載玻片和蓋玻片在制作切片標本時是必不可少的。常用的載玻片為76×26mm，厚1mm左右。載玻片應(yīng)透明、無霉點、無劃痕，邊緣光滑。制作連片或腦干等大組織可用76×52mm的大載物片。蓋玻片的規(guī)格較多，厚度為0.15～0.5mm18×18、18×24、20×20、22×2224×24mm24×32、24×40mm，用于大載片的為40×40、40×50或50×60mm.染色缸及染色架染色缸有立式、臥式及蓋玻片染色缸三種。立式染色缸可直插載51022×2224×24mm5染色缸對大量染色不適用，多采用染色架為宜，染色架是金屬制成的可盛放載玻片的小籃框，有2550100（大搪瓷杯）能容納的片數(shù)自行設(shè)計。用染色架染色適用于做大批切片，既節(jié)省藥液又節(jié)省時間，同時染出的顏色各片一致。但由于染色架是金屬制品，故不宜用于神經(jīng)組織染色和組織化學的制片。常用玻璃器具在組織學制片過程中使用的玻璃器材與其它實驗室大致相同，如量筒、漏斗、試劑瓶、廣口瓶、燒杯、滴瓶及試管等。用量較大的為廣口瓶，容量從100～1000ml不等，主要用于固定組織及脫水，棕色廣口瓶常用于鍍銀和配制藥液。5cm8cm12cm大玻皿用于鑒別染色?；鹈弈z瓶為雙重磨口蓋，以防止乙醚的揮發(fā)。其它如樹膠瓶、鏡油瓶及各種規(guī)格的標本缸等。玻璃器材的清洗可用重鉻酸鉀、濃硫酸配成的洗液進行清洗。第二節(jié)病料的選取及固定病料選取病料的采取應(yīng)在動物殺死后立即進行，否則細胞發(fā)生死后變化，如自溶或腐敗現(xiàn)象，而失去原有結(jié)構(gòu)。取材的先后應(yīng)根據(jù)動物死后組織改變的快慢而定。在做人體解剖時，應(yīng)首先破開腹腔，將整個消化管取出，因消化管在血液循環(huán)停止后，黏膜很快發(fā)生自溶現(xiàn)象。取材時應(yīng)注意臟器的完整性，消化管應(yīng)保持黏膜、肌層及外膜的完整。腎、肝、脾不可將被膜損壞。有些臟器如口腔腺、胰腺等無被膜，切片又無方向的要求，故在取材時無嚴格要求。此外，如眼球、睪丸、喉頭、舌等應(yīng)整個器官固定，待固定后再修整。取材時嚴禁機械損傷，凡用鑷子夾過或用手壓過的組織均不可使用。取材時應(yīng)用鑷子夾該組織周圍的結(jié)締組織，然后用快剪刀或手術(shù)刀將組織切下。消化管的取材，應(yīng)先將一段腸管取下，從中破開使其成一片狀，再將其鋪于硬紙上（被膜面貼靠硬紙入固定液。胃和胃的移行部的處理與腸管相同。1～1.5cm不大的組織應(yīng)整個固定。腦組織按腦回切為橫斷固定。取材的大小，既要保證組織的完3～4mm病料固定采取組織后，應(yīng)立即進行固定。固定是制片極為關(guān)鍵的一個步驟。制片質(zhì)量的優(yōu)劣，除與材料的新鮮程度有關(guān)外，還取決于最初的固定是否適當和完全。配成固定液使組織固定，其作用有以下幾點：制自溶、腐敗，以保持其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)，與生活時原狀相似。內(nèi)各種物質(zhì)產(chǎn)生不同的折光率，染色后利于顯微鏡觀察組織結(jié)構(gòu)，使原來在生活情況下看不清楚的結(jié)構(gòu)變得清晰易見。作。如甲醛、氯仿、酒精、丙酮等都有硬化作用。有些固定劑具有媒染的作用，如重鉻酸鉀、鉻酸等。媒染使細胞易于著色。固定的注意事項 組織固定時，應(yīng)注意下列幾個問題：中進行固定，切勿耽誤，最遲不得超過1～2h。5mm1:20Helley氏液是氧化劑和還原劑混合而成，容易變性，在低溫下固定為好。Carnoy及Susa小塊繼續(xù)固定。含有氣泡的材料投入固定液后，不會下沉，故須將氣體抽出，使材料下沉。最簡易的抽氣方法是將材料和固定液一并倒入10ml的注射器中，抽動幾次，氣泡被抽出，材料即會下沉。肺組織雖可縛以重物，使其下沉于固定液中，但在脫水透明時仍須進行抽氣。放些棉花使組織落于棉花上。厚度超過0.5cm雖長些，但能收到良好的效果，特別是組織化學制片，更需要冷藏固定。固定時，要防止材料發(fā)生變形，如神經(jīng)、腸系膜等應(yīng)先平鋪于硬紙上，再投入固定液中。有的材料（如腸管）2～3h含有粘液、污物或血液的材料（如消化管、氣管行固定。2～3h大型動物標本最好用注射固定法，即將固定液注入血管內(nèi)，固定效果好。常用固定液的種類及配制固定液的種類很多，歸納起來可分為兩大類：簡單固定液和混合固定液。簡單固定液又稱單純固定液，就是用一種化學試劑作為固定液，如乙醇、甲醛溶液、冰醋酸等。它們只是對細胞某種成分和結(jié)構(gòu)固定較好，而不能將細胞所有成分都保存下來，如升汞固定蛋白質(zhì)、冰醋酸固定核蛋白等。又如無水酒精可固定糖元，但不能固定脂肪。所以，單純固定液是有局限性的。點互相彌補，因此可產(chǎn)生較好的效果。如乙醇和冰醋酸單獨使用，效果不夠理想，按適當比例混合就可成為很好的固定液。36～401001010ml90ml，實際含量為4%。但在組織學技術(shù)中習慣稱為10%，本書所用甲醛濃度均按習慣而言。甲醛呈酸性，有強烈的刺激性。甲醛與空氣接觸易被氧化成甲酸而增加酸性。甲醛產(chǎn)生的乳白色沉淀為三聚甲醛。甲醛為還原劑，在與鉻酸、重鉻酸鉀及鋨酸混合使用時，應(yīng)在用前配制，經(jīng)24h即失效，最好使用棕色廣口瓶。甲醛滲透力強，固定均勻，組織膨脹約5%，經(jīng)酒精脫水時有較大的收縮。未經(jīng)中和的甲醛對固定無大防礙，但某些方法中要求用中性甲醛，最簡單的方法是在原裝甲醛瓶內(nèi)放少量碳酸鎂，其pH7.6，也可加粉筆數(shù)根，此方法簡單，而且長期保持中性。甲醛長期固定的組織，由于甲醛酸性增強，使組織變?yōu)樗嵝裕瑢θ旧焕杞?jīng)自來水洗24Schaffer10ml，1.7420ml3d，經(jīng)逐級酒精脫水、透明，石蠟包埋。此液對固定肥大細胞顆粒及粘液效果良好。Schaffer50ml3%1～2d。Worcester氏甲醛—升汞混合液：將1024h1012～24h。此液對一般組織均可使用，效果良好。最好用無水酒精或醫(yī)用酒精在固定的同時亦有脫水作用，對組織收縮較大，故不適宜單獨使用，多與冰醋酸、甲醛及氯仿配成混合液。Carnoy60ml10ml30ml。此液滲透力強，小塊組織固定數(shù)小時即可。冰醋酸可防止組織收縮和增強滲透力，透明用苯較好，浸蠟時間不宜太久，否則組織變脆。90ml10ml。此液對肥大細胞顆粒和粘液固定良好，固定后直接入無水酒精脫水、透明、包埋。0.9%～1.2炸藥，在空氣中可自行燃燒，為了安全均以飽和水溶液保存。苦味酸可沉淀一切蛋白質(zhì)，對脂肪及類脂無作用?？辔端釢B透力弱，組織收縮大，故不能單獨使用，多與酒精、甲醛及冰醋酸混合使用?？辔端峁潭ǖ慕M織呈黃色，在脫水時即可脫去，不需特殊處理。若用火棉膠包埋，則需將苦味酸脫凈，因苦味酸能軟化70多，但均系BouinBouin75ml25ml5ml。Smith—Bouin45ml，95%45ml5ml5ml。上述兩液均適用于各種組織的固定，對各種染色均無防礙。苦味酸對皮膚有軟化作用，可溶解肌腱粘蛋白，可使甲狀腺的膠質(zhì)收縮甚至脆硬。9930%～40%，兩者只是含量不同。冰醋酸能沉淀核蛋白，對染色質(zhì)固定良好，對球蛋白及白蛋白固定不佳，對脂肪及類脂無作用。冰醋酸的滲透力最強，能防止組織的自溶，有使組織膨脹的作用，從而減少組織的收縮。冰醋酸不能單獨使用，多與其它藥品混合使用。第三節(jié)病料的脫水、包埋及切片新鮮組織經(jīng)固定后，使組織的微細結(jié)構(gòu)得到保存，不發(fā)生死后變化。顯微鏡觀察的標本要求數(shù)微米的薄片，因此必須將固定后的組織切成薄片以便觀察。常用的切片方法有石蠟、火棉膠及冰凍三種。石蠟包埋及切片法切片薄而均勻，并適合制作連續(xù)切片。缺點是組織收縮較大，對堅硬或體積大的組織和脂肪組織不適合。石蠟包埋切片最終是以石蠟代替組織內(nèi)的水分，組織的周圍被石蠟所包裹。若想達到此目的必須經(jīng)過一系列的處理。固定后的組織含有大量水分，石蠟不能浸入組織，故首先需將組織的水分脫去，一般均用酒精脫水，因酒精與水在任何比例均能混合，經(jīng)酒精脫水后，組織中的水分即被酒精所代替。酒精仍不能與石蠟相融合，尚需經(jīng)媒浸劑，作為媒浸劑必須能與酒精和石蠟在任何比例均能混合，石蠟才能浸入組織。組織在此液內(nèi)呈透明狀態(tài)，故將此步驟稱為透明。透明的組織是由透明劑代替了組織中的水分，此時將組織浸入融化的石蠟內(nèi)，石蠟即可浸入組織內(nèi)部，最后將組織用包埋器包成蠟塊。包埋好的組織內(nèi)部充滿石蠟，組織周圍被石蠟包裹，組織的硬度與所使用的石蠟硬度相等，將蠟塊粘在固定臺上，置切片機上切片。60%或70%酒精脫水逐漸過度到無水酒精，對胚胎組織應(yīng)由30%或40%酒精開始。脫水的時間應(yīng)根據(jù)體積的大小和3～5mm1h以上。為使脫水徹底，無水酒精需更換一次，組織于無水酒精內(nèi)既要將水脫凈又要將脂肪溶去，對結(jié)締組織及脂肪組織多的臟器應(yīng)增長時間，對肝、脾及腎等應(yīng)適當減短時間，否則組織變脆。脫水時間的長短，在許多著作中均不一致，只能作為參考，必須反復操作取得自己的經(jīng)驗，靈活掌握。柏油、冬青油、苯甲酸甲酯等。一般組織多用二甲苯或苯，對胚胎組織用苯甲酸甲酯或冬青油為佳。二甲苯的透明力強，對組織的收縮大，硬化程度高，時間過久會產(chǎn)生脆硬現(xiàn)象，尤其肝及脾為甚。時間稍久組織亦不易變脆。冬青油多用于胚胎組織如整裝雞胚標本和整塊浸染的組織，其透明時間較長，約一至數(shù)天，但組織收縮小，無脆硬現(xiàn)象。浸蠟透明后的組織立即投入熔化的石蠟內(nèi)。一般使用的石蠟熔點為50～62℃18～2052～56℃的石蠟為宜。夏季溫度高應(yīng)用硬蠟。新蠟往往含有氣體或少量水分，應(yīng)反復加溫使氣體及水分排除，包埋后切下來的碎蠟可反復使用。熔蠟箱的溫度要控制在高于使用的石蠟2～3℃為宜。浸蠟的時間應(yīng)以組織塊大小而定，組織塊在3～5mm3～4對脂肪組織及纖維成分較多的組織應(yīng)延長浸蠟時間。石蠟應(yīng)保持清潔和不含有過多的二1～2的石蠟倒入包埋器，然后將組織塊按一定的間隔放入，一般均將切面向下與包埋器的底接觸，操作必須迅速，以免石蠟?zāi)?。周圍留?mm的蠟塊，切勿過大與過小。然后將修好的蠟塊用加溫的金屬篦子粘于木塊或金屬蠟塊臺上，即可放置在切片機上切片。片刀及固定蠟塊的螺絲必須固定緊。切片速度要均勻一致，否則切片厚薄不等。切片刀的角度很重要，一般在4～6與刀身接觸，角度過大切片易碎。組織塊的長徑與切片刀的長徑一致，蠟塊必須成規(guī)整的長方形或正方形，否則蠟帶彎曲。為了增加蠟塊的硬度，在切片前用冰塊冰短時間后再切片其效果較好。切片的厚度一般為5～8μm，視檢查內(nèi)容適當增減。本不同而異。一般切片標本的粘片均需在載玻片上涂極少一層蛋白甘油（取生鮮蛋白與等量的甘油混合，用玻棒充分攪拌，過濾后加少量石炭酸或樟腦防腐。保存于冰箱，可。干粘或酒精粘片法此種粘片法多用于顯示糖類及用于某些特殊染色方法，以防止其損失。干粘即將切片直接放在載玻片上，用毛筆壓平即可，此種粘片易出現(xiàn)皺折和脫落現(xiàn)象。酒精粘片即將切片放在載玻片上，滴加少量50%～70溫，使切片展平?；?qū)⒕凭湃霟?，用酒精燈加溫?0～40切片浮于酒精表面，待皺折展平，用載玻片將切片取出，放入37必須注意安全，防止酒精燃燒。水內(nèi)撈片法除方法規(guī)定干粘或酒精粘片外均可用水內(nèi)撈片法，它適合制作大量4037℃溫箱烤干，亦可在60℃烤箱烤干。火棉膠包埋及切片法火棉膠切片的優(yōu)點很多，包埋過程中不需要透明和加溫，故組織的收縮較小，一般組織均可使用。但由于包埋時間久，不易制成連片，切片較厚，因此一般不使用。但對一些器官必須用火棉膠包埋如內(nèi)耳、眼球、睪丸等?；鹈弈z是由濃硫酸或硝酸作用于脫脂棉而得，為硝化纖維的總稱。市售火棉膠有棉狀、干燥塊狀和8合液配成2%4%8%及12%的溶液。固體火棉膠需先切成細條，置溫箱中使之干燥，然后配成溶液。配置火棉膠需用三角燒瓶，火棉膠溶化較慢，經(jīng)常搖動或倒置三角燒瓶，可加速溶化。配置火棉膠必須使用新開封的無水乙醇和無水乙醚。無水的火棉膠溶液呈透明淡黃色或無色，含水的則呈乳白色，此種火棉膠不宜浸入組織。脫水及浸透組織的脫水與石蠟切片相同，從無水乙醇移至無水乙醇—乙醚等份混合液，依組織塊的大小浸1到數(shù)天，然后移至248%及1221包埋將812相隔1cm70%酒精硬化，并可長期保存?；鹈弈z的硬度與切片厚度有關(guān)，硬度大易切成薄片，硬度不夠則切片困難。2%火棉膠粘于木塊上，待粘牢后放入70在滑動切片機的軌道上加少量液體石蠟，使之順利滑行?；鹈弈z的韌性較大，刀與滑行20-407070%酒精。將切片放入70%酒精以備染色。若中途停止切片，需用70火棉膠切片一般均不粘片，用玻皿作游離染色法。若需要粘片染色可按下列方法處理。蛋白甘油粘片法：將切片移至涂有蛋白甘油的載玻片上，用濾紙吸干，加數(shù)滴954g20ml51～2ml放在載玻片上，即可粘牢。此法對冰凍切片亦可使用。將切片從70%酒精內(nèi)移至涂有0.5加上述火棉膠覆蓋切片，于空氣中干燥短時，入酒精中硬化，經(jīng)蒸餾水洗后即可染色。冰凍切片法冰凍切片法實際上是以水為包埋劑，先將組織進行冰凍，待堅硬后再用冰凍切片機進行切片。由于該方法較石蠟切片法和火棉膠切片法簡便，節(jié)省時間，一因材料不需經(jīng)溶媒處理就可直接進行冰凍切片，材料不致受試劑的劇烈刺激及溫度的影響，所以切片沒有顯著的收縮現(xiàn)象，細胞不致有大的改變，很好的保留脂類及酶類等，所以適合于脂肪、神經(jīng)組織及不少組織化學的制片。新鮮的組織或已固定的組織，經(jīng)短時期處理后即可進行切片，用任何固定劑固定的材料均適用于冰凍切片，但根據(jù)一般的經(jīng)驗，用福爾馬林固定的材料最適于冰凍切片?，F(xiàn)在多用冰凍切片機制作冰凍切片。冰凍切片的缺點是一般不能制作連續(xù)切片，難以獲得極薄的切片，切片厚度通常在10～20μm之間；切片容易出現(xiàn)破碎現(xiàn)象。制作冰凍切片時應(yīng)注意以下事項：在切片時要注意凍結(jié)適當，冰凍過度切片易碎，且損傷刀口，冰凍不足，難以切出完整切片；切片的動作要敏捷，勿延誤時間；組織塊不宜過大過厚；切片刀要鋒利。冰凍切片一般不需粘貼于載玻片上即可進行染色，但有時為染色方便或防止切片卷皺，貼片也有必要。若需要粘片染色可按下列方法處理。進行染色。4g20ml7070ml51～2ml放在載玻片上，即可粘牢。將切片貼在涂有多聚賴氨酸或APES染色。第四節(jié)組織切片封固及骨組織制片染片封固染片封固的目的是為了長期保存標本，封固的方法依染色的方法不同可分干封和濕封兩種?？椛霞右坏螛淠z，蓋上蓋片，即將組織封于載片與蓋片之間。封固劑的折光率應(yīng)與標本相似，封固劑的折光率高于組織，雖然透明度好，但分辯力較差。折光率低于組織則透明度較差。封固劑應(yīng)為中性，酸性樹膠對染色有較大的破壞作用，故標本易褪色。最常使用的為樹膠或稱香膠、加拿大膠、松香，折光率為1.541～1.547，為透明淡黃色晶體，溶于二甲苯、苯等，一般均用二甲苯溶解，其折光率為1.520。為避免樹膠成酸性，可在樹膠瓶內(nèi)加少量大理石，使其保持中性。或組織化學顯示的某些酶。濕封的標本染色后不經(jīng)酒精脫水及二甲苯透明，滴加水溶性的液體封固。濕性封固劑有液體和固體兩種，其主要成分為甘油和明膠。液體封固劑易蒸發(fā)，為了防止液體的蒸發(fā)，用漆或蠟將蓋片的周圍封閉。10ml10ml20ml。對分離的運動終板則用甘油—甲酸等份混合液。固體水溶性封固劑配法如下：Kaiser7g42ml蒸餾水，加甘油0.5g;Fischer5g240ml25ml膠40g。甘油明膠封固劑在常溫下為固體狀，用前需加溫熔化，滴于標本上，立即加蓋片封固。骨組織制片骨標本的制作，分脫鈣切片法和不脫鈣的磨片法，視檢查目的不同適當?shù)倪x擇。其軟化，才能切片。脫鈣均使用酸性藥物，如硝酸、鹽酸、硫酸、甲酸或三氯醋酸等，近年來經(jīng)一些學者研究證明，用乙二胺四乙酸二鈉或四鈉鹽脫鈣取得良好效果。Schaffer5%～7%硝酸水溶液，視組織大小確定5%硫酸鈉中和24h，脫水包埋。VonEbner100ml4ml10～20ml，至脫凈鈣為止，入稀氨水中和。Murayama107050ml7010%甲醛內(nèi)保存。用乙二胺四乙酸鈉鹽脫鈣是一種螯合作用，雖然脫鈣作用緩慢，但對其它無機鹽亦能溶解，使用時勿與鐵相接觸，近年來已被廣泛應(yīng)用。方法為用5.5%乙二胺四乙酸鈉鹽水溶液，也可在10%甲醛溶液100ml中加乙二胺四乙酸鈉鹽5g。臘包埋，仍然變得脆硬不易切片，故多采用火棉膠包埋或凍結(jié)切片。對顯示骨小腔及骨小管用凍結(jié)切片，按Schmorl氏硫堇—苦味酸法或磷鎢酸—硫堇法染色效果良好，而用蘇木精—伊紅染色則用火棉膠包埋切片為佳。Schmorl10Nicolle100ml，50%酒精的硫堇飽和溶液10ml，也可用蒸餾水代替2.5）染7010min；經(jīng)961～2Schmorl氏磷鎢酸—硫堇法：切片先用上述石碳酸—硫堇法處理，蒸餾水洗，移至70%酒精1～2min，蒸餾水洗后，入磷鎢酸或磷鉬酸飽和水溶液至切片呈藍色或綠色，約1min；蒸餾水洗至切片呈天藍色；入稀甲醛或%氨水固定碳酸—二甲苯、純二甲苯、封固。結(jié)果骨小管及骨小腔藍黑色，基質(zhì)淺藍色或藍色，細胞核淡藍色。Bock此外對研究骨折后生長過程及鈣鹽沉積的情況是較好的。組織固定于下液氏液壓25m5100m；用VonEbner氏法或5%硝酸脫鈣；脫鈣后入524h或氯化鈉半飽和水溶液中和6d；流水洗1～2d，脫水，火棉膠包埋（對骨發(fā)生的材料可用石蠟包埋；切片用Hansen氏蘇木精染1～18；用甘油—冰醋酸等份混合液處理5～20min或稍長，若脫色過慢可適當減少蘇木精的染色時間；自來水洗1小時，入0.4%伊紅70%酒精溶液染5min；經(jīng)96%及無水酒精脫水、二甲苯透明，封固。若火棉膠切片經(jīng)96%酒精，入石碳酸—二甲苯，純二甲苯透明，封固。結(jié)果鈣化骨藍色，無鈣化骨紅色。十微米的薄片來觀察其微細結(jié)構(gòu)。骨磨片不經(jīng)染色可清晰顯示出骨小腔、骨小管及哈佛氏系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)，亦可用復紅、硫堇染色，或硝酸銀浸漬法，均可獲得良好效果。不脫鈣的骨或牙磨片是研究鈣鹽沉淀或其它元素的最好方法，將磨好的骨標本用X線顯微攝影，因各種元素對X線吸收程度不同，以及同一元素在不同部位的含量多少不等，均可被X陳舊骨或牙磨片法：取陳舊管狀骨鋸成～2mm薄片（橫斷及縱斷，用火漆粘在軟木塞上，用水砂紙研磨。砂紙應(yīng)放在玻璃板上，研磨時應(yīng)走8字形，待磨平后用小火焰將火漆熔化取下骨片，再按上法磨另一面。磨至100μm厚呈斑白色，從軟木塞取下后用手指在細磨石或玻璃板上加氧化鋁研磨，當骨片呈透明時約40～50μmKrompecher氏改良Ruppricht1～2mm50%酒精的復紅飽和溶液（7g）染色2d，然后移至96%酒精復紅飽和溶液（約2g）和無水酒精復紅飽和溶液（1g）各染2～3d內(nèi)保存或立即制成磨片。研磨時必須用二甲苯濕潤，切勿干燥。磨后用二甲苯洗凈，放在載物片上滴加樹膠，加蓋片封固。結(jié)果骨小腔及骨小管呈紫紅色。Krause氏骨磨片銀浸法：取管狀骨先制成磨片，用無水酒精脫去脂肪和水，用蒸餾水洗數(shù)小時，入0.7%硝酸銀水溶液24h，骨片成為褐色，蒸餾水洗，在毛玻璃上輕輕的研磨后，蒸餾水洗，脫水、透明、封固。結(jié)果骨小管及骨小腔呈褐色。第五節(jié)染料及染液的配制染料的一般知識染料一般分天然和人工合成兩類。天然染料雖然品種不多，但對組織學、病理檢驗以及生物學的染色卻是必不可少的。人工合成染料隨著科學的發(fā)展，從品種上及質(zhì)量上都有了很大的提高，給染色技術(shù)提供了有利條件。天然染料的化學性質(zhì)，至今尚未完全了解（如蘇木精和卡紅，故不能用人工方法合成。人工合成染料則不然，無論從化學組成和性質(zhì)都取得了豐富的知識。最初的人工合成染料是由苯胺制成的，故稱它為苯胺染料。目前許多合成的染料與苯胺毫無關(guān)系，也不是苯胺的衍生物，然而均可由煤焦油中的一種或數(shù)種物質(zhì)制成，因此人工合成染料的苯是一種重要的有機化合物，能和許多原子團及元素結(jié)合成復雜的化合物。苯和某一原子團結(jié)合成有色物質(zhì)，只要分子略加改變即成為染料。構(gòu)成染料的主要成分為色原，是由一個或數(shù)個芳香環(huán)和一個或數(shù)個發(fā)色團的原子群所組成。發(fā)色團的種類并不多，如C:OC:CC:SC:NN:ON:N等。在一個化合物中至少含有一個發(fā)色團或數(shù)個發(fā)色團，含發(fā)色團多的化合物顏色深，少則色淡，如醌環(huán)中就含有雙重C-C:C-C不能直接染色，因它對組織無親和力。染料除含發(fā)色團外，還需有一種促使化合物產(chǎn)生電離的原子團，稱為助色團，有些發(fā)色團亦稍有助色團的性質(zhì)。助色團的作用是使化合物成為鹽類，苦味酸的發(fā)色團是硝基，助色團為羥基，若將硝基還原為氨基就不成為染料，因氨基不是發(fā)色團。顏色是由發(fā)色團產(chǎn)生的，而染料的性質(zhì)與助色團有關(guān)。區(qū)別酸性或堿性染料，首先要看染料的主要成分，染料中的助色團是使染料成為鹽類的部分，依助色團的性質(zhì)，來確定染料是酸性還是堿性。酸性染料是由色陰離子和無色的無機對離子構(gòu)成。堿性染料由色陽離子和無機對離子構(gòu)成。中性染料是由色陰離子和色陽離子結(jié)合而成。在某一染料中的助色團可以是酸性，也可以是堿性，亦可酸性與堿性同時存在?？辔端岬闹珗F為羥基，羥基為酸性，因此苦味酸為酸性染料。氨基為堿性助色團，氨基所以呈堿性，是因它遇水或遇酸后，原來的三價氮變?yōu)槲鍍r氮之故。如果在一染料中含有較多助色團，該染料的酸性或堿性就較強。若染料中含有一個氨基和一個羥基，氨基的堿性雖然很強，但因有羥基的存在而變?nèi)?。染料均為鹽類，酸性染料是色酸鹽，一般為鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及銨鹽。堿性染料是色堿鹽，普遍多為氯化物，亦有硫鹽和醋酸鹽。常用細胞核染料及染色法用于細胞核的染料甚多，大致分天然染料（如蘇木精和卡紅等、人工合成染料（如硫堇、甲苯胺藍、復紅、焦油紫、美藍、沙黃及結(jié)晶紫等合成媒染染料（如核真紅、天青石藍、酸性茜素藍、茜素菁藍等3類。此外由人工合成GiemsaWright卡紅卡紅是熱帶的一種昆蟲（Cochinealinsect）的蟲體產(chǎn)物，經(jīng)加工除去雜1849GoppertCohn1851Corti于或低于卡紅等電點的溶液，才能很好的溶解。常用的酸性溶液如冰醋酸或苦味酸，堿性溶液如氨礬、碳酸鋰、鉀礬或硼砂等，此時對組織亦產(chǎn)生較強的親和力，使組織利于著色?？t為細胞核的優(yōu)良染料，能長久