標(biāo)記物的制備與鑒定

標(biāo)記物制備與鑒定125I-125I或125I+125I-標(biāo)記物（混合物）Ch-T、LPO氧化取代反應(yīng)直接標(biāo)記法化學(xué)或酶促反應(yīng)，將放射性負(fù)電碘離子氧化成碘原子或正電碘離子，通過取代反應(yīng)置換被標(biāo)記物分子中酪氨酸或酪胺殘基以及組胺殘基上的氫原子。使用無還原劑的高比放射性碘源被標(biāo)記物用量要少ch-T用量要低控制總反應(yīng)體積<200μl反應(yīng)時間1-2分鐘弱堿性反應(yīng)條件bolton-Hunter間接標(biāo)記法聯(lián)接標(biāo)記(bolton-Hunter)預(yù)先將125I用ch-T法標(biāo)記琥珀酰胺酯，制成的125I化脂功能基團(tuán)可與蛋白分子上的氨基酸殘基反應(yīng)，從而使待標(biāo)記物被碘化。聚合、損傷物標(biāo)記蛋白游離125I125碘-標(biāo)記物的制備－純化

凝膠過濾法離子交換層析法聚丙烯酰胺凝膠電泳高效液相色譜法125碘-標(biāo)記物的制備－鑒定

放射化學(xué)純度單位標(biāo)記物中結(jié)合于被標(biāo)記物上的放射性占總放射性的百分率應(yīng)大于95%免疫活性標(biāo)記物與抗體結(jié)合的能力標(biāo)記物與過量抗體反應(yīng)百分比該值越大,標(biāo)記物免疫活性好結(jié)果準(zhǔn)，測定復(fù)雜比放射活性單位化學(xué)量標(biāo)記物中含的放射性強(qiáng)度單位：Ci/gmCi/mgCi/mmol比放射性過高，將影響標(biāo)記物免疫活性計算法：依據(jù)標(biāo)記反應(yīng)中放射性核素的利用率（標(biāo)記率）來計算標(biāo)記物的比放射性.自身置換法：比較標(biāo)記抗原與標(biāo)準(zhǔn)抗原的免疫活性來測定標(biāo)記物的比放射性

結(jié)果欠準(zhǔn)，計算簡便比放射性－計算法

自身置換曲線

反應(yīng)系統(tǒng)：限量Ab和遞增劑量(cpm)的標(biāo)記抗原標(biāo)記抗原的結(jié)合率(B/T%)隨標(biāo)記抗原總量的增加而減少兩條曲線平行,若標(biāo)記抗原與標(biāo)準(zhǔn)品抗原具有相同的免疫活性標(biāo)準(zhǔn)曲線

反應(yīng)系統(tǒng):抗體（限量）、標(biāo)記抗原（定量）和劑量遞增的標(biāo)準(zhǔn)抗原組成標(biāo)記抗原與抗體的結(jié)合率(B/T%)隨標(biāo)準(zhǔn)抗原的增加而競爭抑制性減少比放射性=自身置換法比放射性－自身置換法

標(biāo)準(zhǔn)曲線與自身置換曲線平行表明在相同的放射性結(jié)合水平上，二實驗中抗體上結(jié)合的抗原物質(zhì)總量相同計算置換曲線平行段某結(jié)合率的放射性強(qiáng)度(cpm/ml換算為nCi/ml)計算標(biāo)準(zhǔn)曲線平行段相應(yīng)結(jié)合率對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)抗原化學(xué)量(ng