基礎化學分光光度法(年制)

新浪娛樂訊9月1日上午9:30柯震東前往臺北地檢署報道，他全程低頭媒體圍堵寸步難行。柯震東今日將進行毛發(fā)、尿液的檢測。

第十三章

紫外-可見分光光度法

一、物質的吸收光譜物質對光的選擇性吸收物質的吸收光譜二、分光光度法的基本原理透光率和吸光度Lambert-Beer定律定量分析滴定分析儀器分析紫外-可見分光光度法

酸堿滴定氧化還原滴定分光光度法是基于物質對光的選擇性吸收而建立起來的一種分析方法。目視比色法一、紫外-可見分光光度法定義

研究物質在紫外、可見光區(qū)的分子吸收光譜

的分析方法稱為紫外-可見分光光度法，又稱為紫外-可見(分子)吸收光譜法。

吸收光的波長范圍：200-800nm(1)紫外光區(qū):200-400nm(2)可見光區(qū):400-800nm若用一連續(xù)的電磁輻射照射樣品分子，將照射前后的光強度變化轉變?yōu)殡娦盘柌⒂涗浵聛?，就可得到光強度變化對波長的關系曲線，即為分子吸收光譜。躍遷：電子受激發(fā)，從低能級轉移到高能級的過程。分子只有選擇性的吸收(hν=△E)某些波長（頻率）的光才能由較低的能級躍遷到較高能級上。三、紫外-可見吸收光譜的產生二、紫外-可見分光光度法特點靈敏度較高，10-6～10-5mol/L

相對誤差，2～5％有較好的選擇性適當地選擇測量條件，可在多種組分共存的體系中測定一種組分操作簡單，價格低，分析速度較快應用廣泛二、物質對光的選擇性吸收白光通過棱鏡色散出紅、橙、黃、綠、藍、紫等光單色光：單一波長的光復合光：由不同波長的光組合而成的光光的互補：若兩種不同顏色的單色光按一定比例混合得到白光，稱這兩種單色光為互補色光，這種現(xiàn)象稱為光的互補。

有色溶液的顏色是它所選擇吸收光的互補色，吸收越多顏色越深。物質的吸收光譜（吸收曲線）測量某物質對不同波長單色光的吸收程度，以波長（）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制吸光度隨波長的變化可得一曲線，此曲線即為吸收光譜或吸收曲線。吸收曲線的討論KMnO4溶液對不同波長的光吸收程度不同，在525nm的光吸收程度最大——λmax同一物質的吸收曲線是特征的。不同濃度的KMnO4溶液吸收曲線相似，λmax不變。不同物質吸收曲線形狀不同，可以作為物質定性分析的依據。不同濃度的同一種物質，在某一定波長下吸光度A有差異，在λmax處吸光度A的差異最大。此特性可作為物質定量分析的依據。在λmax處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測定最靈敏吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長的重要依據。312I0I1I0I2I2<

I1I0I3I3<

I2<

I1T1=I1I0T2=I2I0T3=I3I0T3<

T2<

T1吸光度A=-lgT=lgI0ItA3>

A2>

A1T=ItI0透光率T=ItI0透光率第二節(jié)紫外-可見分光光度法的基本原理一、透光率（透光度）和吸收度①透光率T定義：T取值為0.0%~100.0%T=0.0%：光全吸收T=100.0%：光全透過②吸光度（吸收度）AT=ItI0×100%顯然，T↑，溶液吸收度↓；T↓，溶液吸收度↑。即透光率T反映溶液對光吸收程度，通常用1/T反映吸光度。定義：A=lg1T=-lgT=lgI0ItA=-lgT,T=10-AtI0=It+Ia

+Ir吸收光反射光透過光

Ia

③T與A關系：IrA∝1/T，T=0，A=∞，T=100%，A=0二、光的吸收定律朗伯(Lambert)和比爾(Beer)分別于1760年和1852年研究吸光度Ａ與溶液厚度Ｌ和其濃度Ｃ的定量關系：朗伯定律：A=k1×b比爾定律：A=k1×bA=kbc一束平行單色光通過一均勻、非散射的吸光物質溶液時，在入射光的波長、強度以及溶液溫度等保持不變時，該溶液的吸光度A與其濃度C及液層厚度L的乘積成正比。①入射光為單色光，適用于可見、紅外、紫外光。②均勻、無散射溶液。③吸光度A具有加和性。Aa+b+c=Aa

+Ab

+Ac朗伯-比爾定律:A=lg1T=-lgT=lgI0It透光率T反映溶液對光吸收程度，T↑，溶液吸收度↓；T↓，溶液吸收度↑A=kbc朗伯-比爾定律c：mol/L

K

摩爾吸光系數,L·mol–1·cm-1

c：g/L

K

a

質量吸光系數，

L·g–1·cm-1

c：g/100mL

K

相互關系K

比吸光系數

e=aMBT=ItI0透光率吸光度A=-lgT=lgI0ItT=10-A=10-kbc分光光度法計算公式Aa+b+c=Aa

+Ab

+Ac第三節(jié)紫外-可見分光光度法

一、分光光度計光源單色器樣品室檢測器顯示1.光源在紫外可見分光光度計中，常用的光源有兩類：可見光光源，如鎢燈和鹵鎢燈；紫外光源，如氫燈和氘燈。

2.單色器

單色器以棱鏡或光柵分光，提供單色光。

3.吸收池樣品室放置各種類型的吸收池（比色皿）和相應的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見區(qū)一般用玻璃池。4.檢測器利用光電效應將透過吸收池的光信號變成可測的電信號，如：光電池、光電管、光電二極管或光電倍增管(目前常用)。5.結果顯示記錄系統(tǒng)檢流計、數字顯示、微機進行儀器自動控制和結果處理一、定性分析與定量分析法定性分析基礎定量分析基礎物質對光的選擇吸收ABA

在一定的實驗條件下，物質對光的吸收與物質的濃度成正比。A

C增大max標準曲線法定量分析法通過零點的直線示例

蘆丁含量測定0.710mg/25mL偏離朗伯-比爾定律的因素朗伯-比爾定律：A=kCL依據Beer定律，A與C關系應為經過原點的直線（一）化學因素（二）光學因素

偏離Beer定律的主要因素表現(xiàn)為以下兩個方面：該定律適用于稀溶液，溶質的離解、締合、互變異構及化學變化也會引起偏離。尤其濃度過高(>0.01mol/L)會使C與A關系偏離定律：①粒子相互作用加強，吸光能力改變。②溶液對光的折射率顯著改變。（二）光學因素1．非單色光的影響：入射