對(duì)甘油制備1,3-丙二醇工藝進(jìn)行設(shè)計(jì)

對(duì)甘油制備1,3-丙二醇工藝進(jìn)行設(shè)計(jì)-發(fā)酵法制備1,3-丙二醇摘要：本設(shè)計(jì)以甘油為原料，在無(wú)氧條件下，利用克雷伯氏菌發(fā)酵生產(chǎn)1,3-丙二醇，符合綠色化學(xué)的特點(diǎn)。通過測(cè)定菌體生物量、葡萄糖濃度、蛋白質(zhì)濃度、甘油脫水酶、丙醛的濃度，可以初步判定發(fā)酵進(jìn)行程度。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)克雷伯氏菌發(fā)酵特性進(jìn)行研究，分別研究溫度、PH、甘油初始濃度、氮源對(duì)菌體生長(zhǎng)和1,3-PD合成的影響。關(guān)鍵詞：1,3-丙二醇、甘油、克雷伯氏菌、厭氧發(fā)酵1前言1,3-丙二醇(1,3-PD)是一種重要的化工原料，它可作為化學(xué)和醫(yī)藥工業(yè)中多種潤(rùn)滑劑、有機(jī)溶劑和前體的合成原料。它作為聚酯、聚醚和聚氨酯的重要單體原料合成的聚合物具有生物可降解性、安全無(wú)毒、可循環(huán)利用等優(yōu)點(diǎn)，不僅在服裝和工程塑料領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用，在食品、藥品和化妝品等領(lǐng)域也開始嶄露頭角。以1,3-丙二醇為原料合成的食品添加劑丙二醇酯，是世界六大食品乳化劑之一，目前已被美國(guó)、日本和中國(guó)等國(guó)家及歐盟，聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織批準(zhǔn)使用。20世紀(jì)90年代中期,工業(yè)上成功開發(fā)出了以1,3-PD為原料的新型聚酯材料-聚對(duì)苯二甲酸丙二醇酯(PTT),PTT性能優(yōu)良,因此研究開發(fā)低成本的1,3-PD生產(chǎn)技術(shù)成為關(guān)注的熱點(diǎn)。1,3-PD的生產(chǎn)方法有化學(xué)法和生物轉(zhuǎn)化法。生物法合成1,3-PD符合“綠色化學(xué)”的特點(diǎn)，利用甘油或葡萄糖等可再生資源為原料，生產(chǎn)清潔，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，符合我國(guó)可持續(xù)發(fā)展的需要。近幾年，隨著以大豆油與菜籽油為原料生產(chǎn)生物柴油產(chǎn)量的迅速增長(zhǎng)，產(chǎn)生了大量副產(chǎn)物甘油；用甘油合成附加值更高的1,3-丙二醇有利于資源的綜合利用，引起了如杜邦公司、陶氏化學(xué)公司、亨斯邁公司等公司的關(guān)注。發(fā)酵工程作為生物法合成1,3-PD的關(guān)鍵環(huán)節(jié)更是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。2003年美國(guó)環(huán)境保護(hù)機(jī)構(gòu)向杜邦授予“綠色化學(xué)總統(tǒng)獎(jiǎng)”，專門用于表彰該公司對(duì)生物基1,3-PD工藝開發(fā)所作的研究。21,3-丙二醇(1,3-PD)的概述2.11,3-丙二醇(1,3-PD)的基本性質(zhì)1,3-丙二醇(1,3-PD)無(wú)色無(wú)味，易溶于水、乙醇和多種有機(jī)溶劑，微溶于氯仿和甲苯，是一種重要的化工原料。與其它二元醇相比，1,3-PD具有更高的沸點(diǎn)和更低的熔點(diǎn)（見表1-1）。表1-11,3-丙二醇與其他二醇的性質(zhì)比較性質(zhì)乙二醇1,2-丙二醇1,3-丙二醇熔點(diǎn)（℃）8.5-59-27沸點(diǎn)（℃）116118216密度（）08981.0361.060其化學(xué)性質(zhì)體現(xiàn)了醇和二元醇的典型性質(zhì)可與羧酸縮合成酯，與異腈酸鹽及酸性氯化物反應(yīng)生成聚氨酯，與二元酸反應(yīng)生成聚酯。由1,3-PD制得的聚合物易于生物降解，對(duì)環(huán)境友好。關(guān)于1,3-PD的生物毒害作用，早期報(bào)道1,3-PD對(duì)哺乳動(dòng)物具有低水平的毒性，大鼠LD50大約是10g/kg，兔子LD50大約是4.2g/kg。但是最近Gingell對(duì)大鼠的研究表明，長(zhǎng)期的1,3-PD攝入（1000mg/kg·day）并沒有對(duì)大鼠產(chǎn)生毒害作。2.21,3-丙二醇的主要用途1,3-PD由于其對(duì)稱性的三碳結(jié)構(gòu)被用作許多化合物和聚合物的合成，可用于食品、化妝品和制藥等行業(yè)，也可用于抗凍劑、增塑劑、乳化劑等的合成原料。（1）作為中間體用于食品、化妝品和制藥等領(lǐng)域。以1,3-PD為原料合成的丙二醇酯是一類食品添加劑，其作為世界六大食品乳化劑之一，目前已被美國(guó)，日大等國(guó)家及聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織批準(zhǔn)使用。由1,3-丙二醇合成的聚合物由于具有生物可降解性、安全無(wú)毒以及耐油、耐老化等許多其它二元醇合成塑料所不具有的優(yōu)良特性，在食品包裝材料具有廣泛的應(yīng)用前景。以1,3-PD為基礎(chǔ)合成的2-氨基-1,3-丙二醇及其衍生物可以預(yù)防或治愈移植接受者的急性或慢性排斥反應(yīng)，并可預(yù)防或治愈由于移植引發(fā)的血管疾病。非氨酯中間體2-苯基-1,3-丙二醇作為新一代抗癲癇藥，也正得到越來(lái)越多的應(yīng)用。（2）作為單體用于合成聚酯、聚氨酯等聚酯材料。以1,3-PD為單體合成的聚對(duì)苯二甲酸丙二醇酯（PTT）由于具有回彈性好、易染色等比聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯（PET）、聚對(duì)苯二甲酸丁二醇酯（PBT）等合成纖維更優(yōu)良的特性，在地毯、服裝面料、工程塑料和薄膜制造方面均有較好的應(yīng)用前景1998年，PTT被美國(guó)評(píng)為六大石化新品之一。作為二元醇，1,3-PD還能代替1,4-丁二醇和新戊二醇作為中間體，近來(lái)美國(guó)ChemSystems公司研究發(fā)現(xiàn)1,3-PD的二醇官能團(tuán)使其用于聚氨酯的生產(chǎn)具有很大潛力，可用于聚酯多元醇的生產(chǎn)和鏈增長(zhǎng)劑。2.31,3-丙二醇的生產(chǎn)概況早在1948年,美國(guó)Shell公司就申請(qǐng)了以丙烯醛水合路線合成1,3-PD的專利，并于20世紀(jì)70年代實(shí)施了產(chǎn)業(yè)化。90年代中期荷蘭殼牌公司首先實(shí)現(xiàn)PTT商品化,商品名為Corterra,并開發(fā)了化學(xué)法生產(chǎn)1,3-PD的新工藝路線,年產(chǎn)量4,000ｔ從此激起全球PTT開發(fā)熱潮。而后，年產(chǎn)72,000t的裝置已于1999年12月在路易斯安那Geismar投入運(yùn)營(yíng)。德國(guó)Degussa公司1995年宣布已成功地開發(fā)出以丙烯醛為原料合成1,3-PD的新工藝，其成本與乙二醇大致相當(dāng)，并在比利時(shí)的Antwerp建成2000t/a中試裝置。1996年又建設(shè)了5萬(wàn)t/a工業(yè)生產(chǎn)裝置，其產(chǎn)品用于生產(chǎn)新型聚酯纖維PTT和聚酯涂料。1998年美國(guó)杜邦公司從Degussa公司獲得了化學(xué)法生產(chǎn)技術(shù),但杜邦公司并不把化學(xué)法作為生產(chǎn)1,3-PD的主要方向,而傾向于用經(jīng)濟(jì)可行的生物轉(zhuǎn)化法進(jìn)行生產(chǎn),與世界第二大工業(yè)酶生產(chǎn)商Genencor國(guó)際有限公司申請(qǐng)了以可發(fā)酵碳源為底物用基因工程菌直接生產(chǎn)1,3-PD的專利基于這一創(chuàng)新，2003年美國(guó)環(huán)境保護(hù)機(jī)構(gòu)向杜邦授予“綠色化學(xué)總統(tǒng)獎(jiǎng)”，專門用于表彰公司對(duì)生物基1,3-PD工藝開發(fā)所作的研究2004年6月20日，杜邦公司最新推出的以1,3-PD為主要原料生產(chǎn)的最先進(jìn)的高分子聚合物Sorona?。杜邦已宣布，將從2006年開始通過使用生物基1,3-PD來(lái)生產(chǎn)Sorona?，即所采用的1,3-PD將是用玉米糖發(fā)酵的生物技術(shù)而制備的。根據(jù)2006年7月4日ICIS報(bào)告顯示，Dupont公司與英國(guó)Tate&Lyle公司合作建成以玉米葡糖為原料年產(chǎn)45Kt/a的發(fā)酵法生產(chǎn)1,3-PD裝置，已在美國(guó)田納西州洛頓市試運(yùn)行。2.41,3-丙二醇的合成方法2.4.1環(huán)氧乙烷法生產(chǎn)1,3-丙二醇環(huán)氧乙烷法是荷蘭殼牌(Shell)等公司開發(fā)的一種新方法。該法包括兩步反應(yīng)，環(huán)氧乙烷（簡(jiǎn)稱EO）首先與CO和氫氣進(jìn)行氫甲?；磻?yīng)生成3-羥基丙醛，后者再在一個(gè)固定床催化劑上7.5MPa～15MPa和100℃～200℃下加氫制得1,3-PD?？偡磻?yīng)式如下：EO＋CO＋2H2→1,3-PD。該工藝的特點(diǎn)是技術(shù)難度大，裝置投資高，但產(chǎn)品的質(zhì)量和成本有競(jìng)爭(zhēng)力。2.4.2丙烯醛水合加氫法1,3-丙二醇丙烯醛法是Degussa公司開發(fā)的方法，也包括兩步反應(yīng)。第一步是在未透露的酸催化劑存在下，丙烯醛水合為3-羥基丙醛；第二步反應(yīng)實(shí)際與環(huán)氧乙烷法的第二步反應(yīng)相同。反應(yīng)式如下：第一步：丙烯醛水合為3-羥基丙醛CH2=CHCHO+H2O→HOCH2CH2CHO第二步：3-HPA催化加氫制得1,3-PDHOCH2CH2CHO+H2→HOCH2CH2CH2OH丙烯醛路線反應(yīng)條件比較溫和，技術(shù)難度也不大。但丙烯醛本身也是一種重要的有機(jī)中間體，而且屬劇毒易燃易爆物品，難以儲(chǔ)存和運(yùn)輸。2.4.3生物法合成1,3-丙二醇自1881年AuhustFreund發(fā)現(xiàn)巴斯德梭菌(Clostridiumpasteurianum)能夠利用甘油合成1,3-PD以來(lái)，至今已發(fā)現(xiàn)多種微生物具有在厭氧或兼性厭氧條件下合成1,3-PD的能力，包括：克雷伯氏肺炎桿菌（Klebsiellapneumoniae）、產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)、弗氏檸檬菌(Citrobacterfreundii)以及絮凝長(zhǎng)桿菌（Enterobacteragglomerans）、乳桿菌屬的短乳桿菌（Lactobacillibrevis）和布氏乳桿菌(Lactobacillibuchneri)、梭菌屬的丁酸梭狀芽孢桿菌(Clostridiabutyricum)和巴氏梭狀芽孢桿菌(Clostridiapasteuianu)等，其中克雷伯氏肺炎桿菌、丁酸梭狀芽孢桿菌、弗氏檸檬菌因具有較高的1,3-PD轉(zhuǎn)化率及生產(chǎn)強(qiáng)度，是研究的最多的三種菌。3材料與方法3.1材料3.1.1菌種實(shí)驗(yàn)所用1,3-PD轉(zhuǎn)化菌KlebsiellapneumoniaeXJPD-Li從新疆特殊環(huán)境土樣中篩選得到,由石河子大學(xué)兵團(tuán)化工綠色過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。3.1.2試劑酵母浸膏、碳酸鈣、硫酸銨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、硫酸亞鐵、氯化鈣、氯化鈷、氯化錳、氯化鋅、硼酸、鉬酸鈉、氯化鎳、氯化銅、氯化銨、氯化鉀、硫酸鈉、氯化鎂、氯化鐵、氯化鈣、檸檬酸、氯化鈉、氫氧化鈉、甘油、輔酶I、1,4一二硫代蘇糖醇、碳酸鉀、碳酸氫鉀、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、1，2一丙二醇、檸檬酸鉀、鹽酸3一甲基一2苯并噻唑酮腙(MBTH)、維生素B12。3.1.3培養(yǎng)基(1)固體培養(yǎng)基（）：LB培養(yǎng)基，用于菌種保藏及活化。牛肉膏10，蛋白胨10，NaCl5，瓊脂17，pH7.0。(2)限制性培養(yǎng)基（）：用于菌株馴化。甘油20，硫酸銨6，NaCl1，pH7.0。(3)發(fā)酵（種子）培養(yǎng)基（）：見表2－1表2-1發(fā)酵（種子）培養(yǎng)基組成組分成分發(fā)酵培養(yǎng)基（）磷酸氫二鉀5.1磷酸二氫鉀1.5硫酸銨6.0硫酸鎂0.2氯化鈣0.02酵母粉1.0甘油20.0微量元素1.0鐵溶液2.03.1.4主要儀器與設(shè)備分光光度計(jì)721型、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱VIS一9140A、828型ThermoOrionpH計(jì)、電子天平CBP190S、超聲波細(xì)胞破碎儀UP50H、高速冷凍離心機(jī)3K30、4kl5超速低溫冷凍離心機(jī)、聯(lián)機(jī)紫外可見光分光光度計(jì)UV-2401(PC)S以及恒溫水浴裝置TB．85、DZX．40立式電熱滅菌鍋、HYG．II旋轉(zhuǎn)式恒溫?fù)u床柜、Spectrum756型紫外可見光分光光度計(jì)、HQ--60漩渦混合器。3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1搖瓶培養(yǎng)1）斜面培養(yǎng)：40℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，時(shí)間12h。2）微好氧種子培養(yǎng)：從活化的斜面上挑取菌苔，接入裝液量為50mL的150mL普通三角瓶，40℃水浴搖床培養(yǎng)12h，搖床轉(zhuǎn)速150rpm。3）發(fā)酵培養(yǎng)。厭氧培養(yǎng)：300ml厭氧培養(yǎng)搖瓶（圖2-1），裝液量100ml，接種量5%，40℃恒溫水浴搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120rpm，通入氮?dú)饩S持厭氧，通氣量0.2vvm。根據(jù)情況在培養(yǎng)4h、8h、12h補(bǔ)加一定量的甘油和堿，每隔一定時(shí)間取樣測(cè)定代謝產(chǎn)物和酶活變化情況。微好氧氧培養(yǎng)：厭氧培養(yǎng)搖瓶通入空氣，通氣比0.2vvm，其余條件同厭氧培養(yǎng)。3.3分析方法3.3.1菌體生物量的測(cè)定干重法測(cè)定菌體濃度：菌體濃度定義為單位體積菌液中所含菌體經(jīng)烘干至恒重時(shí)的重量，單位為g/L。取1.5mL小離心管置于80℃恒溫烘箱中烘干，在電子天平（1/10000）上準(zhǔn)確稱重，記錄為離心管初重。將發(fā)酵液充分搖勻，取1.0mL加入已稱重的離心管中，在5000rpm離心轉(zhuǎn)速下離心10min，棄去上清液，置于80℃烘箱中烘干至恒重，在電子天平上再次稱離心管重量，記為末重。末重與初重之差即為1mL發(fā)酵液中所含菌體細(xì)胞干重。菌體濃度（g/L）=菌體細(xì)胞干重/發(fā)酵液體積。濁度法測(cè)定菌體濃度：實(shí)驗(yàn)中菌體濃度是通過測(cè)定菌液在650nm波長(zhǎng)下的吸光度反映的。取一定量的菌液稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，將稀釋的菌液置于玻璃比色皿中，以去離子水為參比，迅速測(cè)定其在650nm波長(zhǎng)下的吸光度。實(shí)際菌體濃度=菌體濃度測(cè)定值×稀釋倍數(shù)。3.3.2葡萄糖濃度的測(cè)定葡萄糖濃度由SBA－40C生物傳感分析儀直接測(cè)定。SBA－40C生物傳感分析儀利用酶促反應(yīng)來(lái)定量，樣品分析的工作原理如下：樣品經(jīng)離心去除菌體后稀釋25倍，定量進(jìn)樣針吸取樣品25μl，注入反應(yīng)池。含有葡萄糖的樣品在樣品池內(nèi)迅速按一定比例混合均勻。葡萄糖透過酶膜圈的外層與固定化酶層接觸并反應(yīng)，反應(yīng)放出的再透過酶膜圈的內(nèi)層與白金－銀電極接觸，并產(chǎn)生電流信號(hào)，該電流信號(hào)與葡萄糖濃度呈線性比例關(guān)系，經(jīng)微機(jī)控制的信號(hào)可以直接顯示結(jié)果。3.3.3蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定蛋白質(zhì)定量采用考馬斯亮藍(lán)法，牛血清白蛋白(BSA)作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。原理：考馬斯亮藍(lán)法是利用蛋白質(zhì)和染料結(jié)合的原理定量測(cè)定蛋白質(zhì)濃度?？捡R斯亮蘭G-250染料在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使得染料的最大吸收峰位置由465nm變?yōu)?95nm，通過測(cè)定595nm處光吸收的增加量與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照即可知與其結(jié)合蛋白質(zhì)的量?？捡R斯亮藍(lán)溶液：取100mg考馬斯亮藍(lán)G-250染料溶于50ml95%的乙醇中，加入100ml85%的磷酸溶液，用蒸餾水稀釋至1000ml。蛋白標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)液(1g/L)：用生理鹽水溶解牛血清白蛋白制成，冰箱保存。3.3.4丙醛濃度的測(cè)定丙醛是根據(jù)其與3-甲基－2－苯并咪唑腙（MBTH）顯色后在305nm處具有特征吸收峰測(cè)定的。配置不同濃度丙醛，取1mL與0.5mL0.1％的MBTH顯色15min后加入2mL蒸餾水稀釋，然后測(cè)定，丙醛濃度與的關(guān)系見圖2-2。圖2-2丙醛標(biāo)準(zhǔn)溶液3.3.5甘油脫水酶（GDHt）的測(cè)定甘油脫水酶（GDHt）活性的測(cè)定采用Toraya建立的MBTH方法，且根據(jù)酶的反應(yīng)特征做了部分修訂。反應(yīng)原理如下：樣品預(yù)處理：取一定體積菌液離心處理，沉淀用50mmol/L的緩沖液(pH8.0)充分洗滌后離心，倒掉上清液，用緩沖液重懸沉淀，超聲破碎（3s×3s×90次）后離心，上清液即為粗酶液，所有離心條件均為10000r/min,3min,4℃。反應(yīng)體系3.5ml，其中含有0.1mlKCl(0.05mol/L))，0.1ml1,2-丙二醇(0.2mol/L)，0.1ml輔酶B12(15μmol/L)，0.7ml酶液(空白樣品加0.7ml緩沖液)；加入酶液開始計(jì)時(shí)，40℃反應(yīng)10min后加入1ml0.1mol/L的檸檬酸鉀中止反應(yīng)，加入0.5ml0.1%MBTH顯色15min，再加入1ml蒸餾水稀釋在305nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度。酶活定義：一個(gè)酶活單位定義為在上述條件下催化形成1μmol丙醛所需的酶量，比酶活為每毫克蛋白的酶活。相對(duì)酶活為酶活與最大酶活的比值，用百分?jǐn)?shù)表示。3.4原料甘油的選擇采用純甘油、粗發(fā)酵甘油、低純度皂化甘油進(jìn)行搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn),以確定不同原料對(duì)菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)物1,3-丙二醇生成的影響程度。菌體生長(zhǎng)情況可由OD值反映,通過搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，并測(cè)定生物量，根據(jù)測(cè)定的數(shù)值就可以分析這三種甘油的發(fā)酵效果。3.5克雷伯氏菌發(fā)酵特性的研究3.5.1溫度對(duì)菌體生長(zhǎng)和1,3-PD合成的影響在目前報(bào)道的1,3-PD合成微生物中，Clostridiumpasteurianum的最適發(fā)酵溫度為30℃，Clostridiumbutyricum的為35℃，而的最適生長(zhǎng)和發(fā)酵溫度均介于30℃到37℃之間。因此，設(shè)置28℃-45℃克雷伯氏菌的溫度梯度厭氧發(fā)酵12小時(shí)后檢測(cè)菌體生物量、甘油轉(zhuǎn)化率和1,3-PD產(chǎn)量與生產(chǎn)強(qiáng)度,然后根據(jù)測(cè)定數(shù)值就可以得出克雷伯氏菌發(fā)酵的最佳溫度。3.5.2pH對(duì)菌體生長(zhǎng)和1,3-PD合成的影響微生物生長(zhǎng)過程中機(jī)體內(nèi)發(fā)生的絕大多數(shù)反應(yīng)是酶促反應(yīng)，pH通過影響細(xì)胞質(zhì)膜的透性、物質(zhì)的溶解性等方面影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而影響微生物的生長(zhǎng)和代謝。在甘油厭氧代謝過程中，微生物會(huì)產(chǎn)生一定的乳酸、乙酸、丁酸等副產(chǎn)物使培養(yǎng)基pH降低，利用磷酸鉀緩沖溶液調(diào)節(jié)基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基pH值，40℃發(fā)酵12小時(shí)，考察pH值變化對(duì)菌體生長(zhǎng)與產(chǎn)物的合成的影響，從而確定最佳的發(fā)酵PH。同時(shí)，實(shí)際生產(chǎn)中要不斷地補(bǔ)充緩沖液調(diào)節(jié)體系的PH值，使其保持在最佳的條件下進(jìn)行。3.5.3甘油初始濃度對(duì)菌的生長(zhǎng)和1,3-PD合成的影響甘油作為發(fā)酵法生產(chǎn)1,3-PD的底物是微生物生長(zhǎng)、產(chǎn)物合成和副產(chǎn)物形成等的反應(yīng)物，其初始濃度的大小對(duì)1,3-PD的合成有很大影響。在基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，分別選擇甘油為10g/L、20g/L、30g/L、40g/L和50g/L的濃度梯度，考察甘油濃度對(duì)克雷伯氏菌的生長(zhǎng)和1,3-PD合成的影響。3.5.4氮源對(duì)菌體生長(zhǎng)和1,3-PD合成的影響常見有機(jī)氮源中酵母浸粉最有利于克雷伯氏菌的生長(zhǎng)代謝，而無(wú)機(jī)氮源對(duì)其生長(zhǎng)和發(fā)酵結(jié)果有較大影響。故選擇含氮量分別為0.045mol/l的無(wú)機(jī)氮源研究克雷伯氏菌對(duì)不同氮源的利用情況。在培養(yǎng)基初始pH為8.0，發(fā)酵溫度為40℃，20g/L的甘油下培養(yǎng)12小時(shí)后，菌體生物量和產(chǎn)物1,3-PD的積累。4結(jié)論根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析不同原料對(duì)克雷伯氏菌的生長(zhǎng)和產(chǎn)物的合成影響，得到最佳的合成原料。同時(shí)分析溫度、PH、甘油濃度、氮源對(duì)克雷伯氏菌的生長(zhǎng)和產(chǎn)物的合成影響，確定最佳的生產(chǎn)工藝。參考文獻(xiàn)：[1]饒興鶴.全球丙二醇生產(chǎn)現(xiàn)狀及其需求前景.中國(guó)石油和化工經(jīng)濟(jì)分析,2006,15:52-53[2]陶氏用可再生原料生產(chǎn)丙二醇.中國(guó)工業(yè)生物信息網(wǎng)，每周快報(bào)（第十八期）./info/view/4866.2007[3]ShellChemicalCompany.Acutetoxicity,skinandeyeirritation,andskinsensitizingpotentia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