α-淀粉酶的制備及應(yīng)用

項目二α—淀粉酶的制備及應(yīng)用班級：學(xué)號：姓名：指導(dǎo)老師：淀粉酶屬于水解酶類，是催化淀粉、糖原、糊精中糖苷鍵水解的一類酶的統(tǒng)稱。此類酶廣泛存在于植物和微生物中。根據(jù)對淀粉的作用方式不同，可將淀粉酶分為α—淀粉酶、β—淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、脫支酶。α—淀粉酶是一種內(nèi)切酶，其相對分子量約50000左右作用于淀粉時，可從淀粉分子內(nèi)部隨機(jī)切開α—1，4糖苷鍵，不能切開α—1，6糖苷鍵以及與α—1，6糖苷鍵相連的α—1，4糖苷鍵，但能越過支點(diǎn)切開內(nèi)部的α—1，4糖苷鍵。其水解產(chǎn)物中除含葡萄糖、麥芽糖外還含有具有α—1，6糖苷鍵的極限糊精含α—1，6糖苷鍵的具葡萄糖殘基的低聚糖。α—淀粉酶α—淀粉酶廣泛分布于動物、植物及微生物。微生物的酶幾乎都是分泌性的。此酶以Ca2+為必需因子并作為穩(wěn)定因子，既作用于直鏈淀粉，亦作用于支鏈淀粉，無差別地切斷α—1，4鏈。因此，其特征是引起底物溶液粘度的急劇下降和碘反應(yīng)的消失，最終產(chǎn)物在分解直鏈淀粉時以麥芽糖為主，此外，還有麥芽三糖及少量葡萄糖。另一方面在分解支鏈淀粉時，除麥芽糖、葡萄糖外，還生成分支部分具有α—1，6鍵的α—極限糊精。一般分解限度以葡萄糖為準(zhǔn)是35-50％，但在細(xì)菌的淀粉酶中，亦有呈現(xiàn)高達(dá)70％分解限度的。α—淀粉酶分布α—淀粉酶通常在PH5.5—8.0時穩(wěn)定，在PH4.0以下易失活其作用的最適PH為5.0—6.0，但不同來源的酶其最適PH值差別很大。動物的α—淀粉酶在氮離子存在時其最適作用PH為7.0，高等植物在PH3.6以下時失活，耐酸性的α—淀粉酶最適作用PH為4.0左右，在PH2.5—6.5穩(wěn)定；非耐酸的α—淀粉酶最適PH為6.5左右，在PH5.5—9.5穩(wěn)定。1.PH值對酶活性的影響溫度對酶活性有很大影響，溫度升高，酶的反應(yīng)速度就增加，一般每升高十?dāng)z氏度，反應(yīng)速度可增加2—3倍，但是大多數(shù)酶都是蛋白質(zhì)，溫度過高則可導(dǎo)致蛋白質(zhì)變質(zhì)，從而使酶失活。在一定條件下，在某一溫度時酶的反應(yīng)速度最大。這使得反應(yīng)速度是最適合反應(yīng)溫度。2.溫度對酶活性的影響1.菌種：枯草芽孢桿菌JD—32生產(chǎn)法2.儀器：培養(yǎng)皿、試管、發(fā)酵罐、滅菌鍋、振蕩培養(yǎng)箱、高速冷凍離心機(jī)實驗器材工藝流程1.培養(yǎng)基的制備與滅菌發(fā)酵培養(yǎng)基：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，葡萄糖0.5g，可溶性淀粉2.5g，KH2PO41g，MgSO4.7H2O0.25g，CaCl2.2H2O0.1g,H2O500ml，PH7.0。分裝與100ml錐形瓶中，每瓶50ml，121℃滅菌20min。實驗步驟將菌種接種于培養(yǎng)基斜面，35℃培養(yǎng)三天，然后轉(zhuǎn)接到搖瓶種子培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)一定時間，當(dāng)菌體進(jìn)入對數(shù)生長期時，以0.5％接種量接入固體培養(yǎng)基，在厚層通風(fēng)制曲箱內(nèi)，通風(fēng)保持37—42℃，培養(yǎng)48小時出去風(fēng)干。2.接種與產(chǎn)酶培養(yǎng)麩曲用1％食鹽水3—4倍浸泡，3