大腸桿菌菌濃的測定及發(fā)酵罐實驗的了解

實驗六大腸桿菌菌濃的測定及發(fā)酵罐實驗的了解目的要求學習比濁法測量細菌數(shù)量的方法；學習空氣浴搖床的使用方法；學習分光光度計和離心機的使用方法；掌握菌濃和菌體干重關(guān)系曲線的測定方法；了解通用發(fā)酵罐的基本結(jié)構(gòu)。了解發(fā)酵罐實驗的一般流程及注意事項。微生物生長曲線的測定比濁法干重法菌落計數(shù)法血球計數(shù)板計數(shù)法…菌濃OD600與菌干重的對應關(guān)系將大腸桿菌用LB培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，在快速生長中期取樣，分別用去離子水（新鮮LB培養(yǎng)基）稀釋至不同濃度，分別測定OD600值。同時取10mL菌液，8000rpm離心5min后，棄菌液，并用無菌水重懸洗滌、離心2次，80℃下烘干至恒重后，測得干重。菌濃與OD600的對應關(guān)系如下圖所示。經(jīng)數(shù)據(jù)擬合，線性良好。大腸桿菌菌濃OD600與菌干重的關(guān)系曲線編號樣品濃度（g/L）OD600離心管空重（g）離心管+菌重量（g）實驗材料菌種：

大腸桿菌。（老師提前準備菌種和用于菌體干重測定的菌液）儀器和其它物品：722型分光光度計，空氣浴振蕩搖床，離心機，比色皿，試管，移液器、槍頭、離心管等。上次滅菌的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵菌種火圈…實驗內(nèi)容分配每4人一組每組建立一個菌濃和OD600關(guān)系曲線。分光光度計的實驗空白對照吸光度和透光度吸光度值的適用范圍離心機的使用離心管平衡!離心效果與轉(zhuǎn)速、時間的關(guān)系【實驗內(nèi)容】1.離心管稱重將一干凈15ml離心管，用分析天平準確稱重并記錄。2.菌液離心將老師準備好的大腸桿菌搖瓶，準確吸取菌液10ml加至已稱重的離心管內(nèi)(取液前將培養(yǎng)液振蕩，使細胞均勻分布)。與另一加水的相同離心管進行配平。8000rpm離心5min，棄去上清，加去10ml離子水重懸菌體，離心。再重復上述洗滌操作1次。棄去水溶液，將帶有菌體的離心管在80℃烘干至恒重。準確稱重并記錄。【實驗內(nèi)容】3.菌液稀釋將老師準備好的大腸桿菌搖瓶，吸取一定體積的菌液至試管中，在不同試管中按不同比例進行稀釋。（至少5個水平）4.測定吸光度用未接種的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。最好使其光密度值在0.1~0.7之內(nèi)(測定OD值前，將待測定的樣品液振蕩，使細胞均勻分布)。做一個以去離子水稀釋的對比試驗（以去離子水做空白對照），看肉膏蛋白胨培養(yǎng)基對OD600吸光度的影響。通用發(fā)酵罐的基本結(jié)構(gòu)在你所見到的實驗室發(fā)酵罐上是否找到對應功能的部件？發(fā)酵罐實物圖控制主機罐體通氣系統(tǒng)空壓機、通氣管、流量計…攪拌系統(tǒng)電機、攪拌槳、擋板…控溫系統(tǒng)升溫、降溫傳感器pH、溫度、溶氧、泡沫…補料系統(tǒng)消泡系統(tǒng)取樣口、接種口發(fā)酵實驗的一般操作過程準備菌種（大腸桿菌）準備培養(yǎng)基校準電極（pH、溶氧…）發(fā)酵罐（含培養(yǎng)基）滅菌接種發(fā)酵及取樣分析（~24h）下罐發(fā)酵取樣記錄表格標號發(fā)酵時間(h)取樣體積(ml)稀釋倍數(shù)OD600菌濃

(g/l)實驗報告內(nèi)容OD600與菌體干重的關(guān)系曲線畫出實驗室發(fā)酵罐的示意圖（包括主機、罐體、通氣系統(tǒng)、攪拌系統(tǒng)、控溫系統(tǒng)、傳感器等）思考題除了比濁法，還有其他什么常用