分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用

分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)育種與種質(zhì)鑒定中的應(yīng)用1.1轉(zhuǎn)基因技術(shù)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)展, 轉(zhuǎn)基因生物爭論已成為生命科學(xué)領(lǐng)域的爭論熱點(diǎn)之一。人們期望通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將外源基因?qū)肽承﹦?dòng)植物基因組中,以便到達(dá)改進(jìn)或獲得某些重要性狀( 如生長快、抗逆性強(qiáng)、生產(chǎn)藥用蛋白等)的目標(biāo)。其中轉(zhuǎn)基因動(dòng)物育種爭論進(jìn)展較快, 應(yīng)用前景令人矚目。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)突破了傳統(tǒng)有性雜交的局限性和盲目性, 抑制了物種之間的生殖隔離, 實(shí)現(xiàn)了物種之間遺傳物質(zhì)的交換和重組, 不僅為遺傳物質(zhì)的爭論供給了的手段, 也豐富了物種的基因庫, 并為該技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。自1982 年P(guān)almiter 等獲得轉(zhuǎn)基因小鼠以來,目前人們已獲得了轉(zhuǎn)基因大鼠、兔、綿羊、豬、山羊、牛、魚和雞等轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。近些年來, 轉(zhuǎn)基因育種技術(shù)已廣泛應(yīng)用于培育具有優(yōu)良性狀的轉(zhuǎn)基因水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。目前利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得的水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)植物主要有轉(zhuǎn)基因魚、轉(zhuǎn)基因藻,另外還有轉(zhuǎn)基因蝦、1.1.1轉(zhuǎn)基因魚自1985年朱作言等在世界上首次報(bào)道在魚類中進(jìn)展轉(zhuǎn)基因爭論以來,世界上已有很多試驗(yàn)室相繼開展了這一領(lǐng)域的工作。其中常用于魚類基因轉(zhuǎn)移的基由于生長激素基因,用于轉(zhuǎn)基因的魚有金魚、虹鱒等幾十種魚。人們期望用魚類和哺乳動(dòng)物的生長激素基因向魚類轉(zhuǎn)移以期獲得有有用價(jià)值的個(gè)體大、生長快速的超級(jí)魚。目前已有不少試驗(yàn)室獲得了多種能快速生長的轉(zhuǎn)生長激素基因魚,如Du 等1992 年將生長激素基因轉(zhuǎn)移入大西洋鮭,獲得的轉(zhuǎn)基因個(gè)體的重量比對(duì)照組平均大3.8倍, 生長速度比比照組快4~6 倍。除生長激素基因外, 抗凍蛋白基因也是魚類基因轉(zhuǎn)移中常用目的基因之一。如于建康等1994年通過精子載體,成功地將抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入金魚,獲得26%的轉(zhuǎn)化率。Tasi 等1995 年使用電激法將外源抗寒和生長激素基因?qū)肽圉q精子再與卵進(jìn)展受精, 從而提高了基因轉(zhuǎn)移的效率。另外,金屬硫蛋白基因、溶菌酶基因、干擾素基因和球蛋白基因等與魚類抗病抗逆性有關(guān)的基因也是目前轉(zhuǎn)基因魚爭論中常選用的靶基因。1.1.2轉(zhuǎn)基因藻藻類是光合自養(yǎng)的低等植物,分布格外廣泛,是海洋生態(tài)系和人工養(yǎng)殖生態(tài)系的能量和物質(zhì)根底,同時(shí)也是海洋藥物、功能食品和精細(xì)化工產(chǎn)品的重要原料。海洋科學(xué)/2023 年/第24卷/第3期32目前組織培育、原生質(zhì)體融合等傳統(tǒng)生物技術(shù)已廣泛應(yīng)用于藻類爭論, 但應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)有目的地利用和定向改造藻類生物體系的研究則是近些年才得以開展。近幾年來, 從分子水平爭論藻類個(gè)體發(fā)育與系統(tǒng)發(fā)育遺傳機(jī)制的藻類分子遺傳學(xué)爭論發(fā)展較為快速, 并在此根底上, 應(yīng)用重組DNA 技術(shù)人工構(gòu)建藻類品種以及實(shí)現(xiàn)藻類自然產(chǎn)物的基因工程生產(chǎn)的藻類基因工程爭論也取得重要進(jìn)展。近些年來,我國學(xué)者圍繞構(gòu)建藻類反應(yīng)器表達(dá)生產(chǎn)蛋白和藥物的目標(biāo), 開展了較有特色的藻類基因、載體和表達(dá)系統(tǒng)的爭論, 并在轉(zhuǎn)基因海帶、魚腥藻基因工程以及紫。菜基因工程等藻類基因工程領(lǐng)域取得較大進(jìn)展[1,2目前用于藻類基因工程的目的基因主要有desA,acc1,apcAB,金屬硫蛋白基因和超氧化物歧化酶基因等,用于基因轉(zhuǎn)移的藻類表達(dá)系統(tǒng)主要有藍(lán)藻、螺旋海帶、裙帶菜、紫菜和江蘺等藻類。1.2RFLP 技術(shù)限制性酶切片段長度多態(tài)性(RFLP) 指的是用限制性內(nèi)切酶切割不同個(gè)體基因組DNA 后, 含同源序列的酶切片段在長度上的差異。這種差異可以在電泳圖譜上篩選并顯示出來, 并按孟德爾遺傳定律分別。目前,RFLP 技術(shù)已與PCR 等技術(shù)聯(lián)用, 進(jìn)展已相當(dāng)成熟, 在一些經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物多基因數(shù)量性狀的基因定位等方面的爭論與應(yīng)用已取得重要進(jìn)展, 但在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)則剛起步。如有人將虹鱒線粒體DNA 的RFLP標(biāo)記用于遺傳分析,為種質(zhì)鑒定和遺傳育種供給依據(jù)。1.3RAPD 技術(shù)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD) 技術(shù)是在PCR 技術(shù)根底上進(jìn)展起來的一項(xiàng)DNA 多態(tài)性檢測技術(shù), 其根本原理是利用一系列不同的堿基順序隨機(jī)排列的寡聚核苷酸單鏈( 常為十聚體) 為引物, 對(duì)所爭論的DNA 模板基因組進(jìn)展PCR 擴(kuò)增, 通過對(duì)PCR 產(chǎn)物的檢測即可對(duì)基因組DNA 的多態(tài)性進(jìn)展檢測。RAPD 技術(shù)可以在對(duì)物種沒有任何分子生物學(xué)研究背景的狀況下, 對(duì)其DNA 進(jìn)展多態(tài)性分析。而且與RFLP、DNA 指紋圖譜法等其他DNA 多態(tài)性檢測技術(shù)相比,RAPD 技術(shù)具有檢測效率高、樣品用量少、靈敏度高等特點(diǎn), 因此廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物和畜禽品種及品系的鑒定、物種親緣關(guān)系確實(shí)定、基因定位和分別以及構(gòu)建基因圖譜等方面的爭論。目前RAPD 技術(shù)也已用于水產(chǎn)品群體遺傳差異分析,如用于高首鱘(AcipensertransmontanusRichardson) 減數(shù)分裂雌核發(fā)育和多倍體的快速鑒定、對(duì)草魚和鯉魚的群體遺傳變異進(jìn)展?fàn)幷?、?duì)甲殼動(dòng)物遺傳差異進(jìn)行分析和對(duì)銀鯽復(fù)合種外源遺傳物質(zhì)整入進(jìn)展RAPD 檢測[3~5,7]。1.4DNA 指紋技術(shù)DNA 指紋技術(shù)是分子生物學(xué)興技術(shù)之一。其根本依據(jù)是存在于基因組內(nèi)的高度變異的重復(fù)序列微衛(wèi)星DNA 可與眾多的基因組酶切片段進(jìn)行雜交,得到具有個(gè)體特異性的指紋圖譜。這種DNA 指紋圖譜具有高度種屬和個(gè)體特異性, 可以用于查找遺傳標(biāo)記, 進(jìn)展遺傳連鎖分析; 也可用于測定物種之間的遺傳距離以及品種遺傳純度。因此可利用該技術(shù)測定物種的遺傳距離, 然后選用適宜的親本進(jìn)展雜交, 以便提高雜種優(yōu)勢, 獲得產(chǎn)量高、生長快速的品種。據(jù)Herbinger 等1995 年、Carter 等1991 年、Gross 等1994年報(bào)道, 目前DNA 指紋技術(shù)已應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中, 如用于分析虹鱒的父本和母本對(duì)子代生長存活的影響、對(duì)雌核生殖羅非魚和小口黑鱸的不同群體進(jìn)展鑒2分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測中的應(yīng)用目前, 我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)尤其是蝦類、貝類和魚類養(yǎng)殖業(yè)受到病原微生物的嚴(yán)峻影響, 因此如何快速準(zhǔn)確預(yù)報(bào)和診斷水產(chǎn)動(dòng)植物疾病, 就成為當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)格外重要而突出的問題。進(jìn)些年來, 分子生物學(xué)技術(shù)的快速進(jìn)展, 已經(jīng)有可能為水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體的檢測提供快速有效而且特異性強(qiáng)靈敏度高的技術(shù)手段[6]。2.1單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)是Kohler 和Milstein 于1975 年進(jìn)展起來的利用雜交瘤細(xì)胞制備大量針對(duì)某一抗原打算簇的特異性抗體的技術(shù)。單克隆抗體與常規(guī)血清抗體相比,特異性強(qiáng),能識(shí)別單一抗原打算簇,且簡潔制備, 能通過保持細(xì)胞系重復(fù)獲得一樣抗體, 因而在水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測中得到廣泛應(yīng)用。如應(yīng)用于診斷海灣扇貝(Argopectenirradians)的鰓立克次體、診斷與魚類及牡蠣相結(jié)合的淋巴細(xì)胞病毒、檢測菲律賓蛤仔REVIEWS海洋科學(xué)/2023 年/第24卷/第3期32目前組織培育、原生質(zhì)體融合等傳統(tǒng)生物技術(shù)已廣泛應(yīng)用于藻類爭論, 但應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)有目的地利用和定向改造藻類生物體系的研究則是近些年才得以開展。近幾年來, 從分子水平爭論藻類個(gè)體發(fā)育與系統(tǒng)發(fā)育遺傳機(jī)制的藻類分子遺傳學(xué)爭論發(fā)展較為快速, 并在此根底上, 應(yīng)用重組DNA 技術(shù)人工構(gòu)建藻類品種以及實(shí)現(xiàn)藻類自然產(chǎn)物的基因工程生產(chǎn)的藻類基因工程爭論也取得重要進(jìn)展。近些年來,我國學(xué)者圍繞構(gòu)建藻類反應(yīng)器表達(dá)生產(chǎn)蛋白和藥物的目標(biāo), 開展了較有特色的藻類基因、載體和表達(dá)系統(tǒng)的爭論, 并在轉(zhuǎn)基因海帶、魚腥藻基因工程以及紫。菜基因工程等藻類基因工程領(lǐng)域取得較大進(jìn)展[1,2目前用于藻類基因工程的目的基因主要有desA,acc1,apcAB,金屬硫蛋白基因和超氧化物歧化酶基因等,用于基因轉(zhuǎn)移的藻類表達(dá)系統(tǒng)主要有藍(lán)藻、螺旋海帶、裙帶菜、紫菜和江蘺等藻類。1.2RFLP 技術(shù)限制性酶切片段長度多態(tài)性(RFLP) 指的是用限制性內(nèi)切酶切割不同個(gè)體基因組DNA 后, 含同源序列的酶切片段在長度上的差異。這種差異可以在電泳圖譜上篩選并顯示出來, 并按孟德爾遺傳定律分別。目前,RFLP 技術(shù)已與PCR 等技術(shù)聯(lián)用, 進(jìn)展已相當(dāng)成熟, 在一些經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物多基因數(shù)量性狀的基因定位等方面的爭論與應(yīng)用已取得重要進(jìn)展, 但在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)則剛起步。如有人將虹鱒線粒體DNA 的RFLP標(biāo)記用于遺傳分析,為種質(zhì)鑒定和遺傳育種供給依據(jù)。1.3RAPD 技術(shù)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD) 技術(shù)是在PCR 技術(shù)根底上進(jìn)展起來的一項(xiàng)DNA 多態(tài)性檢測技術(shù), 其根本原理是利用一系列不同的堿基順序隨機(jī)排列的寡聚核苷酸單鏈( 常為十聚體) 為引物, 對(duì)所爭論的DNA 模板基因組進(jìn)展PCR 擴(kuò)增, 通過對(duì)PCR 產(chǎn)物的檢測即可對(duì)基因組DNA 的多態(tài)性進(jìn)展檢測。RAPD 技術(shù)可以在對(duì)物種沒有任何分子生物學(xué)研究背景的狀況下, 對(duì)其DNA 進(jìn)展多態(tài)性分析。而且與RFLP、DNA 指紋圖譜法等其他DNA 多態(tài)性檢測技術(shù)相比,RAPD 技術(shù)具有檢測效率高、樣品用量少、靈敏度高等特點(diǎn), 因此廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物和畜禽品種及品系的鑒定、物種親緣關(guān)系確實(shí)定、基因定位和分別以及構(gòu)建基因圖譜等方面的爭論。目前RAPD 技術(shù)也已用于水產(chǎn)品群體遺傳差異分析,如用于高首鱘(AcipensertransmontanusRichardson) 減數(shù)分裂雌核發(fā)育和多倍體的快速鑒定、對(duì)草魚和鯉魚的群體遺傳變異進(jìn)展?fàn)幷?、?duì)甲殼動(dòng)物遺傳差異進(jìn)行分析和對(duì)銀鯽復(fù)合種外源遺傳物質(zhì)整入進(jìn)展RAPD 檢測[3~5,7]。1.4DNA 指紋技術(shù)DNA 指紋技術(shù)是分子生物學(xué)興技術(shù)之一。其根本依據(jù)是存在于基因組內(nèi)的高度變異的重復(fù)序列微衛(wèi)星DNA 可與眾多的基因組酶切片段進(jìn)行雜交,得到具有個(gè)體特異性的指紋圖譜。這種DNA 指紋圖譜具有高度種屬和個(gè)體特異性, 可以用于查找遺傳標(biāo)記, 進(jìn)展遺傳連鎖分析; 也可用于測定物種之間的遺傳距離以及品種遺傳純度。因此可利用該技術(shù)測定物種的遺傳距離, 然后選用適宜的親本進(jìn)展雜交, 以便提高雜種優(yōu)勢, 獲得產(chǎn)量高、生長快速的品種。據(jù)Herbinger 等1995 年、Carter 等1991 年、Gross 等1994年報(bào)道, 目前DNA 指紋技術(shù)已應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中, 如用于分析虹鱒的父本和母本對(duì)子代生長存活的影響、對(duì)雌核生殖羅非魚和小口黑鱸的不同群體進(jìn)展鑒2分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測中的應(yīng)用目前,我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)尤其是蝦類、貝類和魚類養(yǎng)殖業(yè)受到病原微生物的嚴(yán)峻影響,因此如何快速準(zhǔn)確預(yù)報(bào)和診斷水產(chǎn)動(dòng)植物疾病,就成為當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)格外重要而突出的問題。進(jìn)些年來,分子生物學(xué)技術(shù)的快速進(jìn)展,已經(jīng)有可能為水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體的檢測提供快速有效而且特異性強(qiáng)靈敏度高的技術(shù)手段[6]。2.1單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)是Kohler 和Milstein 于1975 年進(jìn)展起來的利用雜交瘤細(xì)胞制備大量針對(duì)某一抗原打算簇的特異性抗體的技術(shù)。單克隆抗體與常規(guī)血清抗體相比,特異性強(qiáng),能識(shí)別單一抗原打算簇,且簡潔制備, 能通過保持細(xì)胞系重復(fù)獲得一樣抗體, 因而在水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測中得到廣泛應(yīng)用。如應(yīng)用于診斷海灣扇貝(Argopectenirradians)的鰓立克次體、診斷與魚類及牡蠣相結(jié)合的淋巴細(xì)胞病毒、檢測菲律賓蛤仔REVIEWS海洋科學(xué)/2023 年/第24卷/第3期32目前組織培育、原生質(zhì)體融合等傳統(tǒng)生物技術(shù)已廣泛應(yīng)用于藻類爭論, 但應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)有目的地利用和定向改造藻類生物體系的研究則是近些年才得以開展。近幾年來, 從分子水平爭論藻類個(gè)體發(fā)育與系統(tǒng)發(fā)育遺傳機(jī)制的藻類分子遺傳學(xué)爭論發(fā)展較為快速, 并在此根底上, 應(yīng)用重組DNA 技術(shù)人工構(gòu)建藻類品種以及實(shí)現(xiàn)藻類自然產(chǎn)物的基因工程生產(chǎn)的藻類基因工程爭論也取得重要進(jìn)展。近些年來,我國學(xué)者圍繞構(gòu)建藻類反應(yīng)器表達(dá)生產(chǎn)蛋白和藥物的目標(biāo), 開展了較有特色的藻類基因、載體和表達(dá)系統(tǒng)的爭論, 并在轉(zhuǎn)基因海帶、魚腥藻基因工程以及紫。菜基因工程等藻類基因工程領(lǐng)域取得較大進(jìn)展[1,2目前用于藻類基因工程的目的基因主要有desA,acc1,apcAB,金屬硫蛋白基因和超氧化物歧化酶基因等,用于基因轉(zhuǎn)移的藻類表達(dá)系統(tǒng)主要有藍(lán)藻、螺旋海帶、裙帶菜、紫菜和江蘺等藻類。1.2RFLP 技術(shù)限制性酶切片段長度多態(tài)性(RFLP) 指的是用限制性內(nèi)切酶切割不同個(gè)體基因組DNA 后, 含同源序列的酶切片段在長度上的差異。這種差異可以在電泳圖譜上篩選并顯示出來, 并按孟德爾遺傳定律分別。目前,RFLP 技術(shù)已與PCR 等技術(shù)聯(lián)用, 進(jìn)展已相當(dāng)成熟, 在一些經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物多基因數(shù)量性狀的基因定位等方面的爭論與應(yīng)用已取得重要進(jìn)展, 但在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)則剛起步。如有人將虹鱒線粒體DNA 的RFLP標(biāo)記用于遺傳分析,為種質(zhì)鑒定和遺傳育種供給依據(jù)。1.3RAPD 技術(shù)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD) 技術(shù)是在PCR 技術(shù)根底上進(jìn)展起來的一項(xiàng)DNA 多態(tài)性檢測技術(shù), 其根本原理是利用一系列不同的堿基順序隨機(jī)排列的寡聚核苷酸單鏈( 常為十聚體) 為引物, 對(duì)所爭論的DNA 模板基因組進(jìn)展PCR 擴(kuò)增, 通過對(duì)PCR 產(chǎn)物的檢測即可對(duì)基因組DNA 的多態(tài)性進(jìn)展檢測。RAPD 技術(shù)可以在對(duì)物種沒有任何分子生物學(xué)研究背景的狀況下, 對(duì)其DNA 進(jìn)展多態(tài)性分析。而且與RFLP、DNA 指紋圖譜法等其他DNA 多態(tài)性檢測技術(shù)相比,RAPD 技術(shù)具有檢測效率高、樣品用量少、靈敏度高等特點(diǎn), 因此廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物和畜禽品種及品系的鑒定、物種親緣關(guān)系確實(shí)定、基因定位和分別以及構(gòu)建基因圖譜等方面的爭論。目前RAPD 技術(shù)也已用于水產(chǎn)品群體遺傳差異分析,如用于高首鱘(AcipensertransmontanusRichardson) 減數(shù)分裂雌核發(fā)育和多倍體的快速鑒定、對(duì)草魚和鯉魚的群體遺傳變異進(jìn)展?fàn)幷?、?duì)甲殼動(dòng)物遺傳差異進(jìn)行分析和對(duì)銀鯽復(fù)合種外源遺傳物質(zhì)整入進(jìn)展RAPD 檢測[3~5,7]。1.4DNA 指紋技術(shù)DNA 指紋技術(shù)是分子生物學(xué)興技術(shù)之一。其根本依據(jù)是存在于基因組內(nèi)的高度變異的重復(fù)序列微衛(wèi)星DNA 可與眾多的基因組酶切片段進(jìn)行雜交,得到具有個(gè)體特異性的指紋圖譜。這種DNA 指紋圖譜具有高度種屬和個(gè)體特異性, 可以用于查找遺傳標(biāo)記, 進(jìn)展遺傳連鎖分析; 也可用于測定物種之間的遺傳距離以及品種遺傳純度。因此可利用該技術(shù)測定物種的遺傳距離, 然后選用適宜的親本進(jìn)展雜交, 以便提高雜種優(yōu)勢, 獲得產(chǎn)量高、生長快速的品種。據(jù)Herbinger 等1995 年、Carter 等1991 年、Gross 等1994年報(bào)道, 目前DNA 指紋技術(shù)已應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中, 如用于分析虹鱒的父本和母本對(duì)子代生長存活的影響、對(duì)雌核生殖羅非魚和小口黑鱸的不同群體進(jìn)展鑒2分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測中的應(yīng)用目前, 我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)尤其是蝦類、貝類和魚類養(yǎng)殖業(yè)受到病原微生物的嚴(yán)峻影響, 因此如何快速準(zhǔn)確預(yù)報(bào)和診斷水產(chǎn)動(dòng)植物疾病, 就成為當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)格外重要而突出的問題。進(jìn)些年來, 分子生物學(xué)技術(shù)的快速進(jìn)展, 已經(jīng)有可能為水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體的檢測提供快速有效而且特異性強(qiáng)靈敏度高的技術(shù)手段[6]。2.1單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)是Kohler 和Milstein 于1975 年進(jìn)展起來的利用雜交瘤細(xì)胞制備大量針對(duì)某一抗原打算簇的特異性抗體的技術(shù)。單克隆抗體與常規(guī)血清抗體相比,特異性強(qiáng),能識(shí)別單一抗原打算簇,且簡潔制備, 能通過保持細(xì)胞系重復(fù)獲得一樣抗體, 因而在水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測中得到廣泛應(yīng)用。如應(yīng)用于診斷海灣扇貝(Argopectenirradians)的鰓立克次體、診斷與魚類及牡蠣相結(jié)合的淋巴細(xì)胞病毒、檢測菲律賓蛤仔REVIEWSMarineSciences/Vol.24,No.3/202333棕環(huán)病病因弧菌P1。另外, 近年來已有人利用此技術(shù)制備了抗鰻弧菌的單克隆抗體和抗嗜水單胞菌外毒素的單克隆抗體。據(jù)陳瓊等1996 年報(bào)道,利用該技術(shù)制備的單克隆抗體可用于提純嗜水氣單胞菌hec 毒素。2.2酶聯(lián)免疫吸附檢測酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA) 是將抗原或抗體吸附在固相載體外表, 使抗原抗體反響在固相載體外表進(jìn)行的一種檢測技術(shù)。該技術(shù)將抗原抗體反響的特異性與酶對(duì)底物的高效催化作用有機(jī)地結(jié)合起來, 通過酶作用于底物后呈現(xiàn)的顏色變化來顯示抗原抗體特異反響的存在,因此特異性強(qiáng),靈敏度高,反響快速,結(jié)果可以定量, 也可對(duì)抗原、抗體以及抗原抗體復(fù)合物進(jìn)展定位分析。目前ELISA法在水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體診斷尤其在魚病學(xué)診斷上應(yīng)用較廣。國內(nèi)如錢冬等1993年用該法檢測細(xì)菌性敗血癥病原嗜水氣單胞菌,陳懷青等1993 年應(yīng)用DotELISA 法檢測魚類致病性嗜水氣單胞菌hec 毒素,黃等1995 年利用單克隆抗體酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測對(duì)蝦皮下造血組織壞死病病毒,李煥榮等1997 年應(yīng)用DotELISA 法快速檢測嗜水氣單胞菌的致病因子胞外蛋白酶AhECPase54, 均取得較為滿意的效果。國外則較早用ELISA 法對(duì)癤瘡病、紅嘴病、細(xì)菌性腎臟病和愛德華氏菌病等魚類疾病進(jìn)行快速診斷。另外,Noel 棕環(huán)病的弧菌P1。2.3核酸雜交技術(shù)

用該法鑒定導(dǎo)致菲律賓蛤仔患核酸雜交技術(shù)是利用特定標(biāo)記的DNA 或RNA 探針和病原體生物中的與探針互補(bǔ)的靶核苷酸序列進(jìn)展雜交, 以此來確定宿主是否攜帶有病原體的一類分子生物學(xué)技術(shù),可分為Southern 雜交、Northern 雜交和核酸原位雜交。該技術(shù)以其靈敏度高、特異性強(qiáng)和檢驗(yàn)快速等優(yōu)點(diǎn), 近年來在對(duì)蝦病毒等水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測中倍受青睞。如Futo 等、Hiney 等1992 年將此技術(shù)用來診斷細(xì)菌性魚病,Comps 等1996 年應(yīng)用地高辛標(biāo)記的RNA 探針檢測FEV 病毒在海洋魚類中的表達(dá),Bruce 等1994 年利用地高辛標(biāo)記的DNA 探針檢測對(duì)蝦桿狀病毒。日本也有人利用地高辛標(biāo)記的DNA探針進(jìn)展菌落雜交用于鰻弧菌的鑒定; 利用經(jīng)PCR合成的探針與神經(jīng)壞死病病毒DNA 進(jìn)展雜交選擇親魚, 可有效防止病毒性神經(jīng)壞死癥(VNN) 的垂直感染。我國的研究人員針對(duì)1993 年以來導(dǎo)致我國養(yǎng)殖對(duì)蝦大規(guī)模死亡的病原皮下及造血組織壞死桿狀病毒(HHNBV) 已研制出相應(yīng)的核酸探針, 用于檢測受該病毒感染的對(duì)蝦。2.4PCR 技術(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒错?PCR) 是體外酶促合成快速擴(kuò)增特異DNA 片段的一種方法。這項(xiàng)分子生物學(xué)技術(shù)產(chǎn)生雖僅數(shù)年, 卻以驚人的速度廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域。目前PCR 技術(shù)已用于水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測的實(shí)際操作,如Chang 等1993 年利用PCR 技術(shù)首次成功地進(jìn)展對(duì)蝦病毒的擴(kuò)增,Wang 等1996 年用PCR 方法檢測對(duì)蝦桿狀病毒, 并獲得了估量的擴(kuò)增產(chǎn)物。另外, 也有人應(yīng)用PCR 技術(shù)檢測貝類腸道病毒以及水或水生生物體內(nèi)富集的病毒和細(xì)菌。除應(yīng)用于病原體檢測外,PCR 技術(shù)還與其他分子生物學(xué)技術(shù)聯(lián)用, 廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)其他諸多領(lǐng)域。如應(yīng)用于魚類生長激素基因、各種cDNA 分子的克隆; 應(yīng)用于檢測外源基因是否整合入轉(zhuǎn)基因魚基因組中; 應(yīng)用于制作多基因家族基因組探針以及魚類種群構(gòu)造的遺傳分析和種質(zhì)遺傳鑒定等。2.5細(xì)胞培育動(dòng)物細(xì)胞培育技術(shù)曾是一門自成體系的現(xiàn)代生物技術(shù)。近年來隨著已建成的數(shù)千種動(dòng)物細(xì)胞系( 株)被廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)爭論, 細(xì)胞培育技術(shù)已納入分子生物學(xué)技術(shù)體系。水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)胞培育的爭論, 最早起始于魚類, 如Wolf 等1962 年首次建立了虹鱒生殖腺RTG2 細(xì)胞系。同時(shí)也以魚類細(xì)胞培育爭論開展得較為系統(tǒng), 已建立的魚類細(xì)胞系也較多。其中我國已建立的局部魚類細(xì)胞系如張念慈等1981 年建立的草魚吻端組織二倍體ZC7901 細(xì)胞系,陳敏容等1985 年建立的鯽魚異倍體細(xì)胞系CAB80, 左文功等1986 年建立的草魚腎組織CIK 細(xì)胞系,童裳亮等1989 年建立的虹鱒巨噬細(xì)胞系。與魚類相比,貝類、蝦類等水產(chǎn)動(dòng)物的細(xì)胞培育爭論國內(nèi)外報(bào)道較少,如Hanson 等1976 年建立了淡水蝸牛胚胎細(xì)胞系, 徐亞立等最近建立了斑節(jié)對(duì)蝦PMO 細(xì)胞系。目前, 動(dòng)物細(xì)胞培育技術(shù)已應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物病原體檢測,如Lu 等1995 年應(yīng)用對(duì)蝦淋巴器官原代培育細(xì)胞檢測對(duì)蝦黃頭桿狀病毒(YBV) 。另外,水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)胞培育技術(shù)也可用于篩選抗癌藥物、培育品種以REVIEWS海洋科學(xué)/2023 年/第24卷/第3期34及生產(chǎn)疫苗和藥物。3分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治中的應(yīng)用魚、蝦、貝疾病嚴(yán)峻威逼著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的進(jìn)展。目前, 人們用來應(yīng)付細(xì)菌性疾病的主要手段仍舊是使用抗生素,但細(xì)菌適應(yīng)性很強(qiáng),較易產(chǎn)生抗藥性,而且抗生素對(duì)病毒性疾病無能為力。因此除了要加強(qiáng)病原體檢測之外, 更重要的是要培育抗病抗逆性強(qiáng)的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種以及開發(fā)的疾病防治技術(shù)。近些年來的實(shí)踐說明, 分子生物學(xué)技術(shù)在這些應(yīng)用領(lǐng)域大有潛力可挖, 如利用重組DNA 技術(shù)導(dǎo)入抗病抗逆性基因以獲得抗病抗逆性強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因水產(chǎn)動(dòng)植物, 另外也可將基因工程疫苗和反義技術(shù)應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治。3.1基