細(xì)胞周期分析重要知識

細(xì)胞周期分析重要知識細(xì)胞周期分析重要知識12/12細(xì)胞周期分析重要知識細(xì)胞周期生物學(xué)基礎(chǔ)細(xì)胞的生成依靠于細(xì)胞的分裂而產(chǎn)生兩個子代細(xì)胞的過程。在分裂過程最須要復(fù)制并傳遞給子代細(xì)胞的是細(xì)胞核，因為它包含了細(xì)胞的遺傳信息載體-DNA。在絕大多數(shù)狀況下，一個生物體的每個細(xì)胞都含有相等的DNA物質(zhì)和相同成份的染色體。因此，細(xì)胞在分裂前必需復(fù)制DNA這樣它的子代細(xì)胞就能夠擁有及父代相同的DNA含量。細(xì)胞由DNA含量增加至分裂，再由它的子代接著復(fù)制并分裂，這個過程稱之為細(xì)胞周期。在細(xì)胞周期中最具特征性的階段是在分裂前的DNA含量增加并達(dá)到2倍量的時候，并在此時細(xì)胞開始分裂其自身-有絲分裂期。細(xì)胞周期中這兩個循環(huán)步驟通常以一字母來表示：S期（合成期）和M期（有絲分裂期）。當(dāng)細(xì)胞周期中的S期和M期被定義后，我們可視察到在有絲分裂完成后和DNA合成剛開始之時有短暫的停頓或間隙，同樣的停頓或間隙存在于DNA合成期后和有絲分裂開始之時。這兩個間隙我們將之命名為G1和G2期。這樣整個細(xì)胞周期可劃分為G1→S→G2→M→G1，如下圖所示：圖1顯示了細(xì)胞周期中個環(huán)節(jié)在流式細(xì)胞儀上分析時的圖譜特征當(dāng)細(xì)胞沒有進(jìn)入分裂過程時（我們機體中的絕大部分細(xì)胞），它們處于細(xì)胞周期的G1期的位置上。因此G1細(xì)胞在數(shù)量上肯定是居各期細(xì)胞之首并在流式圖譜上形成最高的信號峰。在G1期細(xì)胞中有一群細(xì)胞特殊寧靜并且沒有進(jìn)入細(xì)胞循環(huán)的任何生物學(xué)特征，我們稱這些細(xì)胞為G0期細(xì)胞。一些發(fā)生在G1和G2期細(xì)胞內(nèi)的生物過程現(xiàn)還不完全明白。處于G1期的細(xì)胞已開始為分裂前的DNA的復(fù)制和細(xì)胞成長打算很多RNA和蛋白分子。處于G2期的細(xì)胞則會修復(fù)在DNA復(fù)制過程發(fā)生的錯誤并識別出在M期時將DNA平均等分的切割位置。細(xì)胞循環(huán)中這些階段的長度因細(xì)胞種類的不同而不同。典型細(xì)胞循環(huán)中各期的發(fā)展時間為：G1期12小時，S期6小時，G2期4小時及M期0.5小時。分析和流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期分析流式細(xì)胞最初的應(yīng)用之一便是檢測細(xì)胞的DNA含量，它可快速將細(xì)胞循環(huán)中的其它階段及有絲分裂期區(qū)分開來。這些檢測是基于對細(xì)胞內(nèi)DNA以化學(xué)定量方式的染色（染料著色數(shù)量直接及細(xì)胞內(nèi)DNA含量相關(guān)）。有相當(dāng)多的對DNA有高親合力的染料可用于此應(yīng)用。而不同的染料及DNA分子結(jié)合的位點不同?，F(xiàn)用得最多的兩種DNA結(jié)合染料是藍(lán)光激發(fā)的碘化匹啶（PI）（或間或也有用EB）和紫外激發(fā)的DAPI和Hoechst染料33342和33258。PI染料是一種插入性的及雙鏈DNA和RNA（當(dāng)要特異地檢測DNA時，常常運用RNAse去除RNA）結(jié)合，而DAPI和Hoechst染料僅及DNA的螺旋結(jié)構(gòu)的亞級凹槽結(jié)合并及RNA完全沒有任何結(jié)合。Hoechst33342是現(xiàn)唯一令人滿足的能對活細(xì)胞DNA時行染色的染料。其他一些染料在染色前須要破壞細(xì)胞膜，故常常運用去污劑或低滲溶液處理或溶劑進(jìn)行固定（酒精）。*留意：運用溶劑進(jìn)行固定（如酒精）常常會引起細(xì)胞聚集，詳情見分析細(xì)胞聚集。當(dāng)運用DNA結(jié)合熒光染料后，可視察到一個有特征的圖譜，那就是由各種細(xì)胞組成的一個細(xì)胞周期分布圖。當(dāng)二倍體細(xì)胞被化學(xué)定量式DNA染料著色后并在流式細(xì)胞儀上分析，會視察到一個很“窄”熒光峰。它將出現(xiàn)在以熒光強度為X軸,細(xì)胞數(shù)量為Y軸的坐標(biāo)上。因為種種緣由G1期細(xì)胞具有相同的DNA含量，理論上G1期細(xì)胞的DNA含量熒光強度應(yīng)當(dāng)一樣，并在直方圖上的一個通道上出現(xiàn)信號（如圖2.2A中，在直方圖上出現(xiàn)一條G1期細(xì)胞的熒光直線）。圖2.2分別顯示了一個志向狀態(tài)中一臺完備的流式細(xì)胞儀無偏差檢測的直方圖（A）和實際分析得到的呈高斯分布的直方圖（B）。在B圖中，運用Dean和Jett多項式S期分析模型進(jìn)行分析識別出的G1,G2和S期細(xì)胞分布。假如流式細(xì)胞儀非常完備且DNA染料的特異性肯定專一，這種狀況將會發(fā)生。而在實際中，流式細(xì)胞儀本身存在著很多變異性，此外DNA染料的著色也存在生物學(xué)的變異。因此，檢測得出的G1期細(xì)胞的熒光分布正常的是呈高斯曲線分布。這種“鐘”型分布及檢測的變異相關(guān)（圖2.2B）。檢測中的變異越大，高斯曲線的寬度越寬。有一個名為“變異系數(shù)”（CV）的指標(biāo)用于描述峰的寬度。CV是一種規(guī)格化的標(biāo)準(zhǔn)差，定義為CV=100*標(biāo)準(zhǔn)差/平均值。相類似，G2和M期細(xì)胞它們擁有兩部的正常G1期細(xì)胞的DNA含量，從而在直方圖上形成一個兩倍于G1信號峰D.I.2.0的高斯峰（見圖2.2）。事實上，G2/G1的比值常小于2.0，可能是因為G2期細(xì)胞的DNA-蛋白（染色質(zhì)）聚集得更緊密或更濃縮。從而DNA染料著色時及DNA位點的結(jié)合實力被減弱。最常見的G2/G1的比值是1.97。在理論上的完備流式細(xì)胞儀上檢測時，S期細(xì)胞將分布自全部G1期細(xì)胞直方圖右側(cè)并一至延長到全部G2期細(xì)胞直方圖的左側(cè)。因為細(xì)胞一旦開始進(jìn)入S期便會開始合成DNA，并緊帖著G1期細(xì)胞開始向外延長。而后DNA含量不斷增加直至完成S期階段進(jìn)入G2期。不幸的是，實際中的直方圖分布并不是如此簡單，這是因為G1,G2期的DNA峰分布并直線，而是有寬度的高斯分布，而S期分布則更寬。所形成的結(jié)果是早期S期細(xì)胞及G1期細(xì)胞相互疊加，而后期S期細(xì)胞及G2期細(xì)胞相互疊加。區(qū)分這些疊加細(xì)胞而計算出正確的G1,S和G2期細(xì)胞是以下章節(jié)探討的內(nèi)容。二倍及異倍體細(xì)胞的DNA含量正如前面介紹的那樣，機體全部的G1期細(xì)胞，極少例外，都具有相同的DNA含量和染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。在哺乳動物中，每個染色體具有兩條構(gòu)成。這在細(xì)胞遺傳學(xué)者認(rèn)為是具有“雙重DNA含量”（依據(jù)實際視察到的染色體數(shù)量）的細(xì)胞，并且定義了“2N”來描述它們（N是指單個染色數(shù)量，單倍染色體的DNA含量）。而流式細(xì)胞儀通常也有相關(guān)的術(shù)語來描述：“DNA指數(shù)（D.I.）1.0”具有其他DNA含量的細(xì)胞并意味著肯定是屬于異樣，如以上介紹的S期和G2細(xì)胞和僅有單倍染色體生殖細(xì)胞，及一些在體內(nèi)具有四倍DNA含量（D.I.2.0）的細(xì)胞（其他例外狀況，如存在少數(shù)多核細(xì)胞）。全部這些細(xì)胞的DNA都具有“整倍”關(guān)系，它們之間的差別都是以完整的染色體組為單位的，而這些染色體組中的各染色體都擁有其自身的完整性。任何DNA含量異樣的細(xì)胞其染色體組首先發(fā)生的異變或致少染色體的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，這們將這些細(xì)胞稱為“異倍”DNA含量（針對于整倍體之言）。因為整個細(xì)胞或細(xì)胞核DNA流式細(xì)胞儀無法準(zhǔn)確檢測出染色體數(shù)量，流式細(xì)胞儀無法確定哪些是DNA指數(shù)為1.0的正常細(xì)胞，所以要運用已知樣原來事先定義二倍體細(xì)胞。同樣的，當(dāng)細(xì)胞的DNA指數(shù)為2.0時我們稱之為G2期細(xì)胞，或四倍體細(xì)胞或一個擁有異樣DNA含量的異倍體細(xì)胞。在流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測時，它的位置事先也要精確地進(jìn)行定義。流式細(xì)胞儀通過視察DNA指數(shù)為非1.0整倍的細(xì)胞而能檢測出染色體的變化，但這些細(xì)胞的染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)量必需發(fā)生了改變。因為名詞“異倍體”實際是指通過染色體來確認(rèn)的，當(dāng)我們通過流式細(xì)胞儀檢測DNA含量來發(fā)覺它們時，要以“DNA-異倍體”來形容它們。DNA異倍體細(xì)胞通常，但非肯定，及惡性組織有關(guān)系。但一些例外狀況必需留意，如一些良性腫瘤（如內(nèi)分泌腺腫瘤）和惡變前的上皮細(xì)胞。當(dāng)一個惡性腫瘤通過流式細(xì)胞儀DNA-異倍體峰檢測出來時，直方圖分析時會發(fā)覺在腫瘤中異倍體細(xì)胞及二倍體細(xì)胞相互混合。二倍體細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,纖維原細(xì)胞和一些基質(zhì)成份，它們常常在樣本中占肯定的數(shù)量。腫瘤和基質(zhì)細(xì)胞都會有部分細(xì)胞正在進(jìn)行細(xì)胞循環(huán)過程，經(jīng)驗著G1→S→G2→M期（基質(zhì)細(xì)胞的S和G2期細(xì)胞數(shù)量通常比惡性細(xì)胞的要少得多），所以此時得到的DNA直方圖通常是由兩個細(xì)胞循環(huán)相互疊加構(gòu)成的，但MultiCycle和ModFit都有特地的模型對它們進(jìn)行分析。細(xì)胞周期分析和DNA含量直方圖DNA直方圖要求數(shù)學(xué)方法來進(jìn)行分析目的是精確地識別出被覆蓋的G1,S和G2期細(xì)胞的分布；這些分析方法已經(jīng)驗了過去二十多年的發(fā)展及完善。從DNA含量直方圖中提煉出細(xì)胞周期圖的方法也從簡單的圖形識別發(fā)展到更為困難的曲線擬合。全部簡單分析方法都是基于G1和G2期細(xì)胞及S期之間疊加很少，G1和G2期細(xì)胞數(shù)量及直方圖上檢測到的G1,G2期數(shù)量接近的假設(shè)。有兩種詳細(xì)計算方法。第一種是通過計算G1期曲線的左半部分和G2期曲線的右半部分，然后翻倍后得出G1,G2期細(xì)胞，而剩余部分便是S期細(xì)胞。第二種方法是只利用最中間的S期細(xì)胞分布，并向左側(cè)G1期平均熒光強度和右側(cè)G2期平均強度延長而計算出S期細(xì)胞。而左,右側(cè)剩余部分便分別是G1和G2期細(xì)胞。這些方法僅在只有一個細(xì)胞循環(huán)周期的直方圖上才能得出比較準(zhǔn)的結(jié)果。以上兩種方法都假設(shè)G1和G2峰是左右對稱的（事實上不同組織染色后并不形成這種對稱峰）并且兩峰的中間點能夠被精確地識別出來。然而由于G1和G2峰及S期峰總是相互疊加的，所以這些峰的平均值往往并不在它們的最高點上，特殊是G2峰。假如存在第二個細(xì)胞周期時，兩種周期的細(xì)胞相互疊加從而使這種分析方式變得很不牢靠。此外，在這種簡單的圖形分析方法通常不對細(xì)胞碎片和細(xì)胞聚集建立模型進(jìn)行解除。更具柔性和精確的細(xì)胞周期分析方法是基于用數(shù)學(xué)方法構(gòu)造出的DNA含量分布圖，然后運用曲線擬合方法將這些模型及數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配。建立得最好的模型是由Dean和Jett在1974年通過預(yù)言細(xì)胞周期直方圖是呈高斯分布的理論而建立的。相互疊加的G1,G2峰和S峰可用高斯曲線重新被描述出來。在最初的提議中，增寬的S期分布是由一個光滑的二次冪拋物線方程來描述的（拋物線的一個部分，y=a+bx+cx2）。這個模型可以被簡化為一次冪曲線（一個增寬的梯型，如以一條直線方程，y=a+bx）或零度斜線（一個增寬的矩型，直線模型，y=a）來擬合。當(dāng)直方圖的質(zhì)量及志向中相差太大時，特殊是G1或G2峰不呈高斯曲線分布時（底部增寬，傾斜或存在肩峰），簡化模型可削減引起G1,S,G2峰疊加的影響。正如下面章節(jié)將要探討的那樣，這種狀況常常出現(xiàn)在臨床樣本中。在這種狀況下，建意運用保守的零次冪或一次冪來擬后S期，除非對直方圖的質(zhì)量高度牢靠可選用二次冪。有些試驗驅(qū)動形成的S期（通常是培育細(xì)胞）分布將會更困難些，一些可選的分析模型可運用于這些分布。最為適合的模型是將S期切割成一系列的高斯曲線，然后計算這些曲線的和。在這個模型中，每個高斯曲線都可達(dá)到隨意高度。因此S期可被完全地描述出來，故此模型適用于一些困難的S期圖型。以上這些模型的優(yōu)點也是在實踐中的主要缺點。相當(dāng)敏捷的描述S期峰型時會將任何人為造成的假數(shù)據(jù)也描述出來，并且還會增加近G1,G2期端的S期區(qū)域模糊性。一個比較折中的解決方法是由Fox(1980)提出的，他在Dean和Jett的多項式S期模型中再增加了一個高斯曲線。Fox的模型能夠較好地描述S期圖型并同時又保持了S期曲線的平整性。它特殊適用于分析經(jīng)藥物干預(yù)后形成的高S期細(xì)胞。Fox模型整合在MultiCycle軟件中，其名稱為“SynchronousS”。運用二次冪曲線模型幾乎可擬合全部直方圖數(shù)據(jù)。擬合模型可生成數(shù)學(xué)表達(dá)式或函數(shù)來計算直方圖中各期細(xì)胞的分布。表達(dá)式中有一系列的參數(shù)（通常在7至22），它們必需被調(diào)整從而給出最及原始數(shù)據(jù)一樣的模型。因為模型使的函數(shù)并非簡單的線性方程，而是非線性的二次冪函數(shù)。對于這種二次冪函數(shù)分析方法和相應(yīng)的計算機程序最初由Bevington(1969)提出。最為通用此類分析方法是由Marquardt(1963)提出的。全部的二次冪擬合技術(shù)都是帶自修整功能的：擬合函數(shù)模型中的參數(shù)能自動修正從而可得出及原始數(shù)據(jù)最為貼近的方程，最終模擬出最接近的圖型。當(dāng)修正過程中無更優(yōu)方案出現(xiàn)時，計算便會停止并得出理論上的最佳方案。擬合的優(yōu)度運用卡方檢測來驗證，或是它的簡化公式：來求證，它可檢測擬合數(shù)據(jù)及實際數(shù)據(jù)的離散程度。二次冪擬合的速度是由找尋并發(fā)覺最佳擬合參數(shù)的效率來確定的。馬夸特運算方法會運用優(yōu)化的方案來找尋最低卡方值及最佳的擬合參數(shù)。二次冪擬合方法的優(yōu)點這種模型可以直接分析有兩個甚至三個細(xì)胞周期相互疊加的樣本。疊加模式分析部分是運用去卷積的數(shù)學(xué)方法來統(tǒng)計單個細(xì)胞周期的。二次冪擬合方法的另一個優(yōu)點是在擬合過程中它被分析時的起點等參數(shù)的影響較小。這些參數(shù)包括人為定義的細(xì)胞峰算術(shù)平均位置和CVs值，及直方圖所分析區(qū)域的范圍。當(dāng)細(xì)胞周期和碎片分析模型能最優(yōu)化地擬合數(shù)據(jù)時，分析結(jié)果幾乎不受起始參數(shù)和相關(guān)人員操作的影響。有一點需充分相識：從腫瘤組織中獲得的DNA含量直方圖常常較正常直方圖相去甚遠(yuǎn)（高CVs值，多碎片和細(xì)胞聚集）或更加困難（出現(xiàn)幾個相互疊加的細(xì)胞周期），并常常出現(xiàn)意料之外的峰型（如，偏峰及非高斯分布峰型）。這些狀況在福爾馬林固定的樣本中更為多見。當(dāng)一個偏向的G1峰或帶有尾峰的G1，其右側(cè)延長至S期時，對S期細(xì)胞的統(tǒng)計應(yīng)特別當(dāng)心。在分析這些不典型直方圖時的一個重要方面是通過簡化假設(shè)來削減模型的擬合參數(shù)而降低分析模型的困難性。這可能會降低模型對直方圖細(xì)微環(huán)節(jié)的分析實力，但它同樣也降低了錯誤分析數(shù)據(jù)的可能性。如上所述，有些模型可能會假設(shè)一個偏態(tài)的或低部過寬的G0或G1峰是S期的一個部分，從而引起了真正S期細(xì)胞的過量統(tǒng)計。一些更保守的模型在分析，因多個細(xì)胞峰相互疊加或聚集細(xì)胞和細(xì)胞碎片過多時而引起的CVs過寬或細(xì)胞峰未很好分別的樣本時，它的精度會更好。這些狀況將在以下的章節(jié)中進(jìn)行探討。在以上狀況下舉薦運用Dean和Jett的計算方法中零次冪（加寬矩形）或一次冪（加寬的四邊形）來替代較為敏捷但更易出錯的二次冪模型。此外還可強制規(guī)定G2和G1期峰的CVs值相等（它們通常下是相當(dāng)接近的），或規(guī)定二倍體細(xì)胞的CVs值及異倍峰的相等，或依據(jù)以往試驗室閱歷供應(yīng)G2/G1的比值。請參考第8章-擬合選項，來獲得更多的相關(guān)信息。最終，下面將介紹，細(xì)致地擬合細(xì)胞聚集和碎片背景也是在分析困難直方圖中獲得最佳細(xì)胞周期結(jié)果的重要方面。擬合“碎片”及細(xì)胞核切割物背景幾乎全部作流式細(xì)胞儀DNA含量分析的細(xì)胞或細(xì)胞核懸液都存在一些被破壞或損壞的細(xì)胞核（碎片），它們通常分布在二倍體G1期的左側(cè)。當(dāng)樣本源自于簇新組織或細(xì)胞，這些碎片信號會出現(xiàn)在直方圖的左邊界并快速回落至底線。在志向狀態(tài)下，碎片信號并不會影響細(xì)胞周期直方圖。然而實際中卻非如此，現(xiàn)在發(fā)覺用計算機擬合碎片分布并去除其對細(xì)胞周期各峰的影響至關(guān)重要。傳統(tǒng)的碎片擬合假設(shè)是碎片曲線從高峰快速回落至底線并可用一個指數(shù)函數(shù)(e-kx)來擬合。但是其中存在兩大緣由而造成了指數(shù)曲線擬合并不能精確模擬出碎片的分布：1）很多碎片分布并不是真正成指數(shù)曲線分布的。而一個從高峰快速回落至肯定高度后進(jìn)入一個緩慢回落或平臺過程的狀況卻最為多見。這個較為緩慢的回落部分對細(xì)胞周期的影響比指數(shù)曲線預(yù)料的影響要大得多。2)碎片是因為細(xì)胞被溶解,破裂或細(xì)胞核被切割而造成的，所以它們只向DNA峰的左側(cè)延長（微小DNA含量峰）。因此，碎片峰的形態(tài)是依靠于DNA直方圖中個峰位置的，并且碎片不可能獨立于細(xì)胞細(xì)胞峰之外。因為S期是細(xì)胞周期中含量最低分布最廣的部分，S期的計算受以上影響最大。圖2.3.擬合石蠟包埋組織二倍體細(xì)胞。（A）運用簡單指數(shù)曲線擬合碎片曲線，（B）直方圖依靠，指數(shù)似后，（C）切核模式擬合碎片。如圖所示各種分析方法對細(xì)胞周期中S期的影響各不相同。簡單指數(shù)擬合開始點從碎片的最左側(cè)開始至接近于G1峰，如圖（D），所得出的S期檢測結(jié)果及（A）圖中差別很大。圖（E）顯示窄范圍直方圖依靠性指數(shù)碎片擬合，得出的S期細(xì)胞比圖（B）要少22%。相比而言，切核模式擬合的結(jié)果受改變分析區(qū)域的影響最小，如圖（E）。為了演示以上兩種觀點，可以試用不同的模型來分析由石蠟包埋組織提取細(xì)胞的DNA直方圖。圖2.3A顯示了以一個簡單的指數(shù)曲線來擬合G1期峰左側(cè)的碎片。這種模式并沒有識別出很多混入G1期的碎片，依據(jù)分析區(qū)域的不同過多或過少地預(yù)料了混入S和G2期峰內(nèi)的碎片。在MultiCycle中整合了一個更為成熟的指數(shù)模型來擬合碎片。在此要意識到DNA碎片是從DNA陽性峰開始只向左側(cè)延長，MultiCycle中的模型假設(shè)每個DNA陽性峰都會產(chǎn)生肯定的碎片并向左側(cè)延長。因為DNA含量峰左側(cè)從零到陽性出現(xiàn)的左側(cè)及右側(cè)直方圖的坐標(biāo)長度不同，所以MultiCycle指數(shù)曲線會擬合出一個看似“陡峭”的曲線，并且它的后端將持續(xù)覆蓋很多通道并因下降速度不同而出肩峰。MultiCycle中的“直方圖依靠”性指數(shù)模型的運用結(jié)果如圖2.3B和2.3E。在這兩個例子中，因數(shù)據(jù)中絕大部分細(xì)胞都屬于G1期，背景碎片曲線由G1峰的左側(cè)向右側(cè)快速下降。圖2.3E顯示了在近G1峰處擬合碎片的曲線，而2.3B顯示了遠(yuǎn)G1峰的擬合曲線。因為此碎片擬合曲線并不是真正的指數(shù)函數(shù)，所以選擇的分析區(qū)域不同得出的曲線也不同。S期的統(tǒng)計數(shù)據(jù)也不相同，2.3B及2.3E圖中S期值分別是4.1%和3.2%。從有利的方面分析，這個模型比簡單的指數(shù)模型要更有效。然而運用一個可對經(jīng)切片機處理過和石蠟組織所形成的碎片特地分析的模型可得到一個更佳的分析結(jié)果。此模型可擬合碎片曲線的任何部分，并且它并不受不同分析區(qū)域的影響，圖2.3C和2.3F顯示該模型的結(jié)果。這個模型在分析石蠟切片樣本時特殊有效，詳情見下文。分析石蠟組織在流式細(xì)胞儀DNA檢測應(yīng)用中變得越來越重要。它不僅可對這類樣本進(jìn)行回顧性探討，從而使流式細(xì)胞儀分析結(jié)果及病人長期追蹤建立關(guān)系，而且在很多簇新組織不可用的狀況下分析石蠟標(biāo)本已作為臨床檢測的重要來源。為了取得有效的細(xì)胞周期信息，在分別細(xì)胞核及選擇細(xì)胞周期分析模型時要特殊留意。作為從石蠟組織中提取細(xì)胞的一個步驟，組織塊通常要用切片機將組織切成近50μm的薄片，從而不可避開出現(xiàn)細(xì)胞核碎片。這些細(xì)胞核碎片將影響S期細(xì)胞的計算，但運用一個可分析切核的模型來分析碎核可有助于訂正這些影響。可以想象在切片機刀片軌道上的細(xì)胞核將被隨機地切成兩個部分。假如將細(xì)胞核簡單地想象成球形