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文檔簡介

第三章

糖代謝紊亂的生物化學檢驗?zāi)康暮鸵?/p>

一、掌握糖尿病的分型與特點四、了解血糖調(diào)節(jié)物檢測及臨床意義五、了解低血糖癥及糖代謝先天性異常

二、掌握糖尿病的診斷標準、糖尿病及其并發(fā)癥的生物化學檢驗三、熟悉血糖濃度調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因素第一節(jié)血糖及糖代謝紊亂糖的生理功能1.

氧化供能如糖可提供合成某些氨基酸、脂肪、膽固醇、核苷等物質(zhì)的原料。3.作為機體組織細胞的組成成分這是糖的主要功能。2.

提供合成體內(nèi)其他物質(zhì)的原料如糖是糖蛋白、蛋白聚糖、糖脂等的組成成分。一、血糖及血糖調(diào)節(jié)1.血糖的定義:血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖為3.89-6.11mmol/L

2.血糖的來源:(1)飲食中的糖(2)肝糖原的分解(3)糖異生作用

3.血糖的去路

(1)氧化供能(2)合成糖原(3)轉(zhuǎn)變成非糖物質(zhì)(4)轉(zhuǎn)變成其它糖及糖類衍生物(5)高于腎糖閾時生成尿糖,隨尿排出當血糖濃度高于8.89~10.00mmol/L時,超過了腎小管的重吸收能力,則可出現(xiàn)糖尿,這一血糖水平稱為腎糖閾。腎糖閾的定義血糖食物糖消化吸收

肝糖原分解

非糖物質(zhì)糖異生

氧化分解

CO2+H2O+能量糖原合成

肝(?。┨窃姿嵛焯峭緩降?/p>

其它糖脂類、氨基酸合成代謝

脂肪、氨基酸血糖大于腎糖閾

尿糖

糖代謝的概況(來三去五)

4、血糖濃度的調(diào)節(jié)(1)神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用

神經(jīng)系統(tǒng)通過下丘腦和自主神經(jīng)控制激素的分泌,影響血糖來源與去路中的關(guān)鍵酶的活性,實現(xiàn)對血糖的調(diào)控。下丘腦的腹內(nèi)側(cè)核和外側(cè)核具有相反效應(yīng),它們分別通過內(nèi)臟神經(jīng)和迷走神經(jīng),引起激素的釋放,或直接作用于肝而發(fā)揮調(diào)控作用。(二)激素的調(diào)節(jié)作用主要調(diào)節(jié)激素

降低血糖:胰島素、胰島素樣生長因子(IGF)

升高血糖:胰高血糖素、腎上腺素、生長激素、皮質(zhì)醇

二、糖尿病及其代謝紊亂1980~2008年間全球糖尿病人數(shù)由1.53億增至3.47億;2008~2011年3.66億人,預(yù)計在20年內(nèi)將近6億人1979~1980年我國第一次調(diào)查:患病率1%。1994~1995年第二次調(diào)查:患病率2.5%,另有糖耐量減退者2.5%。2010患病率9.7%,全國糖尿病人9240萬,1.48億糖尿病前期患者,超越印度成為糖尿病第一大國。高血糖癥

高血糖癥(hyperglycemia):空腹血糖高于7.0mmol/L(130mg/dl);高于腎糖閾,則出現(xiàn)糖尿。病因和類型病因血糖平衡受到損害,血糖來源大于去路。類型生理性:包括飲食性(高糖飲食)或情感性(情緒緊張,腎上腺分泌增加);病理性:見于糖尿??;內(nèi)分泌腺(甲狀腺、腎上腺皮質(zhì)或髓質(zhì)、胰島-細胞等)功能亢進;顱內(nèi)壓升高刺激血糖中樞;嘔吐、腹瀉、高熱等引起的脫水。(一)糖尿病的定義與分型定義:糖尿病(diabetesmellitus,DM)是一組由于胰島素分泌不足或(和)胰島素作用低下而引起的代謝性疾病,其特征是高血糖癥。

一種慢性、復(fù)雜的代謝紊亂性疾病。以高血糖癥為基本生化特點,同時伴有糖、脂類、蛋白質(zhì)、水、電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂的一組臨床綜合癥。一種家族性疾??;我國發(fā)病率:80年1%,94年2.5%,96年3.21%,2010年9.7%。成為繼心腦血管病、腫瘤后的第三大疾病。典型癥狀

多食、多尿、多飲、體重減輕。發(fā)病機制

1.胰腺β細胞的自身免疫性損傷

2.機體對胰島素的作用產(chǎn)生抵抗

兩種機制可以共存于同一患者,有時很難鑒別哪一個是原發(fā)性病因。分型

代謝紊亂癥群(三多一少)高滲性利尿→多尿多尿→口渴→多飲糖利用障礙→能量代謝紊亂→饑餓→多食Pro/Lipid分解和脫水→體重減輕(二)糖尿病幾種類型的主要特點1、1型糖尿?。?)免疫介導(dǎo)糖尿病1)病因:由于胰島β細胞的自身免疫性損害,引起胰島素的絕對不足,且具有酮癥酸中毒傾向。導(dǎo)致1型糖尿病發(fā)生的自身免疫反應(yīng)與病人的基因易感性及環(huán)境因素有關(guān)。

遺傳因素:多基因遺傳病,與HLA有很強關(guān)聯(lián)性。自身免疫:T細胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病,體內(nèi)存在多種自身抗體。環(huán)境因素:病毒感染、化學物質(zhì)對胰島細胞的破壞。自身抗體包括:(1)胰島細胞抗體(ICA)(2)胰島自身抗體(IAA)(3)抗65-kD谷氨酸脫羧酶抗體(anti-GAD65)(4)胰島瘤相關(guān)抗原IA-2和IA-2β(5)胰島細胞表面抗體(ICSA)2)特點:①任何年齡均可發(fā)病,但典型病例常見于青少年。占5%-10%。②起病較急。③血漿胰島素及C肽含量低,糖耐量曲線呈低平狀態(tài)。④β細胞的自身免疫性損傷是重要的發(fā)病機制,多可檢出自身抗體。⑤治療以依賴胰島素為主。⑥易發(fā)生酮癥酸中毒。⑦遺傳因素在發(fā)病中起重要作用,特別與HLA某些基因型有很強的關(guān)聯(lián)。2、2型糖尿病這類患者表現(xiàn)為胰島素抵抗和胰島β細胞功能減退。無自身免疫損傷2型DM有很強的遺傳傾向性,涉及多種基因可能包括多種不同的病因大約占糖尿病總數(shù)的90-95%

2型DM的發(fā)生與年齡、肥胖、慢性炎癥和缺乏體育鍛煉等環(huán)境因素有關(guān)。尤其好發(fā)生在既往有妊娠期糖尿病、高血壓以及血脂紊亂者。特點:①典型病例常見肥胖的中老年人。②起病較慢、癥狀較輕,體檢時發(fā)現(xiàn)。病人可通過控制飲食使癥狀減輕。③血漿中胰島素含量絕對值并不降低,但在糖剌激后呈延遲釋放。④ICA(胰島細胞抗體)等自身抗體呈陰性。⑤初發(fā)的病人單用口服降糖藥一般可以控制血糖。⑥發(fā)生酮癥酸中毒的比例不如1型糖尿?。虎哂羞z傳傾向,但與HLA基因無關(guān)。

細胞基因缺陷:常染色體顯性遺傳,表現(xiàn)為胰島素分泌的輕度受損和胰島素作用缺陷。

胰島素作用基因缺陷:胰島素受體變異。

胰島素的外分泌疾?。焊鞣N原因繼發(fā)糖尿病。

內(nèi)分泌疾病所致:拮抗激素過量。3、特殊類型的糖尿病4、妊娠期糖尿?。℅DM)

GDM:指在妊娠期間發(fā)現(xiàn)的糖尿病,包括任何程度的糖耐量減退或糖尿病發(fā)作,但已知糖尿病伴妊娠者不屬此型。其發(fā)病率約為孕婦的1%--2%。妊娠期糖尿病有以下特點:1、孕前未發(fā)現(xiàn)糖尿病或糖耐量減低。2、妊娠期糖尿病對胎兒的影響以自然流產(chǎn),胎死宮內(nèi),早產(chǎn)及圍產(chǎn)期死亡為多見,分娩巨大兒較多。(三)糖尿病的主要代謝紊亂糖尿病時體內(nèi)的主要代謝紊亂(1)糖代謝紊亂--高血糖和糖尿(2)脂類代謝紊亂--高血脂、酮癥酸中毒。(3)體重減輕和生長遲緩

由于胰島素的絕對或相對不足,胰島素/胰高血糖素比值↓,機體組織不能有效地攝取和利用血糖,葡萄糖在肝、肌肉和脂肪組織的利用↓,肝糖原降解和糖異生↑,引起血糖↑。血糖過高可經(jīng)腎排出,當腎功能障礙時,引起糖尿,并產(chǎn)生滲透性利尿,嚴重甚至可引起腦細胞脫水,出現(xiàn)高滲性高血糖昏迷,其死亡率高于糖尿病酮癥酸中毒。高血糖和糖尿

胰島素/胰高血糖素↓脂肪分解↑甘油三酯↑LPL活性↓酮癥酸中毒血中VLDL、CM清除↓高VLDL、CM血癥FFA↑VLDL↑高VLDL血癥脂肪肝動脈粥樣硬化酮體生成↑脂類代謝紊亂—高血脂、酮癥酸中毒

肝血漿膽固醇↑升血糖激素↑HMG-CoA還原酶↑肝體重減輕和生長遲緩

胰島素是以促進合成代謝為主的儲存激素,胰島素分泌不足時,體內(nèi)蛋白質(zhì)合成↓,分解代謝↑,可導(dǎo)致機體出現(xiàn)負氮平衡。粥微血管、神經(jīng)病變和白內(nèi)障的發(fā)生

長期高血糖可使蛋白質(zhì)發(fā)生非酶促糖基化反應(yīng),糖基化蛋白質(zhì)分子與未被糖化的分子互相結(jié)合交聯(lián),使分子不斷加大,進一步形成大分子的糖化產(chǎn)物,這種反應(yīng)多發(fā)生在那些半壽期較長的蛋白質(zhì)分子上,如膠原蛋白、晶體蛋白、髓鞘蛋白和彈性硬蛋白等,引起血管基底膜增厚、晶體渾濁變性和神經(jīng)病變等病理變化。由此引起的大血管、微血管和神經(jīng)病變,是導(dǎo)致眼、腎、神經(jīng)、心臟和血管等多器官損害的基礎(chǔ)。第二節(jié)糖代謝紊亂的主要檢測項目空腹血糖餐后2h血糖葡萄糖耐量試驗糖化血紅蛋白糖化血清蛋白與糖化白蛋白胰島素及C肽胰島素原酮體丙酮酸及乳酸尿微量白蛋白一、空腹血糖(fastingplasmaglucose,FPG)

空腹血糖(FPG)是指至少8h內(nèi)不攝入含熱量食物后測定的血漿葡萄糖。糖尿病最常用檢測項目。

不同樣本的葡萄糖濃度參考值

標本葡萄糖濃度(mmol/L)葡萄糖濃度(mg/dl)血漿/血清成人小孩早產(chǎn)新生兒足月新生兒成人全血腦脊液尿(24h)3.9~6.13.5~5.61.1~3.31.7~3.33.5~5.32.2~3.9(相當于血漿值的60%)0.1~0.870~11060~10020~6030~6065~9540~701~15臨床意義空腹血糖反應(yīng)了胰島素分泌能力,其增高與葡萄糖耐量減低是相平行的??崭寡撬绞窃\斷糖尿病最主要的依據(jù)。1.標本的收集和貯存:

清晨空腹靜脈取血,血液標本需分離血漿盡快測定。若不能及時測定,標本應(yīng)中加入碘乙酸鈉或氟化鈉抑制糖酵解作用,可使血葡萄糖在室溫下穩(wěn)定3天。

評價2.應(yīng)用評價FPG是糖尿病的常用檢測項目,但在2型糖尿病中,高血糖是相對較晚才產(chǎn)生的,因此僅應(yīng)用FPG這個標準將延誤診斷,并對糖尿病人群的流行估計過低。葡萄糖的測定方法及評價:目前多采用酶法測定血漿葡萄糖,主要用的是已糖激酶和葡萄糖氧化酶,也有用葡萄糖脫氫酶。(1)已糖激酶法

NADPH在340nm處有一吸收峰,其吸光度增加與血糖濃度成正比。本法準確度和精密度高,特異性高,適用于自動化分析。輕度溶血、脂血、黃疸等不干擾測定。

葡萄糖+ATP6-磷酸葡萄糖+ADPHK6-磷酸葡萄糖+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+G-6-PD(2)葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法:

準確度和精密度都能達到臨床要求,操作簡便,適用于常規(guī)檢驗。此反應(yīng)稱Trinder反應(yīng),本法為國內(nèi)推薦方法。葡萄糖+2H2O+O2葡糖酸內(nèi)酯+2H2O2色原性氧受體(4-AA+酚)

+H2O2紅色醌類化合物+H2OPODGOD(3)葡萄糖脫氫酶法

340nm測定,本法高度特異,不受各種抗凝劑和血漿中其他物質(zhì)的干擾。制成固相酶,可用于連續(xù)流動分析,也可用于離心沉淀物的分析。目前尚未推廣。葡萄糖+NAD葡糖酸內(nèi)酯+NADH+H+GD二、餐后2小時血糖

早晨空腹時進餐一個2兩重的(約100克)饅頭或進餐75克無水葡萄糖,然后于餐后2小時抽血測血糖正常餐后2小時血糖<140mg/dL(7.8mmol/L)三、口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)

口服葡萄糖耐量試驗(OGTT):是在口服一定量葡萄糖后2h內(nèi)作系列血漿葡萄糖濃度測定,以評價不同個體對血糖的調(diào)節(jié)能力的一種標準方法。OGTT適應(yīng)證:1、空腹血糖水平在臨界值(6~7mmol/L)而又疑為糖尿病患者;2、空腹或餐后血糖濃度正常,但有發(fā)展為糖尿病可能的人群;3、以前糖耐量異常的危險人群;4、妊娠性糖尿病的診斷;5、臨床上出現(xiàn)腎病、神經(jīng)病變和視網(wǎng)膜病而又無法做出合理解釋者;6、作為流行病學研究的手段。方法:坐位取血后5分鐘內(nèi)飲入250ml含75g無水葡萄糖的糖水,服糖后每隔30分鐘取血1次,共4次。于采血同時,每隔1小時留取尿液作尿糖試驗。OGTT結(jié)合FPG可協(xié)助診斷DM及其相關(guān)狀態(tài)

①FPG<6.1mmol/L,并且2hPG<7.8mmol/L為正常糖耐量。②FPG介于6.1mmol/L~7.0mmol/L之間,2hPG<7.8mmol/L為空腹血糖受損(IFG)。③FPG<7.0mmol/L和2hPG介于7.8mmol/L~11.1mmol/L間為糖耐量減退(IGT)。④FPG≥7.0mmol/L,2hPG≥11.1mmol/L為糖尿病性糖耐量。建議進行FPG或OGTT篩查的人群

1.所有年滿45周歲的人群,每三年進行一次篩查。2.對于較年輕的人群,如有以下情況,應(yīng)進行篩查(1)肥胖個體,體重≥120%標準體重或者BMI*≥27kg/m2(2)存在與糖尿病發(fā)病高度相關(guān)的因素。(3)糖尿病發(fā)病的高危種族(如非裔、亞裔、土著美國人、西班牙裔和太平洋島嶼居民)。(4)已確診GDM或者生育過>9kg體重的胎兒。(5)高血壓癥患者。(6)HDL膽固醇水平≤0.90mmol/L或TG≥2.82mmol/。(7)曾經(jīng)有IGT或者IFG的個體。注:*BMI為體重指數(shù),BMI=體重(kg)/身高(m)的平方。評價OGTT在糖尿病的診斷中并非必需,因此不推薦臨床常規(guī)應(yīng)用。雖然OGTT比FPG更靈敏,但它受多種因素影響且重復(fù)性差。四、糖化血紅蛋白的檢測

血液中的己糖(主要是葡萄糖)可以將糖基連接到蛋白質(zhì)的氨基酸基團上,生成糖化血紅蛋白。這是一個緩慢的、不可逆的、非酶促反應(yīng),與血糖的濃度和高血糖存在的時間相關(guān)。糖化血紅蛋白濃度反映的是過去6-8周的平均血糖水平,主要用于評估血糖控制效果。(glycatedhemoglobin,GHb)HBA1a1HbA(>90%)HBA1aHBA1a2HbHbA1(7%)HBA1bHbA2(2.5%)HBA1c*HbF

HbA1c是評價血糖控制方案的金標準血糖控制未達到目標或治療方案調(diào)整后,糖尿病患者應(yīng)每3個月檢查一次HbA1c血糖控制達到目標的糖尿病患者應(yīng)每年至少檢查2次HbA1cGHb的測定方法包括:(1)根據(jù)電荷差異:離子交換層析,高效液相層析,常規(guī)電泳和等電聚焦電泳等。(2)根據(jù)結(jié)構(gòu)差異:親和層析和免疫測定法。(3)化學分析技術(shù):比色法、分光光度法。離子交換層析法原理:制備溶血產(chǎn)物后,通過陰離子交換樹脂,Hb被保留。洗掉HbA1a+b部分,HbA1c被特異性洗脫,然后用分光光度計在415nm處讀數(shù),計算結(jié)果。計算:

HbA1c%=×100

AHbTOTAL×VHbTOTALAHbA1c×VHbA1c糖化血紅蛋白參考范圍糖化血紅蛋白種類平均值(%)參考范圍(%)HbA1(A1a+b+c)6.55.0~8.0僅HbA1c4.53.6~6.0總糖化血紅蛋白(A1+A0)5.54.5~7.0平均血糖水平mg/dl糖化血紅蛋白水平%平均血糖估計值=30.9×(糖化血紅蛋白值)-60.6糖化血紅蛋白每變化1%,所對應(yīng)的平均血糖的變化為30mg/dl.控制目標需要調(diào)整治療評價HbA1c檢測結(jié)果不受存在的變異型血紅蛋白及其衍生物的影響。GHb的形成與紅細胞的壽命有關(guān),各種原因引起紅細胞壽命縮短時,GHb明顯減少;異常血紅蛋白病也會導(dǎo)致GHb改變。HbA1c的檢測方法已標準化、與糖尿病長期并發(fā)癥的相關(guān)性更強,生物變異性小。五.果糖胺(糖化血清蛋白/糖化白蛋白):

是血漿蛋白酮胺的普通命名,主要是糖化白蛋白。是葡萄糖與血清白蛋白等通過非酶促糖基化反應(yīng)結(jié)合形成酮胺

主要測定方法:酶法

糖化蛋白碎片糖化蛋白蛋白酶K糖化蛋白碎片氨基酸+H2O2酮胺氧化酶(KAOD)H2O2+色原顯色物質(zhì)+H2O過氧化物酶參考區(qū)間:205-285μmol/l糖化血清蛋白測定可反映2~3周內(nèi)血糖的平均濃度。在溶血性貧血、大量失血等情況下,果糖胺可更準確地反映短期內(nèi)的平均血糖變化。在腎病綜合征、肝硬化等疾病時,果糖胺結(jié)果不可靠。六.胰島素及C肽:(1)胰島素的檢測:可采用RIA、ELISA、化學發(fā)光等方法,每種方法的檢測原理有差異。正常參考值范圍也因方法而異。2.C-肽的檢測:C-肽濃度水平能更好地反映β細胞功能;且不受外源性胰島素干擾、不與胰島素抗體反應(yīng)。采用免疫法測定,但不同測定方法間的變異很大。主要用于評估胰島素的分泌、評估空腹低血糖以及監(jiān)測胰腺手術(shù)效果。七、胰島素原的檢測:作為胰島素的前體和主要儲存形式,其檢測仍較困難。檢測胰島素原能為胰腺β細胞腫瘤和其他疾病的診斷提供幫助。八、酮體的檢測

酮體由乙酰乙酸、β-羥丁酸和丙酮組成,主要來源于游離脂肪酸在肝臟的氧化代謝產(chǎn)物。在未控制的糖尿病中,由于胰島素缺乏,酮體生成增加。

酮體概念

(20%)乙酰乙酸HCO2(78%)β羥丁酸(2%)丙酮-可呼出有爛蘋果味340nm測定,根據(jù)反應(yīng)前后吸光度的變化計算β-羥丁酸的濃度。

乙酰乙酸+NADH+H+β-羥丁酸+NAD+β-羥丁酸脫氫酶參考區(qū)間:0.03-0.3mmol/l。酶法測定原理:九、乳酸和丙酮酸測定葡萄糖無氧酵解時的終產(chǎn)物是丙酮酸,可還原成乳酸,兩者處在動態(tài)平衡中。測定原理:乳酸+NAD+乳酸脫氫酶丙酮酸+NADH+H+4第三節(jié)糖代謝紊亂的主要檢測項目的臨床應(yīng)用

糖尿病的實驗室檢測指標在糖尿病及其并發(fā)癥的篩查、病因分類、臨床診斷和鑒別診斷、療效評估、病情監(jiān)測以及病理機制探討等等方面具有重要價值。NACB和PPCoftheADA提出了如下建議。

早期篩查指標包括①免疫學標志物(包括ICA、IAA、GAD抗體和IA-2抗體)。②基因標志物(如HLA的某些基因型)。③胰島素分泌(包括空腹分泌、脈沖分泌和葡萄糖刺激分泌)。④血糖(包括IFG和IGT)。

一、糖尿病的早期篩查

糖尿病的生物化學診斷指標包括①血糖(包括空腹與隨機)。②OGTT。

二、糖尿病的生物化學診斷

糖尿病診斷標準(2001年)(1)空腹血糖濃度≥7.0mmol/L

(2)出現(xiàn)糖尿病癥狀加上隨機血糖濃度

≥11.1mmol/L;(3)OGTT

2h血糖濃度≥11.1mmol/L(4)HbA1c≥6.5%

(5)未發(fā)現(xiàn)有明確的高血糖時,應(yīng)重復(fù)檢測以確診。注意:一是不能忽視餐后血糖,因為它對糖尿病的早期診斷意義更大;二是尿糖陽性僅作為糖尿病的診斷線索,不能作為診斷依據(jù)。

妊娠糖尿病的診斷標準

篩選:1.對所有24周~28周孕的、具有高危妊娠期糖尿病傾向的妊娠婦女進行篩查。2.空腹條件下,口服50g葡萄糖。測定1小時血漿葡萄糖濃度,若血糖≥7.8mmol/L(140mg/dl),則需進行葡萄糖耐量試驗。診斷:1.空腹早晨測定。2.測定空腹血漿葡萄糖濃度。3.口服100g或75g葡萄糖。4.測定3小時或2小時內(nèi)的血漿葡萄糖濃度。5.至少有兩項檢測結(jié)果與下述結(jié)果相符或超過,即可診斷:時間100g葡萄糖負荷實驗*75g葡萄糖負荷實驗*血漿葡萄糖濃度血漿葡萄糖濃度空腹5.3mmol/L(95mg/dl)5.3mmol/L(95mg/dl)1小時10.0mmol/L(180mg/dl)10.0mmol/L(180mg/dl)2小時8.6mmol/L(155mg/dl)8.6mmol/L(155mg/dl)3小時7.8mmol/L(140mg/dl)——6.如果結(jié)果正常,而臨床疑似GDM,則需在妊娠第三個三月期重復(fù)上述測定。注:*100g和75g葡萄糖負荷試驗均可,目前尚無統(tǒng)一標準,多數(shù)采用100g進行負荷試驗??崭寡鞘軗p和糖耐量減退的診斷標準

空腹血糖受損(IFG)

1.空腹血糖濃度在6.1*~7.0mmol/L2.OGTT2h血糖濃度<7.8mmol/L糖耐量減退(IGT)1.空腹血糖濃度<7.0mmol/L2.OGTT2h血糖濃度在7.8~11.1mmol/L,檢測結(jié)果同時滿足以上兩項時,即可診斷。注:*2003年美國糖尿病協(xié)會(ADA)推薦降低IFG診斷標準的下限為5.6mmo/L。三、糖尿病治療效果評價糖尿病是一個長期存在的疾病,因此必須對其進行監(jiān)控,以觀察療效和疾病進程。糖化血紅蛋白(GHb)、糖化白蛋白(GA)等可反映不同時間段內(nèi)血糖的控制情況。GA反應(yīng)的是糖尿病患者測定前2-3周的血糖平均水

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