B4微生物實(shí)驗(yàn)室管理與無(wú)菌產(chǎn)品檢驗(yàn)20140619

微生物實(shí)驗(yàn)室管理與無(wú)菌產(chǎn)品檢驗(yàn)主講人：崔強(qiáng)2014年6月E-mail:cuiqiangsspc@163.com第一部分.微生物實(shí)驗(yàn)室的管理特點(diǎn)-2--3-藥品微生物污染的特點(diǎn)微生物污染的特點(diǎn)是能夠繁殖的活性生物數(shù)量少而且分布不均勻多數(shù)處于受損傷的狀態(tài)生存環(huán)境的多樣性和復(fù)雜-4-OOS結(jié)果調(diào)查和評(píng)價(jià)的復(fù)雜性樣品及微生物本身的特性樣品/環(huán)境中微生物分布均一性較差樣品/環(huán)境中微生物學(xué)特性不穩(wěn)定微生物在自然界中分布廣泛，所檢出的微生物絕大多數(shù)與人類(lèi)通常攜帶的微生物有關(guān)-5-OOS結(jié)果調(diào)查和評(píng)價(jià)的復(fù)雜性微生物學(xué)檢驗(yàn)/監(jiān)測(cè)的特性檢驗(yàn)周期長(zhǎng)同一樣品無(wú)法用于重復(fù)檢測(cè)樣品/環(huán)境中微生物恢復(fù)生長(zhǎng)的影響因素較多分析人員有可能引入污染微生物微生物分析結(jié)果的差異性大-6-困境-7-對(duì)質(zhì)量人的未來(lái)期望摘自PDAJournal角色轉(zhuǎn)換–質(zhì)量專(zhuān)家今天面臨的挑戰(zhàn)-8-微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理要素通常包括以下內(nèi)容人員設(shè)施與環(huán)境檢驗(yàn)方法及其驗(yàn)證設(shè)備試劑和試液標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)量的溯源性抽樣樣品的處置污染廢棄物的處理文件管理變更管理異?；虺瑯?biāo)結(jié)果的處理質(zhì)量系統(tǒng)的內(nèi)審和外審-9-第二部分微生物實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)要求-10-檢驗(yàn)過(guò)程的影響因素人檢驗(yàn)員、實(shí)驗(yàn)室管理人員機(jī)檢驗(yàn)設(shè)備物試劑、溶劑、標(biāo)準(zhǔn)（對(duì)照）品、培養(yǎng)基、容器具（試管、滴定管等）法標(biāo)準(zhǔn)、操作規(guī)程、記錄環(huán)實(shí)驗(yàn)條件-11-微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制-人員要求附錄1第二章原則第三條…人員的技能、所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度是達(dá)到上述目標(biāo)的關(guān)鍵因素…實(shí)事求是、認(rèn)真負(fù)責(zé)藥學(xué)、微生物、或相關(guān)專(zhuān)業(yè)

微生物檢驗(yàn)的相關(guān)工作

無(wú)菌技術(shù)、生物安全相關(guān)培訓(xùn)

菌株保存、無(wú)菌取樣

基本素質(zhì)

專(zhuān)業(yè)背景

工作經(jīng)驗(yàn)

專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)特定崗位-12-微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

-設(shè)施和環(huán)境基本原則方便、快捷、順暢最大程度防止微生物的污染防止檢驗(yàn)過(guò)程對(duì)環(huán)境和人員造成危害.-13-微生物室的功能性設(shè)施功能性區(qū)域可分為以下幾類(lèi)實(shí)驗(yàn)區(qū)無(wú)菌操作區(qū)、潔凈操作區(qū)、帶菌操作區(qū)樣品培養(yǎng)區(qū)試液、培養(yǎng)基配制區(qū)微生物污染廢棄物放置區(qū)洗滌烘干室滅菌室人員記錄區(qū)其它，如實(shí)驗(yàn)用品儲(chǔ)藏室、人員辦公室-14-微生物實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)施設(shè)備潔凈室及（或）無(wú)菌隔離系統(tǒng)凈化工作臺(tái)各種實(shí)驗(yàn)用儀器設(shè)備特定的溫控設(shè)施培養(yǎng)箱（或室）冷藏箱（或室）、冷凍箱-15-微生物實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)施設(shè)備滅菌（消毒）設(shè)備濕熱、干熱及UV輔助性設(shè)施試劑、耗材及樣品等的存貯培養(yǎng)基、試劑等的配制器皿、環(huán)境的清潔與消毒人員休息、辦公區(qū)-16-工作類(lèi)型樣品檢驗(yàn)原輔料微生物限度檢查、滅菌前藥液微生物污染水平檢查、無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查環(huán)境監(jiān)測(cè)微生物鑒別OOS結(jié)果調(diào)查容器密閉完整性的微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)其它菌種管理、培養(yǎng)基制備、生物指示劑測(cè)試、日常管理-17-無(wú)菌檢查的環(huán)境條件無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行。為此，實(shí)驗(yàn)環(huán)境必須適合于進(jìn)行無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)。所采取的防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)用設(shè)施對(duì)檢品所帶來(lái)的微生物學(xué)挑戰(zhàn)性不得高于無(wú)菌工藝生產(chǎn)設(shè)施進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所需要的無(wú)菌條件可以通過(guò)位于B級(jí)潔凈室內(nèi)的A級(jí)單向流空氣裝置，或者通過(guò)隔離器來(lái)達(dá)到-18-無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)方法薄膜過(guò)濾法（首選）所適用的樣品包括水溶液供試品、可溶于水的固體制劑供試品、?-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素供試品、非水溶性制劑供試品、可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和粘性油劑供試品、無(wú)菌氣（噴）霧劑供試品、具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具(輸血、輸液袋等)供試品等直接接種法所適用的樣品包括混懸液等非澄清水溶液供試品、固體制劑供試品、非水溶性制劑供試品、敷料供試品、腸線、縫合線等供試品、滅菌醫(yī)用器具供試品、放射性藥品等-19-無(wú)菌檢查結(jié)果的觀察與評(píng)價(jià)按照中國(guó)藥典附錄ⅪH規(guī)定，含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則，試驗(yàn)無(wú)效若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含-20-無(wú)菌檢查結(jié)果的觀察與評(píng)價(jià)按中國(guó)藥典附錄ⅪH規(guī)定，符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的-21-細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法凝膠法凝膠限度試驗(yàn)?zāi)z半定量試驗(yàn)光度測(cè)定法終點(diǎn)濁度法和動(dòng)態(tài)濁度法終點(diǎn)顯色法和動(dòng)態(tài)顯色法測(cè)定結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，以凝膠法為準(zhǔn)-22-滅菌前產(chǎn)品的微生物污染水平監(jiān)控原理對(duì)于一個(gè)特定的滅菌工藝（即F0值一定時(shí)），可以根據(jù)一批產(chǎn)品的滅菌前污染菌數(shù)和耐熱性D值，計(jì)算出滅菌后具體的殘存概率。檢測(cè)指標(biāo)滅菌前產(chǎn)品中的污染菌數(shù)量滅菌前產(chǎn)品中的污染菌耐熱性-23-滅菌前產(chǎn)品的微生物學(xué)取樣正常取樣時(shí)機(jī)臨滅菌前的樣品在灌封的開(kāi)始、中間、結(jié)束3個(gè)階段分別標(biāo)記出現(xiàn)異常情況的樣品比如，停電或超出工藝時(shí)限分批，增補(bǔ)樣品留取備份樣品-24-檢驗(yàn)方法：滅菌前產(chǎn)品的總需氧菌檢測(cè)檢測(cè)方法薄膜過(guò)濾法–0.45μm濾膜，TSA培養(yǎng)基對(duì)LVP產(chǎn)品，檢驗(yàn)量通常不低于100ml/容器培養(yǎng)條件30-35℃，逐日計(jì)數(shù)糾偏標(biāo)準(zhǔn)通?？傂柩蹙鷶?shù)控制在1000CFU/容器-25-檢驗(yàn)方法：滅菌前產(chǎn)品中耐熱芽孢考查檢測(cè)方法（HeatScreeningTest）樣品置于100℃下暴熱10分鐘薄膜過(guò)濾法–0.45μm濾膜，F(xiàn)TM培養(yǎng)基對(duì)LVP產(chǎn)品，檢驗(yàn)量通常為每只容器中的全部樣品培養(yǎng)條件30-35℃，培養(yǎng)7天后讀取結(jié)果合格標(biāo)準(zhǔn)通常不得出現(xiàn)微生物生長(zhǎng)，一旦檢出，則進(jìn)行微生物鑒別實(shí)驗(yàn)，根據(jù)鑒別結(jié)果確定是否需要測(cè)定耐熱性-26-制定和實(shí)施系統(tǒng)的環(huán)境監(jiān)控方案完整的環(huán)境監(jiān)控方案監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，包括空氣懸浮粒子、空氣浮游菌、空氣沉降菌、設(shè)備表面微生物、人員衛(wèi)生狀況監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)限度取樣位置和取樣計(jì)劃現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)方法和結(jié)果記錄微生物鑒別和數(shù)據(jù)的趨勢(shì)分析（年度回顧審核）其它（偏差調(diào)查與糾偏措施，人員培訓(xùn)、環(huán)境再驗(yàn)證等內(nèi)容）-27-微生物常規(guī)鑒定步驟首先掌握菌株的基本特征，如細(xì)胞的形狀、革蘭氏染色及其他形態(tài)學(xué)特征；營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型、需氧性等生理生化特征在此基礎(chǔ)上查閱分類(lèi)（鑒定）手冊(cè)，確定菌株屬于哪一大類(lèi)（群、組），進(jìn)行特征測(cè)定根據(jù)測(cè)定結(jié)果逐步縮小菌株的歸屬范圍，初步確定科、屬如菌株需鑒定至種，則進(jìn)一步測(cè)定種的鑒別特征如鑒定結(jié)果涉及新的分類(lèi)單元，則進(jìn)行包括基因型在內(nèi)的全面鑒定-28-微生物鑒別技術(shù)的進(jìn)展快速鑒定技術(shù)PCR-SSCP、DDGE、REAL-TIMEPCR、LAMP、FT-IR快速表型鑒定系統(tǒng)BIOLOGAutomaticIdentificationSystem，APIIdentificationSystem，VITEK，VIDAS菌株遺傳型鑒定系統(tǒng)DiversiLab，Riboprinter，MicroSeq-29-技術(shù)展望–快速檢測(cè)平臺(tái)基于微生物生長(zhǎng)的檢測(cè)方法(Growth-basedmethods)電化學(xué)方法(Electrochemicalmethods)耗氣或產(chǎn)氣測(cè)量(Measurementofconsumptionorproductionofgas)生物發(fā)光法(Bioluminescence)直接測(cè)量方法(DirectMeasurement)固相細(xì)胞計(jì)數(shù)法(solid-phasecytometry)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法(Flowcytometry)直接外熒光濾光技術(shù)(Directepifluorescentfiltrationtechnique)采用快速檢測(cè)方法的益處快速檢測(cè)方法至少能夠做到…推進(jìn)工藝開(kāi)發(fā)

提高檢驗(yàn)速度

原輔料，成品利于過(guò)程控制

建立關(guān)鍵工藝步驟的控制點(diǎn)提早發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重性污染避免不合格中間產(chǎn)品的放行增加環(huán)境監(jiān)測(cè)的有效性-30-快速檢測(cè)方法在環(huán)境監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用空氣浮游菌快速檢測(cè)儀-31-快速檢測(cè)方法在環(huán)境監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用空氣浮游菌快速檢測(cè)儀測(cè)試原理新陳代謝產(chǎn)物熒光激發(fā)波長(zhǎng)范圍NADH(還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)340nm(300nm-410nm)Riboflavin(核黃素)400nm(320nm-420nm)-32--33-技術(shù)展望–快速檢測(cè)系統(tǒng)示例-34-第三部分風(fēng)險(xiǎn)控制-35-崗位培訓(xùn)的基礎(chǔ)內(nèi)容基礎(chǔ)培訓(xùn)包括GMP、安全、環(huán)保、清潔生產(chǎn)等通用規(guī)范微生物的安全操作實(shí)驗(yàn)室一般性技術(shù)GMP對(duì)微生物室的要求常用滅菌方法和原理潔凈區(qū)的環(huán)境控制藥典規(guī)定的無(wú)菌檢查法、微生物限度檢查法、抗生素微生物檢定法、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法等檢驗(yàn)技術(shù)微生物基本鑒別技術(shù)特殊設(shè)備的使用方法-36-潔凈室的使用管理經(jīng)設(shè)計(jì)、施工、確認(rèn)合格的潔凈室使用管理建立使用登記冊(cè)建立潔凈室使用標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程HVAC系統(tǒng)的維護(hù)執(zhí)行清潔消毒程序定期進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)定期再驗(yàn)證定期更換紫外燈管限制無(wú)關(guān)人員的進(jìn)入日常維護(hù)性檢查-37-儀器設(shè)備分類(lèi)管理無(wú)需校驗(yàn)的設(shè)備渦旋攪拌器、震蕩器、真空泵、蠕動(dòng)泵、光學(xué)顯微鏡需要定期校驗(yàn)的設(shè)備天平、pH計(jì)、分光光度計(jì)、浮游菌采樣儀、空氣粒子計(jì)數(shù)器需要驗(yàn)證的設(shè)備超凈工作臺(tái)、生物安全柜、溫控設(shè)備、高壓滅菌柜、去熱原烘箱、微生物自動(dòng)鑒別系統(tǒng)、微生物快速檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)備分級(jí)預(yù)修管理-38-標(biāo)準(zhǔn)品管理標(biāo)準(zhǔn)品的種類(lèi)抗生素標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)菌株生物指示劑細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品-39-標(biāo)準(zhǔn)品管理標(biāo)準(zhǔn)品的通用控制來(lái)源保管存儲(chǔ)領(lǐng)用使用銷(xiāo)毀定期抽樣檢查-40-標(biāo)準(zhǔn)菌株傳代方法復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復(fù)壯;轉(zhuǎn)接至平板，培養(yǎng)，得G2;確認(rèn)菌種的純度及理化鑒別挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管G2，同時(shí)挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種W3冷凍保存G2，將工作用菌W3于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后可用于試驗(yàn)；取G2一支，接種于平板和斜面培養(yǎng)基上，制成G3和W3；冷凍保存G3,將生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)種后的G2菌種經(jīng)滅菌處理后丟棄;當(dāng)工作用菌種代數(shù)小于5時(shí)，可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種，如：W3可直接轉(zhuǎn)接為W4;（謹(jǐn)慎采用）重復(fù)上述程序，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止。-41-中國(guó)藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis[CMCC（B）63501]金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus[CMCC（B）26003]生孢梭菌Clostridiumsporogenes[CMCC（B）64941]銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginosa[CMCC（B）10104]大腸埃希菌Escherichiacoli[CMCC（B）44102]白色念珠菌Candidaalbicans[CMCC（F）98001]黑曲霉Aspergillusniger[CMCC（F）98003]-42-歐洲藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株需氧細(xì)菌金黃色葡萄球菌ATCC6538,CIP4.83,NCTC10788,NCIMB9518,NBRC13276枯草芽孢桿菌ATCC6633,CIP52.62,NCIMB8054,NBRC3134銅綠假單胞菌ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118,NBRC13275厭氧細(xì)菌梭狀芽孢桿菌ATCC19404,CIP79.3,NCTC532,ATCC11437,

NBRC14293真菌白色念珠菌ATCC10231,IP48.72,NCPF3179,NBRC1594黑曲霉菌ATCC16404,IP1431.83,IMI149007,NBRC9455-43-美國(guó)藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株需氧細(xì)菌金黃色葡萄球菌ATCC6538,CIP4.83,NCTC10788,NCIMB9518,NBRC13276枯草芽孢桿菌ATCC6633,CIP52.62,NCIMB8054,NBRC3134銅綠假單胞菌1ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118,NBRC13275厭氧細(xì)菌梭狀芽孢桿菌2ATCC19404,CIP79.3,NCTC532,ATCC11437,NBRC14293真菌白色念珠菌ATCC10231,IP48.72,NCPF3179,NBRC1594黑曲霉菌ATCC16404,IP1431.83,IMI149007,NBRC94551銅綠假單胞菌可用藤黃微球菌（kocuriarhizophila）ATCC9341代替。2梭狀芽孢桿菌可用不產(chǎn)芽孢的普通擬桿菌（Bacteroidesvulgatus）ATCC8482代替。-44-生物指示劑對(duì)特定滅菌工藝具有一定耐受性并且能夠定量測(cè)定滅菌效力的微生物制劑。多為芽孢類(lèi)細(xì)菌組成形式孢子條孢子懸浮液自含型生物指示劑-45-生物指示劑的確認(rèn)包裝完整保存在原包裝袋中，未受光、毒性物質(zhì)、過(guò)熱和潮濕的影響標(biāo)簽內(nèi)容全面（適用范圍、有效期、關(guān)鍵參數(shù)）生物指示劑的孢子數(shù)量宜控制在104-109之間復(fù)核數(shù)量應(yīng)在標(biāo)示量的50%-300%之間-46-生物指示劑的確認(rèn)純度形態(tài)特征和生化特性等都應(yīng)與相應(yīng)的菌落形態(tài)一致耐受性(根據(jù)需要及實(shí)驗(yàn)室能力來(lái)定)D值實(shí)測(cè)值與標(biāo)示值間不得過(guò)±20%,各測(cè)定值間差異不得過(guò)±10%-47-培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基質(zhì)量控制培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的貯存培養(yǎng)基建立質(zhì)量控制程序-pH無(wú)菌性靈敏度外觀檢查驗(yàn)證的條件貯存-溫度-有效期按處方/說(shuō)明書(shū)配制-容器-配制用水驗(yàn)證和監(jiān)控滅菌程序-滅菌條件-裝載方式-48-試劑試液的質(zhì)量控制選用適宜的試劑標(biāo)簽內(nèi)容完整配制記錄儲(chǔ)存條件使用期限試劑

試劑名稱(chēng)

試劑批號(hào)

配制過(guò)程及體積

配制人及復(fù)核人-49-傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法驗(yàn)證要素驗(yàn)證試驗(yàn)用挑戰(zhàn)微生物涵蓋范圍廣，包括：Gram+、Gram-、酵母和霉菌控制菌檢查方法要采用相應(yīng)的控制菌生產(chǎn)環(huán)境中常見(jiàn)的分離菌（依檢驗(yàn)?zāi)康亩ǎ┳⒁庠囼?yàn)菌株生理?xiàng)l件的一致性-50-傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法驗(yàn)證要素檢驗(yàn)條件檢驗(yàn)的設(shè)施、設(shè)備、器具和材料驗(yàn)證試驗(yàn)與日常檢驗(yàn)一致樣品的處理培養(yǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)條件-51-快速檢測(cè)方法驗(yàn)證不同微生物檢驗(yàn)類(lèi)型驗(yàn)證參數(shù)參數(shù)定性檢驗(yàn)定量檢驗(yàn)準(zhǔn)確度-+精密度-+專(zhuān)屬性++檢測(cè)限+-定量限-+線性-+范圍-+耐用性++重現(xiàn)性++-52-通用的驗(yàn)證模式用戶需求(即目標(biāo))功能設(shè)計(jì)詳細(xì)設(shè)計(jì)--技術(shù)上如何實(shí)現(xiàn)實(shí)體完成功能試驗(yàn)啟動(dòng)性能試驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)施PQOQIQ設(shè)計(jì)確認(rèn)工廠驗(yàn)收-52--53-快速檢測(cè)系統(tǒng)的性能確認(rèn)耐用性：考查培養(yǎng)時(shí)間和染色時(shí)間的影響重現(xiàn)性：考查不同批次培養(yǎng)基、過(guò)濾膜、試劑的影響準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、定量限、專(zhuān)屬性比較替代方法和藥典方法差異統(tǒng)計(jì)學(xué)工具正態(tài)分布檢驗(yàn)方差分析兩樣本t檢驗(yàn)F檢驗(yàn)形成URS文件的過(guò)程第一步–重新審視當(dāng)前傳統(tǒng)方法-54-檢驗(yàn)量產(chǎn)品是否帶有抑菌性常見(jiàn)污染菌工藝關(guān)注的污染菌培養(yǎng)基的種類(lèi)每天樣品數(shù)每次檢驗(yàn)成本樣品的準(zhǔn)備時(shí)間樣品的培養(yǎng)時(shí)間驗(yàn)證要求對(duì)快速方法的期望時(shí)間污染菌的鑒別要求形成URS文件的過(guò)程第二步–URS文件形成原則與目的區(qū)分強(qiáng)制要求與期望要求提供快速檢測(cè)系統(tǒng)的特定要求服務(wù)于以下過(guò)程供應(yīng)商選擇與確認(rèn)項(xiàng)目風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估形成功能說(shuō)明文件形成硬件與軟件說(shuō)明文件快速系統(tǒng)的確認(rèn)-55-形成URS文件的過(guò)程第三步–URS文件內(nèi)容舉例-56-介紹目的基本信息系統(tǒng)的主要功能技術(shù)要求安全要求外觀和材質(zhì)控制系統(tǒng)包裝和運(yùn)輸文件要求培訓(xùn)要求驗(yàn)證要求售后服務(wù)與維護(hù)要求……-57-微生物的常見(jiàn)控制手段廣義的控制手段滅菌化療消毒防腐-58-潔凈室常見(jiàn)微生物葡萄球菌鏈球菌假單孢菌芽孢桿菌棒狀桿菌微球菌痤瘡丙酸桿菌……

-59-潔凈室常見(jiàn)微生物曲霉菌屬青霉菌屬芽枝霉屬白色念珠菌毛霉菌帚霉菌……

-60-消毒方法化學(xué)方法利用化學(xué)藥物殺滅病原微生物。用于消毒的化學(xué)藥物稱(chēng)為化學(xué)消毒劑。物理方法利用物理因素殺滅或清除病原及其它有害微生物。包括熱力學(xué)、紫外線輻射、電離輻射、超聲波、微波、等離子體方式。-61-消毒效果的影響因素微生物污染程度（種類(lèi)、數(shù)量）消毒劑的種類(lèi)和配方處理劑量（濃度、時(shí)間）作用溫度和相對(duì)濕度

pH值有機(jī)物化學(xué)拮抗物質(zhì)-62-化學(xué)消毒劑的作用機(jī)理作用部位消毒劑細(xì)胞壁甲醛、次氯酸鹽、汞劑細(xì)胞膜，引起細(xì)胞點(diǎn)位勢(shì)變化苯胺類(lèi)和六氯酚類(lèi)細(xì)胞膜的酶，影響電子轉(zhuǎn)運(yùn)途徑六氯酚類(lèi)作用于ATP洗必泰和過(guò)氧乙烯類(lèi)作用于含硫基的酶類(lèi)過(guò)氧乙烯、戊二醛、過(guò)氧化氫、碘劑和汞劑影響細(xì)胞滲透酒精、洗必泰、季銨鹽類(lèi)-63-化學(xué)消毒劑的作用機(jī)理作用部位消毒劑細(xì)胞質(zhì)洗必泰、乙醛、六氯酚類(lèi)、季銨鹽類(lèi)核糖體過(guò)氧化氫、汞劑核酸次氯酸鹽含硫醇基團(tuán)過(guò)氧乙烯、戊二醛、過(guò)氧化氫、汞劑、次氯酸鹽含氨基基團(tuán)過(guò)氧乙烯、戊二醛、次氯酸鹽全面氧化過(guò)氧乙烯、戊二醛、次氯酸鹽-64-三步消毒法清潔避免消毒劑失效，確保消毒劑與微生物的充分接觸清潔劑與消毒劑的兼容性消毒

拖洗法、擦拭法：適用于平整表面噴灑或噴霧法：適用于高處、管道、復(fù)雜設(shè)備清除殘留去除殘留、避免影響工藝過(guò)程確保充分的接觸時(shí)間避免產(chǎn)生二次污染-65-消毒的注意事項(xiàng)清潔流程的方向從最清潔區(qū)域到最臟的區(qū)域從頂部到底部從最關(guān)鍵表面到最不關(guān)鍵的表面使用方式擦拭或噴灑

擦拭方式：格柵式、拉下然后提起式、交叉抹拭、畫(huà)8字形（也稱(chēng)為S型）或單向拖把擦拭方式-66-消毒劑效力驗(yàn)證考慮要點(diǎn)基于消毒劑本身的消毒能力進(jìn)行評(píng)價(jià)選擇合適的試驗(yàn)方案審計(jì)生產(chǎn)/供應(yīng)商-67-消毒劑效力驗(yàn)證驗(yàn)證過(guò)程消毒劑的效力確認(rèn)包括兩方面內(nèi)容，實(shí)驗(yàn)室考察和現(xiàn)場(chǎng)考察現(xiàn)場(chǎng)考察通過(guò)監(jiān)測(cè)清潔/消毒前、后的環(huán)境微生物學(xué)質(zhì)量進(jìn)行的。經(jīng)歷一段時(shí)間的積累后才能用以評(píng)估消毒和清潔程序的數(shù)據(jù)（建議至少三次試驗(yàn)）在最差條件下(如預(yù)防性維修之后)檢測(cè)環(huán)境的污染狀況-68-消毒劑效力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室消毒劑效力確認(rèn)方法懸液定量法載體法硬面測(cè)試法-69-硬面測(cè)試法-70-第四部分案例–思考-71-案例1–檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)微生物檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)有以下三種原因?qū)嶒?yàn)室偏差與生產(chǎn)工藝無(wú)關(guān)的偏差與生產(chǎn)工藝相關(guān)的偏差-72-實(shí)驗(yàn)室偏差調(diào)查示意圖檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)儀器＆設(shè)備人員失誤培養(yǎng)基污染環(huán)境條件培訓(xùn)HEPA操作服更換供應(yīng)商滅菌釜失誤疲憊操作泄漏無(wú)合格證破裂試管-73-無(wú)菌檢查試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性的常規(guī)調(diào)查程序?qū)嶒?yàn)室初步調(diào)查針對(duì)以下因素檢驗(yàn)用設(shè)施設(shè)備與檢驗(yàn)環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、操作或樣品培養(yǎng)中是否有明顯的人為差錯(cuò)陰性對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果是否呈陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)室初步調(diào)查結(jié)論如果有上述一種或幾種情形出現(xiàn)，則定為明顯的實(shí)驗(yàn)室偏差反之，進(jìn)入調(diào)查的第二階段-74-無(wú)菌檢查試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性的常規(guī)調(diào)查程序?qū)嶒?yàn)室深入調(diào)查分離并鑒別污染菌如果是最終滅菌工藝產(chǎn)品，則考查陽(yáng)性污染菌對(duì)滅菌工藝的耐受性審核檢驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)記錄，找出存有潛在偏差可能的實(shí)驗(yàn)步驟回顧滅菌前半成品（或過(guò)濾前藥液）的微生物污染水平對(duì)最終滅菌工藝產(chǎn)品，檢查滅菌釜冷卻用水含菌量數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)室近期相關(guān)數(shù)據(jù)趨勢(shì)分析