柱層析的操作步驟和注意事項(xiàng)

柱層析技巧常說的過柱子應(yīng)當(dāng)叫柱層析分別,也叫柱色譜.我們經(jīng)常應(yīng)用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱.因?yàn)橹值慕?jīng)驗(yàn)成分太多,所以下面我就幾年來過柱的領(lǐng)會(huì)寫些心得,愿望能有所幫忙.柱子可以分為：加壓,常壓,減壓.壓力可以增長(zhǎng)淋洗劑的流淌速度,削減產(chǎn)品收集的時(shí)光,但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù).所以其他前提雷同的時(shí)刻,常壓柱是效力最高的,但是時(shí)光也最長(zhǎng),比方自然化合物的分離,一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的.減壓柱可以或許削減硅膠的應(yīng)用量,感到可以或許節(jié)儉一半甚至更多,但是因?yàn)榇罅康目諝饨?jīng)由過程硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝集）,以及有些比較易分化的器械可能得不到,并且還必須同時(shí)應(yīng)用水泵抽氣（很大的噪音,并且時(shí)光長(zhǎng)）.以前曾大量的過減壓柱,對(duì)它有比較深摯的情感,但是自從測(cè)驗(yàn)測(cè)驗(yàn)了加壓后,就幾乎再也沒動(dòng)過減壓的念頭了.加壓柱是一種比較好的辦法,與常壓柱相似,只不過外加壓力使淋洗劑走的快些.壓力的供給可所以緊縮空氣,雙連球或者吝嗇泵（給魚缸供氣的就行）.不凡是在隨意馬虎分化的樣品的分別中實(shí)用.壓力不成過大,不然溶劑走的太快就會(huì)減低分別后果.小我以為加壓柱在通俗的有機(jī)化合物的分別中是比較實(shí)用的.關(guān)于柱子的尺寸,應(yīng)當(dāng)是粗長(zhǎng)的最好.柱子長(zhǎng)了,響應(yīng)的塔板數(shù)就高.柱子粗了,上樣后樣品的原點(diǎn)就小（反應(yīng)在柱子上就是樣品層比較?。?如許相對(duì)的減小了分別的難度.試想假如柱子十厘米,而樣品就有二厘米,那么分別的難度可想而知,生怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了.而假如樣品層只有0.5厘米,那么各組分就比較隨意馬虎得到完整分別了.當(dāng)然采取粗大的柱子要就義比較多的硅膠和溶劑了,不過這些成底細(xì)對(duì)于產(chǎn)品來說也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說,不過溶劑收受接管重蒸后也就減小了部分糟蹋）.如今見到的柱子徑高比一般在1：5~10,書中寫硅膠量是樣品量的30?40倍,具體的選摘要具體剖析.假如所需組分和雜質(zhì)分的比較開（是指在所需組分rf在0.2?0.4,雜質(zhì)相差0.1以上）,就可以罕用硅膠,用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cmX20cm的柱子）;假如相差不到0.1,就要加大柱子,我以為可以增長(zhǎng)柱子的直徑,比方用3cm的,也可以減小淋洗劑的極性等等.關(guān)于無水無氧柱,實(shí)用于對(duì)氧,水遲鈍,易分化的產(chǎn)品.可以濕柱,也可以干柱.不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次,因?yàn)槿軇┖凸枘z飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分化,畢竟要分別的是遲鈍的東東,當(dāng)心不為過.也是因?yàn)榉謩e的器械比較遲鈍,所以吸收瓶必定要用可密封的,遵守schlenk操縱.至于是加壓.常壓.減壓，隨需而定.因?yàn)槭莝chlenk操縱，所以點(diǎn)板是個(gè)問題,假如樣品是顯色的,恭喜了,不必點(diǎn)板,直接看柱子上的色帶就行了.假如樣品無色,只好準(zhǔn)備幾十個(gè)schlenk瓶,一瓶一瓶的點(diǎn)，不過幾回之后就知道樣品在哪，也就可以省些了.像我以前過一根無水無氧柱，須要六個(gè)schlenk,如今只一個(gè)就能把所要的全收集到.無水無氧柱頂用的比較多的是用氧化鋁作固定相.因?yàn)楣枘z中有大量的羥基袒露在外,很隨意馬虎是樣品分化,不凡是金屬有機(jī)化合物和含磷化合物.而氧化鋁可以做成堿性.中性和酸性的,選擇余地比較大,但是比硅膠要貴些.據(jù)說有個(gè)辦法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相,如許在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒有驗(yàn)證過.哪位做過可以提出來大家參詳參詳.※關(guān)于濕法.干法上樣.濕法省事，一般用淋洗劑消融樣品，也可以用二氯甲烷.乙酸乙酯等，但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了.許多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒緊要.可是有的上樣后在硅膠上又會(huì)析出，這一般都是比較大量的樣品才會(huì)消失，是因?yàn)楣枘z對(duì)樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì)產(chǎn)生，這就應(yīng)當(dāng)先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，假如不克不及重結(jié)晶那就不管它了，直接過就是了，樣品跟著淋洗劑流淌會(huì)消融的.有些樣品消融性差，能消融的溶劑又不克不及上柱（比方DMF,DMSO等,會(huì)跟著溶劑一路走，顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫尾）,這時(shí)就必須用干法上柱了.樣品和硅膠的量有一種說法是1：1,我以為是越少越好,但是要包管在旋干后,不克不及看到顯著的固體顆粒（那解釋有的樣品沒有吸附在硅膠上）.溶劑的選擇.當(dāng)然是最便宜,最安然,最環(huán)保的了.所以大多選用石油醚,乙酸乙酯.文獻(xiàn)中有寫用正己烷的,太貴了,除非不凡須要不要用不然銀子嘩嘩的,流的比淋洗劑還快,不過因?yàn)闃O性很小,有時(shí)照樣非它不成.乙醚也可以用,但是就是隨意馬虎睡覺,重視保持蘇醒別讓溶劑流干了,那樣柱子也就不爽了.二氯甲烷也有效的,但是要知道,它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱進(jìn)程,所以炎天的時(shí)刻經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)朝氣泡,氣象冷的時(shí)刻會(huì)好一些.甲醇,據(jù)說能消融部分的硅膠,所以產(chǎn)品假如想過元素剖析的話要留心,應(yīng)當(dāng)經(jīng)事后繼處理,比方說重結(jié)晶等.其他的溶劑用的相對(duì)較少,要依小我的不合須要選擇了.因?yàn)槟承┰?用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛）,我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的,就要重視這些工業(yè)品的純度是較低的.經(jīng)常可以或許從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì),其他的雜質(zhì)就可想而知了,所以在比較嚴(yán)厲的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸.當(dāng)然過原料時(shí)就可以免除這一步了,橫豎下面還有提純的辦法.別的溶劑在過柱子后最好也收受接管應(yīng)用,一方面環(huán)保,另一方面也能節(jié)儉部分經(jīng)費(fèi),缺陷是要消費(fèi)必定的人工.這里要重視的是,一般在過柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸,石油醚和乙酸乙酯的比例因?yàn)閾]發(fā)度的不合會(huì)導(dǎo)致極性的變更,一般會(huì)使得極性變大,在梯度淋洗時(shí)比較適合,正好極性越來越大了.在過完柱子后,溶劑最后收受接管要采取常壓,因?yàn)樵跍p壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一路出來,常壓時(shí)就會(huì)削減這種現(xiàn)象,假如雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反響那就慘了.關(guān)于操縱問題.1裝柱.柱子下面的活塞必定不要涂潤(rùn)滑劑,會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的,可以采取四氟節(jié)門的.干法和濕法裝柱以為沒什么差別,只要能把柱子裝實(shí)就行.裝完的柱子應(yīng)當(dāng)要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），必定要平均（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來）.書中寫的都是不克不及見到氣泡，我以為在大多半情形下有些吝嗇泡沒太大的影響,一加壓氣泡就全下來了.當(dāng)然假如你裝的柱子老是有氣泡就解釋須要多演習(xí)了.但是柱子更隱諱的是開裂，甭管豎的照樣橫的，都邑影響分別后果，甚至作廢！2加樣.用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層降低至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑，然后俅蚩釗绱肆餃危話閌⑸熬突臼前咨牧??？參加淋洗劑，一開端不要加壓,等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2?4cm就夠了），再加壓，如許防止了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行.3淋洗劑的選擇.感到上要使所需點(diǎn)在rf0.2?0.3閣下的比較好.不要以為在板上爬高了分的比較開，過柱子就用那種極性，假如rf在0.6,即使相差0.2也不隨意馬虎在柱子上離開,因?yàn)橹邮且粋€(gè)多次爬板的狀況,可以經(jīng)由過程公式的比較：0.6/0.8—次的分別度,確定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大.4樣品的收集.用硅膠作固定相過柱子的道理是一個(gè)吸附與解吸的均衡.所以假如樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話,就不隨意馬虎流出.如許就會(huì)產(chǎn)生,后面的點(diǎn)先出,而前面的點(diǎn)后出.這時(shí)可以采取氧化鋁作固定相.別的,收集的試管大小要以樣品量而定,不凡是小量樣品,假如用大試管,可能一根就收到了三個(gè)樣品,wuwu.假如都用小試管那工作量又太大.5最后的處理.柱分后的產(chǎn)品,因?yàn)閼?yīng)用了大量的溶劑,個(gè)中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中,所以假如想送剖析,最好用少量的溶劑洗滌一下,因?yàn)榇蟛糠值碾s質(zhì)是溶在溶劑里的,一洗根本就沒了,須要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶.別的,再過柱的時(shí)刻,有時(shí)會(huì)消失氣泡,一是和應(yīng)用的溶劑有關(guān),假如是易揮發(fā)的溶劑,如乙醚.二氯甲烷等,在室溫稍高的情形下,很