GB/T 23197-2008雞傳染性支氣管炎診斷技術

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜２３１９７—２００８

雞傳染性支氣管炎診斷技術

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２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜２３１９７—２００８

前言

本標準對應于ＯＩＥ《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》（２００４）２．７．６雞傳染性支氣管炎（ａｖｉａｎｉｎｆｅｃ

ｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ），其一致性程度為非等效。在此基礎上，根據國內科研成果增加了反轉錄聚合酶鏈反

應和氣管環(huán)組織培養(yǎng)血清中和試驗，用于病原的鑒定和抗體檢測。

本標準的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本標準由中華人民共和國農業(yè)部提出。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本標準起草單位：中國動物衛(wèi)生與流行病學中心、華南農業(yè)大學。

本標準主要起草人：吳延功、廖明、王志亮、郭霄峰、劉佩蘭、王永玲、孫承英。

Ⅰ

書

犌犅／犜２３１９７—２００８

雞傳染性支氣管炎診斷技術

１范圍

本標準規(guī)定了雞傳染性支氣管炎病毒分離、反轉錄聚合酶鏈反應、微量血凝抑制試驗以及氣管環(huán)

組織培養(yǎng)血清中和試驗等四種診斷方法的技術要求。

本標準適用于雞傳染性支氣管炎的診斷和檢疫。

２臨床診斷

２．１雞傳染性支氣管炎是雞的一種急性、接觸性傳染病，臨床上有多種表現形式，根據病變類型，可將

其分為：呼吸道型、腎型等，但以經典的呼吸道型發(fā)生的最為普遍。

２．２呼吸道型表現為呼吸困難，有羅音或喘鳴音，雛雞感染可引起死亡。

２．３青年雞和產蛋雞感染后，可引起產蛋雞停產或產蛋下降。表現為產蛋雞產蛋下降，產軟皮蛋、砂殼

蛋或畸形蛋，蛋清稀薄如水。

２．４腎型表現為病雞排白色稀糞，脫水，死亡率高。

２．５符合上述臨床癥狀之一者，可以懷疑雞群感染雞傳染性支氣管炎病毒，確診需經實驗室檢驗。

３病原的分離

３．１樣品的采集

３．１．１對于急性呼吸道型的病雞，應采取氣管滲出物；對于剛撲殺的病雞則采取支氣管和肺組織。

３．１．２對于腎型和產蛋下降型的病雞，應采取發(fā)病雞的腎臟或輸卵管。也可從大腸，尤其是盲腸扁桃

體或糞便分離病毒，但從消化道分離到的病毒未必與現流行或發(fā)生的病毒有直接關系。

３．２樣品的處理

３．２．１將病料放在含有１００００ＩＵ／ｍＬ青霉素和１０ｍｇ／ｍＬ鏈霉素的ｐＨ值為７．４的磷酸緩沖鹽水

（ＰＢＳ）內，置冰盒內送往實驗室。ｐＨ值為７．４的ＰＢＳ的配方見附錄Ａ。

３．２．２將病料磨碎，加含抗菌素的ＰＢＳ制成體積分數為２０％的組織懸液，凍融３次，以３０００犵離心

２０ｍｉｎ，取上清液，加入終濃度為１０００ＩＵ／ｍＬ的青霉素和終濃度為１ｍｇ／ｍＬ的鏈霉素，３７℃下作用

１ｈ后用于雞胚接種。

３．３分離培養(yǎng)

３．３．１取病料上清液，接種于５枚９日齡～１１日齡的ＳＰＦ雞胚尿囊腔內，另５枚接種ＰＢＳ，接種量均

為０．２ｍＬ／枚。３７℃孵育。每天照蛋，２４ｈ內死亡的雞胚棄去。收集接種后３ｄ～７ｄ的雞胚尿囊液，

將所有尿囊液混合，用含１０００ＩＵ／ｍＬ青霉素和１ｍｇ／ｍＬ鏈霉素的ＰＢＳ稀釋５倍～１０倍，繼續(xù)在雞

胚內傳代。典型的野毒株通常在雞胚中傳至第２代或第３代時，可見侏儒胚，傳至第３代，某些雞胚可

出現死亡。含毒尿囊液置－６０℃以下可長期保存，也可以凍干４℃保存。

３．３．２將分離物經雞胚傳至３代或３代以上，收獲接種后７ｄ仍存活的雞胚，取胎兒，用剪刀剪除胎兒

體外的附屬物，并用吸水紙吸干胎兒表面的液體。如接種胎兒重量比對照胚最輕胎兒重量少２ｇ以上

者，可初步判定為有病毒感染。

３