生物化學(xué)：6糖代謝紊亂的相關(guān)檢測

第四章糖代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗檢驗醫(yī)學(xué)院臨床生化教研室

李伶2基本內(nèi)容1.基本概念2.血糖測定的常規(guī)要求3.糖化蛋白的檢測4.胰腺分泌激素5.尿蛋白檢測臨床實驗室檢測血糖以及血糖調(diào)節(jié)物、糖化蛋白以及并發(fā)癥相關(guān)的其他代謝產(chǎn)物等，有利于糖尿病及其并發(fā)癥的早期診斷、鑒別診斷、指導(dǎo)治療和評估預(yù)后。1、標(biāo)本推薦以血漿為標(biāo)本分離血漿后盡快測定推薦測定靜脈血漿葡萄糖，采用葡萄糖氧化酶法或己糖激酶法測定葡萄糖表(Glucowatch)：此表比手表略大。每10分鐘自動顯示一次糖量,當(dāng)糖過高或過低時會發(fā)出警告聲。此種結(jié)果雖不如靜脈血糖準(zhǔn)確,反應(yīng)也較血糖遲,但為自動連續(xù)測定,故發(fā)現(xiàn)低血糖或高血糖的機(jī)會比偶爾測定血糖要多。動態(tài)血糖監(jiān)測儀每5分鐘提供一次血糖測量，并能最長能持續(xù)3天。也就是說，該系統(tǒng)能夠每天給出228個量血糖測量值，并最長能夠連續(xù)72小時提供總數(shù)為864個的血糖測量值。測量那些被指尖測量所忽略的血糖信息并能夠揭示出隱藏的血糖狀態(tài)，比如在某些時候出現(xiàn)的高或低血糖。

2.測定方法1896年Reid50ml血漿測定方法分類一、無機(jī)化學(xué)法——氧化還原法二、有機(jī)化學(xué)法——縮合法三、生物化學(xué)法——酶法四、儀器分析法——新技術(shù)和儀器分析法1）無機(jī)化學(xué)法（氧化還原法）

上世紀(jì)初建立的一類經(jīng)典方法，基于葡萄糖在堿性環(huán)境下的烯二醇型結(jié)構(gòu)具有很強(qiáng)的還原性班氏法（Benidict）第一個得到廣泛承認(rèn)與臨床應(yīng)用的方法[原理][評價]1.對標(biāo)本中所有還原性物質(zhì)均敏感2.結(jié)合酶法測定，用于鑒別Glu與其他3.新生兒尿糖測定：班氏法(+)酶法(-)提示新生兒遺傳性碳水化合物代謝?。ㄈ樘?、半乳糖、果糖、戊糖等）福林-吳法（Folin-Wu）又稱磷鉬酸顯色法[原理][評價]1.試劑便宜，來源廣泛，不需特殊儀器操作簡單，精密度基本能滿足臨床需要2.存在較大的非特異性干擾，使測定結(jié)果偏高干擾物如還原性谷胱甘肽、尿酸、肌酐、VitC、果糖、甘露糖、酮體、阿司匹林等還原性物質(zhì)砷鉬酸法（Somogyi-Nelson）

原理類似Folin-Wu法僅將磷鉬酸換成砷鉬酸上述三種方法統(tǒng)稱氧化亞銅法堿性高鐵氰化物法[原理]

黃色無色

[評價]曾用于自動化分析，但特異性差。

肌酐、尿酸可使測定結(jié)果偏高2）有機(jī)化學(xué)法（縮合法）上世紀(jì)50年代起，利用葡萄糖在酸性環(huán)境下的醛型結(jié)構(gòu)具有與多種芳香胺可進(jìn)行縮合反應(yīng)的特點進(jìn)行測定的一類方法。多種芳香胺在酸性溶液中與葡萄糖的醛基縮合成葡萄糖胺，葡萄糖胺經(jīng)脫水與分子重排生成藍(lán)色希夫氏堿(Schiffbase)芳香胺：苯胺、聯(lián)苯胺、對甲基苯甲酸、氨基羥苯等（致癌物）現(xiàn)選用：鄰甲苯胺（O-toluidine,O-T）鄰甲苯胺法（O-T法）[原理][評價]1.特異性較高：一般不與非糖物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，特異性優(yōu)于福林-吳法，但可與己醛糖和戊糖反應(yīng)2.線性范圍較寬：可達(dá)0~22.2mmol/L3.反應(yīng)仍不夠特異；高濃度醋酸的使用和高溫煮沸的反應(yīng)條件，對人與儀器均有害；另外，O-T有毒，尚被懷疑為致癌物質(zhì)。O-T法是作為取代Folin-Wu法向酶法的過渡方法。3.生物化學(xué)法（酶法）全酶法與部分酶法（1）葡萄糖氧化酶法1.氧速率法（oxygen-rate）：GOD-OR法2.比色法（colorimetry）：偶聯(lián)酶催化顯色偶聯(lián)酶：過氧化物酶（peroxidase,POD）

過氧化氫酶，醛脫氫酶等顯色反應(yīng)：GOD-POP法第二步稱Trinder反應(yīng)

【方法學(xué)評價】適用血清/漿、腦脊液樣本，不適用于尿液及全血；第二步特異性較低；可檢測氧的消耗量。Trinder反應(yīng)H2O2+4－氨基安替比林+酚POD醌亞胺+H2OPAP推薦方法[評價]該法準(zhǔn)確度和精密度都能達(dá)到臨床要求，并且操作簡便，適用于常規(guī)檢驗，為我國血糖測定的推薦方法。（2）已糖激酶法

又稱HK法，該法分兩步完成，其測定原理如下：

【方法學(xué)評價】

該法準(zhǔn)確度和精密度高，特異性高，常規(guī)抗凝劑和血清中的常見物質(zhì)，如輕度溶血、脂血、黃疸、氟化鈉、肝素、EDTA和草酸鹽等都不會對本法產(chǎn)生干擾，適用于自動化分析。特異性高。

試劑昂貴，操作條件嚴(yán)格，為葡萄糖測定的參考方法。（3）葡萄糖氧化酶-極譜分析法該法是GOD-POP的改良方法，它以氧電極進(jìn)極譜分析，直接測定葡萄糖氧化酶法第一步反應(yīng)消耗的氧來進(jìn)行定量，摒棄了特異性不高的第二步反應(yīng)。（4）葡萄糖脫氫酶法

（GlucoseDehydrogenase,GD）[原理][評價]該法高度特異，不受各種抗凝劑和血漿中其他物質(zhì)的干擾。制作成固相酶，可用于連續(xù)流動分析，也可用于離心沉淀物的分析。？？？本法高度特異，不受各種抗凝劑和血漿中其他物質(zhì)的干擾。制成固相酶，可用于連續(xù)流動分析，也可用于離心沉淀物的分析。一、空腹血糖（fastingplasmaglucose，F(xiàn)PG檢測方法：指至少8h內(nèi)不攝入含熱量食物后測定的血漿葡萄糖。

空腹血糖水平反映了胰島素分泌能力，其增高與葡萄糖耐量減低是相平行的空腹血糖水平是診斷糖尿病最主要的依據(jù)。?？崭寡撬椒从沉艘葝u素分泌能力，其增高與葡萄糖耐量減低是相平行的空腹血糖水平是診斷糖尿病最主要的依據(jù)。2.應(yīng)用的評價FPG是糖尿病的常用檢測項目，但在2型糖尿病中，高血糖是相對較晚才產(chǎn)生的，因此僅應(yīng)用FPG這個標(biāo)準(zhǔn)將延誤診斷，并對糖尿病人群的流行估計過低。3.檢測方法的評價己糖激酶法、葡萄糖氧化酶法、葡萄糖脫氫酶法二、餐后2h血糖檢測方法監(jiān)測餐后2小時血糖有兩種方法：一種是口服75克無水葡萄糖后做葡萄糖耐量試驗；另一種是吃100克面粉制成的饅頭或方便面(含糖量相當(dāng)于75克無水葡萄糖，也叫饅頭餐試驗)。從吃第一口飯的時間開始計算，然后測量2小時后的血糖值。參考區(qū)間正常人餐后2h血糖＜7.8mmol/L。臨床意義餐后2h血糖是一個非常有價值的糖尿病病情監(jiān)測指標(biāo)：①反映胰島β細(xì)胞的儲備功能②若餐后2h血糖＞11.1mmol/L（200mg/dl），則易發(fā)生糖尿病眼、腎、神經(jīng)等慢性并發(fā)癥③較好地反映進(jìn)食量及使用的降糖藥是否合適餐后血糖升高是心血管疾病死亡的獨立危險因素三、葡萄糖耐量試驗檢測方法包括口服葡萄糖耐量實驗(oralglucosetolerancetest，OGTT)和靜脈葡萄糖耐量實驗（intravenousglucosetolerancetest，IGTT）。在口服或靜脈注射一定量葡萄糖后2h內(nèi)做系列血糖測定，以評價個體的血糖調(diào)節(jié)能力的標(biāo)準(zhǔn)方法，對確定健康和疾病個體也有價值。常用的是OGTT。在口服一定量葡萄糖后2h內(nèi)作系列血漿葡萄糖濃度測定，以評價不同個體對血糖的調(diào)節(jié)能力的一種標(biāo)準(zhǔn)方法。

OGTT在糖尿病的診斷上并非必需，因此不推薦臨床常規(guī)應(yīng)用。OGTT標(biāo)準(zhǔn)方法試驗前3天，受試者每日食物中糖含量不低于150g，且維持正?；顒?，影響試驗的藥物應(yīng)在3天前停用。試驗前應(yīng)空腹10～16小時。坐位取血后5分鐘內(nèi)飲入250ml含75g無水葡萄糖的糖水（妊娠婦女用量為100g；對于小孩，按1.75g/kg體重計算，總量不超過75g），之后，每隔30分鐘取血1次，共4次，歷時2小時。臨床意義（1）診斷妊娠糖尿?。℅DM）（2）診斷糖耐量減退（IGT）（3）有無法解釋的腎病、神經(jīng)病變或視網(wǎng)膜病變，其隨機(jī)血糖<7.8mmol/L，可用OGTT評價。在此時如有異常OGTT結(jié)果，不代表有肯定的因果關(guān)系，還應(yīng)該排除其他疾?。?）人群篩查，以獲取流行病學(xué)數(shù)據(jù)評價OGTT在糖尿病的診斷中并非必需，因此不推薦臨床常規(guī)應(yīng)用。雖然OGTT比FPG更靈敏，但它受多種因素影響且重復(fù)性差。（二）糖化蛋白的檢測糖尿病患者重要的常規(guī)檢查項目，主要用于血糖控制情況、病情及預(yù)后的評估。糖基化：通過非酶促反應(yīng)將糖基加到蛋白質(zhì)的氨基酸基團(tuán)上。血糖測定只代表即刻的血糖水平，提示患者當(dāng)時的身體狀況，糖化蛋白可提供較長時間段的血糖評估，是糖尿病患者疾病控制程度一項良好的指標(biāo)。健康成人血紅蛋白的組成（四）糖化蛋白的檢測1、糖化血紅蛋白（HbA1C）糖化血紅蛋白是指血液中和葡萄糖結(jié)合了的那一部分血紅蛋白。血液中葡萄糖濃度糖化血紅蛋白糖化因紅蛋白水平反映的是在檢測前6-8周內(nèi)的平均血糖水平，是判定糖尿病長期控制的良好指標(biāo)。糖化血紅蛋白(HBA1C)正常4～6％

葡萄糖+血紅Pr→糖化血紅Pr,此反應(yīng)不可逆,待RBC衰老死亡(180天)后分解

血糖增高→HBA1c增高,能反應(yīng)過去6-8周血糖平均水平,是病情長期控制的有效判斷指標(biāo)。（四）糖化蛋白的檢測（四）糖化蛋白的檢測糖化血紅蛋白的測定結(jié)果以百分率表示。HbA1c：非糖尿病患者：3-6%；糖尿病患者：＜8%，糖尿病的并發(fā)癥大大降低；

>9%，說明患者持續(xù)性高血糖，會發(fā)生糖尿病性腎病,動脈硬化,白內(nèi)障等并發(fā)癥，并有可能出現(xiàn)酮癥酸中毒等急性合并癥。多種方法可用于GHb的測定：①根據(jù)電荷差異，可用離子交換層析，高效液相色譜，常規(guī)電泳和等電聚焦電泳等方法：②根據(jù)結(jié)構(gòu)差異，可用親和層析和免疫測定法；③基于化學(xué)分析技術(shù)，可用比色法和分光光度法。不管什么方法，結(jié)果都表示為GHb占總Hb的百分比。臨床意義：反映過去6～8周的平均血糖濃度，可為評估血糖的控制情況提供可靠的實驗室指標(biāo)。HbA1c為新的糖尿病診斷指標(biāo)，診斷標(biāo)準(zhǔn)定為6.5％血糖控制指標(biāo)（HbA1c＜7％）HbA1c為糖尿病患者心血管事件的獨立預(yù)測危險因素評價HbA1c檢測結(jié)果不受存在的變異型血紅蛋白及其衍生物的影響。GHb的形成與紅細(xì)胞的壽命有關(guān)，各種原因引起紅細(xì)胞壽命縮短時，GHb明顯減少；異常血紅蛋白病也會導(dǎo)致GHb改變。HbA1c的檢測方法已標(biāo)準(zhǔn)化、與糖尿病長期并發(fā)癥的相關(guān)性更強(qiáng)，生物變異性小檢測方法血液中的葡萄糖與血清蛋白的N末端發(fā)生非酶促的糖基化反應(yīng)，形成高分子酮胺（ketoamine）化合物，其結(jié)構(gòu)類似果糖胺(fructosamine)，總稱為糖化血清蛋白。由于90％以上糖化血清蛋白是糖化白蛋白（glycatedalbumin,GA，葡萄糖與血清白蛋白鏈內(nèi)第189位賴氨酸結(jié)合），因此GA可以反映糖化血清蛋白的總體水平。五、糖化蛋白的檢測包括糖化血清蛋白與糖化白蛋白五、糖化白蛋白1.檢驗項目【項目檢測依據(jù)】血液中的葡萄糖與血清蛋白的末端發(fā)生非酶促糖基化反應(yīng)，形成高分子酮胺化合物，其結(jié)構(gòu)類似果糖胺，總稱為糖化血清蛋白。

90％以上糖化血清蛋白是糖化白蛋白（glycatedalbumin,GA），故GA可以反映糖化血清蛋白的總體水平。酮胺氧化酶法【檢測原理】【參考區(qū)間】10.8％～17.1％（中國血糖監(jiān)測臨床應(yīng)用指南2011年版）【方法學(xué)評價】本法簡便快捷、精密度高、準(zhǔn)確性好、膽紅素對其干擾較小，可用于自動化生化分析儀。

2.檢測方法基于所帶電荷不同：陽離子交換層析法和電泳法基于糖化基團(tuán)結(jié)構(gòu)不同：親和層析法和免疫學(xué)方法化學(xué)分析技術(shù)：包括比色法和酶法常用的是硫代巴比土酸法和酮胺氧化酶法?！九R床意義】評價短期血糖控制情況；輔助鑒別應(yīng)激性高血壓；篩查糖尿?。篏A≥17.1％可以篩查出大部分未經(jīng)診斷的糖尿病患者【應(yīng)用評價】反映了2~3周血糖的平均水平，是一個短期血糖控制的評價指標(biāo)。非酶促作用使葡萄糖與長壽命蛋白質(zhì)（如膠原）或DNA相連，產(chǎn)生穩(wěn)定的Amadori早期糖化產(chǎn)物。產(chǎn)物經(jīng)一系列分子重排、脫氫和斷裂反應(yīng)，產(chǎn)生不可逆的晚期糖化終末產(chǎn)物（advancedglycationendproduction,AGE）。AGE提供了一種比GHb更長期的糖尿病控制指標(biāo)。

3、糖化終末產(chǎn)物AGE：【臨床意義】AGEs通過影響蛋白質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)的功能，促進(jìn)糖尿病的微血管和大血管病變，參與糖尿病慢性并發(fā)癥、動脈粥樣硬化、尿毒癥、阿爾茨海默病、白內(nèi)障等多種疾病和衰老的發(fā)生、發(fā)展。【應(yīng)用評價】比HbA1c更長期的糖尿病控制指標(biāo)，監(jiān)測長期血糖水平、評估糖尿病并發(fā)癥的程度。六、胰島素（insulin）及C肽（C-peptid）檢測方法胰島β細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核糖核蛋白體首先合成前胰島素原（preproinsulin），很快被酶切去信號肽后，生成胰島素原（proinsulin），貯存在高爾基體的分泌小泡內(nèi)，最后被蛋白水解酶水解成活性胰島素（51個氨基酸殘基）和含31個氨基酸殘基的無活性的C肽（Cpeptide）。胰島素相對分子量為5.8KD，分泌入血后在體內(nèi)的生物半壽期為5～10min，主要為肝臟攝取并降解，少量由腎小球濾過后在近曲小管重吸收和降解。C肽分子量為3.6KD，沒有生物活性，但對保證胰島素的正常結(jié)構(gòu)卻是必須的。雖然胰島素和C肽等摩爾數(shù)分泌入血，但由于C肽的半壽期更長（約35min），因此在禁食后血漿C肽的濃度比胰島素高5～10倍。C肽主要在腎臟中降解，部分以原形從尿液排出。檢測方法利用胰島素和C肽的抗原性，采用免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測。目前有放射免疫分析法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）等。參考區(qū)間空腹胰島素（CLIA法）：4.0～15.6U/L?？崭挂葝u素（ECLIA法）：17.8～173.0pmol/L。C肽（ECLIA法）：250.0～600.0pmol/L。由于各廠商的產(chǎn)品不同以及各地區(qū)的差異，各實驗室應(yīng)建立自己的參考值。臨床意義胰島素測定最主要的臨床用途是：對空腹低血糖患者進(jìn)行評估。確認(rèn)需進(jìn)行胰島素治療的糖尿病患者，并將他們與靠飲食控制的糖尿病患者分開。預(yù)測2型糖尿病的發(fā)展并評估患者狀況，預(yù)測糖尿病易感性。通過測定血胰島素濃度和胰島素抗體來評估胰島素抵抗機(jī)制。臨床意義胰島素測定最主要的臨床用途是：對空腹低血糖患者進(jìn)行評估。確認(rèn)需進(jìn)行胰島素治療的糖尿病患者，并將他們與靠飲食控制的糖尿病患者分開。預(yù)測2型糖尿病的發(fā)展并評估患者狀況，預(yù)測糖尿病易感性。通過測定血胰島素濃度和胰島素抗體來評估胰島素抵抗機(jī)制。葡萄糖刺激胰島素分泌的動態(tài)試驗有利于糖尿病類型鑒別C肽測定的主要用途：主要用于評估空腹低血糖評估胰島素的分泌監(jiān)測胰腺手術(shù)效果評價測定C肽比測定胰島素有更多優(yōu)點：①由于肝臟的代謝可以忽略，所以與外周血胰島素濃度相比，C肽濃度可更好地反映β細(xì)胞功能；②C肽不受外源性胰島素干擾且不與胰島素抗體反應(yīng)。C肽主要通過腎臟排泄，腎病時，血中C肽濃度會升高，同時尿C肽濃度的個體差異大，限制了其作為評價胰島素分泌能力的價值。七、胰島素原（proinsulin）檢測方法是胰島素的前體和主要儲存形式，其生物活性僅為胰島素的10％。正常情況下僅少量的胰島素原（胰島素的3％）進(jìn)入血循環(huán)。但肝臟清除它的能力僅為清除胰島素能力的25％，導(dǎo)致前者的半壽期比后者長2～3倍，約為30min，因此在禁食后血漿胰島素原濃度可達(dá)血漿胰島素濃度的10％～15％。利用胰島素原的抗原性，采用免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測。目前有放射免疫分析法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）等多種方法。參考區(qū)間正常人空腹胰島素原參考范圍是1.11～6.9pmol/L（也有報道為2.1～12.6pmol/L）。各實驗室需建立自己的參考值。臨床意義胰島素原濃度增加見于：胰腺β細(xì)胞腫瘤。罕見的家族性高胰島素原血癥。存在可能與抗體起交叉反應(yīng)的胰島素原樣物質(zhì)。1型糖尿病2型糖尿病妊娠糖尿病評價胰島素原的檢測仍較困難，其原因是：血漿中胰島素原濃度低，難獲得純品，故抗體制備困難；不易獲得胰島素原參考品；多數(shù)抗血清與胰島素和C肽有交叉反應(yīng)（兩者濃度都較高），同時胰島素原轉(zhuǎn)化中間體也會干擾檢測結(jié)果。八酮體的檢測乙酰乙酸、-羥丁酸和丙酮統(tǒng)稱為酮體。是游離脂肪酸在肝臟的氧化代謝產(chǎn)物。（二）酮體的檢測長鏈脂肪酸甘油三酯VLDL入血肝臟酯化轉(zhuǎn)化正常情況下：胰島素缺乏：酯化減弱，酯解增強(qiáng)長鏈脂肪酸氧化加強(qiáng)酮體肝臟（二）酮體的檢測乙酰乙酸、-羥丁酸和丙酮健康人-羥丁酸：乙酰乙酸1：1糖尿病人-羥丁酸：乙酰乙酸6：1酮體含有三種成分，檢測樣本可來自血液和尿液。尿酮的檢測多采用酮體檢查片法（Acetest）和尿酮體試紙條法（Ketostix）作半定量測定。β-羥丁酸的測定方法包括酸氧化比色法、氣相色譜法、酶法和毛細(xì)管電泳法。臨床常用的是酶法。酮體檢查片法（Acetest）、尿中酮體檢查劑法（Ketostix）和Gerhardt’s氯化鐵試驗均可用于體液酮體的測定,但均不能檢測酮體中的β-羥丁酸。參考區(qū)間以丙酮計，血漿酮體定量＜0.05mmol/L（20mg/L）。尿酮體定性為陰性，定量為20～50mg/d。健康成年人血清β-羥丁酸為0.03～0.3mmol/L。臨床意義在未控制的糖尿病中，血液乙酰乙酸堆積，其中大部分轉(zhuǎn)變?yōu)棣?羥丁酸。尿酮體檢測已廣泛用于1型糖尿病的病情監(jiān)測。（目前大多數(shù)尿液酮體試驗僅檢測乙酰乙酸，這將導(dǎo)致實驗檢測結(jié)果與病情不相符的情況出現(xiàn)。）尿酮體陽性還見于饑餓、高脂飲食、嘔吐、腹瀉、脫水、妊娠中毒血癥、甲狀腺中毒癥、消化吸收障礙等。評價測定血液和尿液中酮體的常用方法中，沒有一個方法能與乙酰乙酸、丙酮和β-羥丁酸同時起反應(yīng)。丙酮和乙酰乙酸都有揮發(fā)性，且乙酰乙酸容易分解成丙酮，因此檢查時要盡量用新鮮尿(至少在排尿后兩小時內(nèi))以提高檢出率。緊張、劇烈運動、濃縮尿、低pH值、高色素尿或含有大量甲基多巴代謝物的尿液標(biāo)本可以呈酮體假陽性反應(yīng)。酶法測定β-羥丁酸靈敏度高、速度快、干擾小、適合自動化分析。乳酸通過細(xì)胞膜彌漫進(jìn)入血液后，再入肝，在肝內(nèi)異生為葡萄糖；葡萄糖釋入血液后，又被肌肉攝取，構(gòu)成乳酸循環(huán)。九乳酸和丙酮酸的檢測血漿乳酸的正常值為1.0士0.5mmol／L＜2mmol／L均可視為正常一般認(rèn)為乳酸濃度超過5mmol/L以及pH小于7.25時提示有明顯的乳酸中毒。（三）乳酸和丙酮酸的檢測丙酮酸是糖無氧代謝的產(chǎn)物，臨床上常和乳酸一同測定，并用二者的比值推測循環(huán)衰竭的嚴(yán)重程度，當(dāng)機(jī)體處于無氧代謝狀態(tài)時，丙酮酸被還原為乳酸。測定丙酮酸濃度可用于評價先天代謝紊亂致血清乳酸濃度增加的患者。乳酸／丙酮酸正常應(yīng)為9左右乳酸／丙酮酸，＜25糖異生缺陷乳酸／丙酮酸，≥35細(xì)胞內(nèi)缺氧（三）乳酸和丙酮酸的檢測乳酸、丙酮酸的測定：乳酸：在340nm波長下測定NADH定量乳酸。該法特異性高，操作簡便，為乳酸測定的首選方法。丙酮酸：測定NADH吸光度的下降定量樣品中的丙酮酸。2、乳酸和丙酮酸的檢測乳酸是糖代謝的中間產(chǎn)物，其測定方法有化學(xué)氧化法、酶催化法、電化學(xué)法和酶電極感應(yīng)器法丙酮酸測定方法包括2,4-二硝基苯肼法、乳酸脫氫酶法、高效液相色譜法等。參考區(qū)間不同標(biāo)本乳酸參考值乳酸酸中毒出現(xiàn)于下列情況下發(fā)生：①A型（缺氧型）：常見，與組織氧合作用降低有關(guān)，如休克、低血容量和左心室衰竭；②B型：與某些疾?。ㄈ缣悄虿　⒛[瘤、肝?。?、藥物或毒物（如乙醇、甲醇、水楊酸）或先天代謝紊亂（如甲基丙二酸血癥，丙酮酸血癥和脂肪酸氧化缺陷