實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色

實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色第一頁，共二十三頁，2022年，8月28日革蘭氏染色C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細(xì)菌的染色方法。第二頁，共二十三頁，2022年，8月28日◆用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進(jìn)行初染◆用碘溶液進(jìn)行媒染，其作用是提高染料和細(xì)胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。◆用乙醇或丙酮沖洗進(jìn)行脫色。在經(jīng)歷脫色后仍將結(jié)晶紫保留在細(xì)胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細(xì)菌，而革蘭氏陰性細(xì)菌的結(jié)晶紫被洗掉，細(xì)胞呈無色?！粲靡环N與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對涂片進(jìn)行復(fù)染。例如沙黃，它使原來無色的革蘭氏陰性細(xì)菌最后呈現(xiàn)桃紅到紅色，而革蘭氏陽性細(xì)菌繼續(xù)保持深紫色第三頁，共二十三頁，2022年，8月28日第四頁，共二十三頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)三

細(xì)菌的簡單染色和

革蘭氏染色第五頁，共二十三頁，2022年，8月28日細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色一目的要求二基本原理三實(shí)驗(yàn)材料四無菌操作過程五操作步驟六實(shí)驗(yàn)報(bào)告七思考題第六頁，共二十三頁，2022年，8月28日一目的要求1學(xué)習(xí)制染色片技術(shù)，學(xué)習(xí)簡單染色\革蘭氏染色原理，理解著色機(jī)理。學(xué)習(xí)并掌握無菌操作的技術(shù)。3掌握簡單染色\革蘭氏染色的方法，并能正確染色4鞏固顯微鏡油鏡的使用方法。第七頁，共二十三頁，2022年，8月28日（一）細(xì)菌的簡單染色原理（二）革蘭氏染色基本原理二基本原理第八頁，共二十三頁，2022年，8月28日細(xì)菌細(xì)胞微小，且含水量較多，在普通光鏡下表現(xiàn)為無色透明，不易觀察，所以必須進(jìn)行染色處理，使細(xì)胞著色，便于觀察。簡單染色是使用單一染料染色，可用于觀察細(xì)菌形態(tài)、大小、及排列方式.染色前一般要將細(xì)胞固定，其目的是殺死菌體并使之粘附于玻片上，還可以增強(qiáng)菌體的著色能力。固定有加熱法和化學(xué)法兩種，無論采用何種方法均應(yīng)維持細(xì)胞原有形態(tài)。（一）細(xì)菌的簡單染色原理第九頁，共二十三頁，2022年，8月28日（二）革蘭氏染色基本原理革蘭氏染色是用于細(xì)菌鑒別的一種重要染色方法。它是根據(jù)革蘭氏陽性細(xì)菌、陰性細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、組成的不同而使用一系列的染色處理使之差別顯色。其染色方法是先將細(xì)菌分別用結(jié)晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脫色，再經(jīng)復(fù)染劑復(fù)染。最終被染成紅色的是革蘭氏陰性細(xì)菌；被染成紫色的是革蘭氏陽性細(xì)菌。第十頁，共二十三頁，2022年，8月28日占細(xì)胞壁的10%占細(xì)胞壁的90%第十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日第十二頁，共二十三頁，2022年，8月28日1、細(xì)胞壁

革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁第十三頁，共二十三頁，2022年，8月28日革蘭氏染色與細(xì)胞壁：革蘭氏陽性\陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁對比第十四頁，共二十三頁，2022年，8月28日革蘭氏染色原理：第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色第二步：碘和結(jié)晶紫形成大分子復(fù)合物，分子大，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi)。第三步：酒精脫色，細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)。G+菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色時，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被阻留在細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，因其含脂量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色，蕃紅復(fù)染后呈紅色。第十五頁，共二十三頁，2022年，8月28日1234？第十六頁，共二十三頁，2022年，8月28日三實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌（24h培養(yǎng)）斜面菌種枯草桿菌（16h培養(yǎng)）斜面菌種第十七頁，共二十三頁，2022年，8月28日四無菌操作過程無菌操作：不讓除我們接種的微生物以外

其它微生物侵入的技術(shù)。第十八頁，共二十三頁，2022年，8月28日第十九頁，共二十三頁，2022年，8月28日（一）簡單染色操作步驟1涂片：載玻片、無菌水、斜面菌種、無菌操作、均勻的薄層2干燥：3固定：加熱固定4染色：結(jié)晶紫染1min或蕃紅染2-3min或石炭酸復(fù)紅染1min。5

水洗：6干燥：7鏡檢：低倍鏡觀察以確定目標(biāo)和范圍，再換用油鏡觀察繪圖。

五操作步驟第二十頁，共二十三頁，2022年，8月28日第二十一頁，共二十三頁，2022年，8月28日（二）革蘭氏染色操作步驟1涂片：方法同單染色，然后干燥、固定。2初染：滴加結(jié)晶紫染色1min，后用水沖洗。3媒染：滴加碘液染色1---2min，后用水沖洗，甩盡殘余水4脫色：用95%乙醇沖洗30秒（需要嚴(yán)格控制時間和濃度），然后立即用水沖洗。5復(fù)染：用蕃紅或石炭酸復(fù)紅覆蓋涂片進(jìn)行復(fù)染，蕃紅染2--