實驗果蠅唾腺染色體

實驗果蠅唾腺染色體第一頁，共三十三頁，2022年，8月28日1果蠅的染色體第二頁，共三十三頁，2022年，8月28日2唾腺染色體第三頁，共三十三頁，2022年，8月28日3一、實驗?zāi)康?.觀察果蠅的唾腺染色體形態(tài)特征；2.練習(xí)果蠅幼蟲唾腺分離技術(shù)；3.掌握果蠅唾腺染色體的制片方法。第四頁，共三十三頁，2022年，8月28日4二、實驗材料果蠅三齡幼蟲越肥越好：多加酵母膏，低溫18℃培養(yǎng)第五頁，共三十三頁，2022年，8月28日5三、儀器藥品解剖鏡顯微鏡鑷子、解剖針載玻片、蓋玻片吸水紙生理鹽水(0.7)、1mol/L鹽酸、改良苯酚品紅第六頁，共三十三頁，2022年，8月28日6四、原理果蠅幼蟲期唾腺的細胞核非常大，唾腺染色體比其他細胞染色體大200多倍。它們是通過核內(nèi)有絲分裂形成的多線染色體，是由于重復(fù)分裂后的眾多染色線沒有分開的結(jié)果，一條染色體內(nèi)含有染色體線多達千條以上。一般來說，多線染色體是處于永久性前期中的一種體細胞染色體配對形式。它普遍存在于雙翅目昆蟲某些物種的幼蟲唾腺細胞內(nèi)，是研究唾腺染色體常用的材料。第七頁，共三十三頁，2022年，8月28日7四、原理果蠅的體細胞中有4對染色體。果蠅（三齡）幼蟲唾腺細胞的染色體叫做唾腺染色體。這種染色體比正常的處于有絲分裂期的染色體大得多，因而又稱為巨大（多線）染色體。巨大染色體上有許多橫紋，這些模紋的數(shù)目和位置是相對恒定的。由于果蠅唾腺細胞中的同源染色體兩兩配對時總是緊密結(jié)合在一起，當(dāng)其中一條染色體發(fā)生結(jié)構(gòu)變異時，就很容易被識別出來。因此，果蠅唾腺染色體是觀察染色體形態(tài)、研究染色體結(jié)構(gòu)變異的好材料。第八頁，共三十三頁，2022年，8月28日8四、原理通常認為果蠅唾腺染色體處于體細胞同源染色體的配對狀態(tài)，所以染色體看上去只有半數(shù)(n)。它們的巨大性是染色體多次復(fù)制而不分開的結(jié)果。每條染色體大約有1000～4000條復(fù)制成的染色體細絲組成，因而又叫做多線染色體。第九頁，共三十三頁，2022年，8月28日9果蠅唾腺染色體果蠅唾腺染色體第十頁，共三十三頁，2022年，8月28日10果蠅唾腺染色體第十一頁，共三十三頁，2022年，8月28日11五、實驗步驟1.選取三齡幼蟲2.拉唾腺3.低滲水解4.染色5.壓片6.鏡檢7.永久片的制作第十二頁，共三十三頁，2022年，8月28日12五、實驗步驟1、辨別頭尾選取肥大的果蠅三齡幼蟲作為實驗材料。在一塊潔凈的載玻片的中央滴一滴0.75%的NaCl溶液，將爬到瓶壁上的肥大并行動遲緩的三齡幼蟲放在載玻片上的NaCl溶液中，在放大鏡下辨認幼蟲的頭部和尾部，可以看到幼蟲的頭部有一個小黑點（神經(jīng)節(jié)）。第十三頁，共三十三頁，2022年，8月28日13五、實驗步驟第十四頁，共三十三頁，2022年，8月28日14五、實驗步驟2、幼蟲的解剖將幼蟲置于生理鹽水內(nèi)，一手（左手）持解剖針按住幼蟲末端的1/3處，以固定幼蟲。另一手（右手）持針撳住幼蟲頭部正中，用力向前拉，把頭部從身體拉開，腺體即隨之而出。如果頭部被拉斷，腺體沒有拉出，可以用右手持解剖針從左手的解剖針附近的腹部緩緩向頭部擠壓，這樣也可以壓出唾液腺。唾腺為半透明的小囊狀，低倍鏡下為兩層規(guī)則排列的細胞組成。其上附有白色的脂肪帶，食道兩側(cè)各有一個。找到唾腺后盡可能把腺體上的脂肪剔除。第十五頁，共三十三頁，2022年，8月28日15五、實驗步驟第十六頁，共三十三頁，2022年，8月28日16五、實驗步驟第十七頁，共三十三頁，2022年，8月28日17五、實驗步驟

解剖針解剖針第十八頁，共三十三頁，2022年，8月28日18五、實驗步驟第十九頁，共三十三頁，2022年，8月28日19五、實驗步驟3、染色前處理清除殘體，使載片上只留下唾腺。4、低滲處理往唾液腺上滴一滴0.4%的NaCl溶液，低滲處理2min，使唾液腺膨脹。5、水解用小片吸水紙吸除水分及破碎組織（當(dāng)心切勿將唾液腺吸走）在唾液腺上滴兩滴7%的鹽酸（1mol/LHCl），水解2min（不超過3min）。然后用清水反復(fù)滴洗幾次,洗去鹽酸（一邊滴清水，一邊用吸水紙從材料旁邊吸水），再用吸水紙吸干周圍的水分。第二十頁，共三十三頁，2022年，8月28日20五、實驗步驟第二十一頁，共三十三頁，2022年，8月28日21五、實驗步驟加入鹽酸后的唾腺第二十二頁，共三十三頁，2022年，8月28日22五、實驗步驟6、染色滴上幾滴改良苯酚品紅于唾腺上，染色8~12分鐘。7、壓片在載片上加蓋玻片，蓋片上覆蓋一吸水紙，然后以母指適當(dāng)用力壓片，要求將唾腺細胞核壓破，染色體伸展開來而不破碎為好。第二十三頁，共三十三頁，2022年，8月28日23五、實驗步驟8、顯微鏡下觀察壓好的玻片標本，用顯微鏡可以看到四對染色體，第一對染色體（X-）組成一個長條，第二和第三對各自組成了具有左右兩臂的染色體對，它們都以中部的著絲區(qū)聚集，而第四對染色體很小，分布在著絲區(qū)呈點狀或盤狀。這樣，從壓好的較為模式的片子中便可看到五條彎曲展開的染色體臂（X-、ⅡL、ⅡR、ⅢL、ⅢR），和一個點狀的第四染色體對，它們在著絲區(qū)構(gòu)成染色中心并向四周伸開。第二十四頁，共三十三頁，2022年，8月28日24果蠅唾腺染色體第二十五頁，共三十三頁，2022年，8月28日25果蠅唾腺染色體果蠅唾腺染色體第二十六頁，共三十三頁，2022年，8月28日26五、實驗步驟9、永久片的制作（方法一）（1）使蓋片向下放入盛有45%醋酸+95%酒精（1:1）的培養(yǎng)皿中。一端墊上一玻棒，使玻片稍為傾斜，約過5~10分鐘，可見蓋片與載片分離。用鑷子輕輕取出蓋片于吸水紙上。（2）有材料的一面向上，放入盛有95%酒精+叔丁醇（1:1）的培養(yǎng)皿中三分鐘。（3）換入純叔丁醇中三分鐘。（4）用中性樹膠封片。第二十七頁，共三十三頁，2022年，8月28日27五、實驗步驟9、永久片的制作（方法二）依此將具有叫好圖象的片子移入下列染色缸中：Carnoy固定液（在固定液中的時間以蓋片脫下為標準）100%乙醇，1min100%乙醇，1min二甲苯，5min加一滴加拿大樹膠封片，封膠干后觀察，貼上標簽。第二十八頁，共三十三頁，2022年，8月28日28六、注意事項1.在整個裝片制作過程中應(yīng)防止唾液腺干燥（加生理鹽水，但不可太多，否則幼蟲會漂浮而且活躍，吸水時勿將唾腺一起吸走）。2.為了得到更好的染色體標本，應(yīng)在20~25℃和營養(yǎng)良好的條件下飼養(yǎng)果蠅，這樣可以得到較大的幼蟲。3.染色時間不可過長，否則背景也著色。4.染色完以后，將舊的染色液吸去，加新的染色液，再壓片。5.用搖蚊幼蟲（即魚餌紅蟲子）可以代替果蠅三齡幼蟲做實驗材料。第二十九頁，共三十三頁，2022年，8月28日29七、實驗報告繪出你所觀察到的唾腺和唾腺染色體圖像，注意繪出唾腺細胞排列及唾腺染色體顯示的明暗帶。第三十頁，共三十三頁，2022年，8月28日30八、思考題唾腺染色體有哪些特點？為什么選用三齡蟲？試分析。第三十一頁，共三十三頁，2022年，8月28日31唾腺染色體唾腺染色體salivaryglandchromosomealivarychromosome雙翅類昆蟲唾腺細胞的間期核中所看到的巨型染色體。（1881）首次看到了它的帶狀結(jié)構(gòu)，但到后來，E.Heitz和H.Bauer（1933）以及（1933）才指出它在細胞學(xué)上的意義。小知識第三十二頁，共三十三頁，2022年，8月28日32唾腺染色體唾腺染色體的顯著特征是：（1）形狀為帶狀，寬達5毫微米，長達400毫微米它相當(dāng)于普通染色體的100～150倍；（2）核不分裂，由于染色體不斷復(fù)制，形成了多線性染色體，寬度增加，同時長度也增加，成為巨型染色體；（3）帶的全長幾乎都有明顯的嗜堿性的橫紋，橫紋的寬度有大有小，密