GB/T 19564-2004落葉松種子鑒定實驗方法隨機擴增多態(tài)性DNA法

ICS65.020.20B61中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19564—2004落葉松種子鑒定實驗方法隨機擴增多態(tài)性DNA法Experimentalidentificationmethodforspeciesoflarchsecd-RAPD2004-06-22發(fā)布2004-12-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T19564一2004前本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局提出本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化監(jiān)測與研究中心（黑龍江)黑龍江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王慶貴、徐品、姜雯、李光宇、石紹業(yè)、王衛(wèi)國。

GB/T19564一2004目前,我國林木種子的鑒定多采用感官鑒定、理化水平鑒定等方法。這些方法所需的檢驗周期較長，不具備分子水平鑒定的諸多優(yōu)點。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，特別是20世紀90年代以來，分子生物學(xué)的相關(guān)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用.其檢測對象為DNA大分子—-生物的遺傳基礎(chǔ)。以DNA為檢測對象，具有許多其他檢測水平所不具備的優(yōu)點：首先，可供探測DNA標(biāo)記的數(shù)量可能是無限的·這是同工酶技術(shù)所無法比擬的；其二,DNA分析技術(shù)不像其他技術(shù)那樣隨組織或發(fā)育階段而異，植物體任何部位、任何時期提供的DNA均可用于分析.其檢測結(jié)果都是一樣的：第三.DNA分析不受環(huán)境影響.其變異只源于等位基因DNA序列的變異這種穩(wěn)定性便于揭示品種間的遺傳變異,從而排除了環(huán)境變異所造成的表型變異。基于上述優(yōu)點·DNA分析技術(shù)是農(nóng)、林、牧、漁等品種鑒定的先進方法

GB/T19564一2004落葉松種子鑒定實驗方法隨機擴增多態(tài)性DNA法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了落葉松種子鑒定的具體實驗方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于利用隨機擴增多態(tài)性DNA（RAPD)法對落葉松種子鑒定的實驗過程術(shù)語、定義和縮略語2.1術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)2.1.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreaction一種可以從少量至一個拷貝的特定堿基順序的DNA片斷在體外花費幾個小時即可擴增出數(shù)百萬個分子的酶催化反應(yīng).即DNA合成反應(yīng)。2.1.2隨機擴增多態(tài)性DNArandomamplifiedpolymorphicDNA是以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為基礎(chǔ)，用隨機排列的寡聚脫氧核首酸單鏈作為引物擴增基因組中不同位點的DNA,進而揭示多個位點等位基因間多態(tài)性的一種分子標(biāo)記方法2.1.3核谷酸nucleotide是構(gòu)成核酸的基本單元，由三部分組成：五碳糖、磷酸和環(huán)狀的含氮堿基2.1.4引物Primer一條互補結(jié)合在模板DNA鏈上的短的單鏈·提供3'-0H末端作為DNA合成的起點·延伸合成模板DNA的互補鏈。2.1.5多態(tài)性polymorphism一對引物在兩個或兩個以上不同材料基因組DNA之間擴增，得到數(shù)目不同或長度不同的DNA片斷。2.2縮略語下列縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)RAPD隨機擴增多態(tài)性DNA(RandomAmplifiedPolymorphismDNA)PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction)DNA脫氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid)OD光密度(OpticalDens