GB/T 19564-2004落葉松種子鑒定實驗方法隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA法

ICS65.020.20B61中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19564—2004落葉松種子鑒定實驗方法隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA法Experimentalidentificationmethodforspeciesoflarchsecd-RAPD2004-06-22發(fā)布2004-12-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T19564一2004前本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局提出本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化監(jiān)測與研究中心（黑龍江)黑龍江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王慶貴、徐品、姜雯、李光宇、石紹業(yè)、王衛(wèi)國。

GB/T19564一2004目前,我國林木種子的鑒定多采用感官鑒定、理化水平鑒定等方法。這些方法所需的檢驗周期較長，不具備分子水平鑒定的諸多優(yōu)點。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，特別是20世紀(jì)90年代以來，分子生物學(xué)的相關(guān)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用.其檢測對象為DNA大分子—-生物的遺傳基礎(chǔ)。以DNA為檢測對象，具有許多其他檢測水平所不具備的優(yōu)點：首先，可供探測DNA標(biāo)記的數(shù)量可能是無限的·這是同工酶技術(shù)所無法比擬的；其二,DNA分析技術(shù)不像其他技術(shù)那樣隨組織或發(fā)育階段而異，植物體任何部位、任何時期提供的DNA均可用于分析.其檢測結(jié)果都是一樣的：第三.DNA分析不受環(huán)境影響.其變異只源于等位基因DNA序列的變異這種穩(wěn)定性便于揭示品種間的遺傳變異,從而排除了環(huán)境變異所造成的表型變異?；谏鲜鰞?yōu)點·DNA分析技術(shù)是農(nóng)、林、牧、漁等品種鑒定的先進(jìn)方法

GB/T19564一2004落葉松種子鑒定實驗方法隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了落葉松種子鑒定的具體實驗方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD)法對落葉松種子鑒定的實驗過程術(shù)語、定義和縮略語2.1術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)2.1.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreaction一種可以從少量至一個拷貝的特定堿基順序的DNA片斷在體外花費(fèi)幾個小時即可擴(kuò)增出數(shù)百萬個分子的酶催化反應(yīng).即DNA合成反應(yīng)。2.1.2隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNArandomamplifiedpolymorphicDNA是以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為基礎(chǔ)，用隨機(jī)排列的寡聚脫氧核首酸單鏈作為引物擴(kuò)增基因組中不同位點的DNA,進(jìn)而揭示多個位點等位基因間多態(tài)性的一種分子標(biāo)記方法2.1.3核谷酸nucleotide是構(gòu)成核酸的基本單元，由三部分組成：五碳糖、磷酸和環(huán)狀的含氮堿基2.1.4引物Primer一條互補(bǔ)結(jié)合在模板DNA鏈上的短的單鏈·提供3'-0H末端作為DNA合成的起點·延伸合成模板DNA的互補(bǔ)鏈。2.1.5多態(tài)性polymorphism一對引物在兩個或兩個以上不同材料基因組DNA之間擴(kuò)增，得到數(shù)目不同或長度不同的DNA片斷。2.2縮略語下列縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)RAPD隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RandomAmplifiedPolymorphismDNA)PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction)DNA脫氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid)OD光密度(OpticalDens