GB/T 18935-2003口蹄疫診斷技術

ICS11.220B41一中華人民共和國國家標準GB/T18935—2003口蹄疫診斷技術Diagnostictechniquesforfoot-and-mouthdisease2003-01-10發(fā)布2003-05-01實施華中和人壓發(fā)布國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T18935-2003口蹄疫(food-and-mouthdisease,簡稱FMD)是哺乳動物的一種接觸烈性傳染病，可引起易感偶蹄獸潛在的嚴重經濟損失。被世界動物衛(wèi)生組織CWorldOrganizationforAnimalHealth（英）,OfficeinternationaldesEpizooties(法）.OIE列為A類疾病，我國列為一類動物疫病。FMD病毒有7個血清型·分別為O、A、C、SATI.SAT2、SAT3和Asial。本病臨床上表現為口、舌、唇、鼻、蹄、乳房等部位發(fā)生水泡、破潰形成爛斑。FMD在臨床上不易與其他水泡性疾病(豬水泡病、水泡性疹和水泡性口炎)區(qū)別。本標準的診斷方法參考OIE《診斷試驗和疫苗標準手冊》(2000版)的推薦方法·并結合我國有關動物防疫法.以及相關政策和法規(guī)制定的。在技術上與國際先進技術保持一致。其中病毒中和試驗、液相阻斷-酶聯免疫吸附試驗是國際貿易指定試驗。本標準的附錄A、附錄B和附錄C是規(guī)范性附錄。本標準由中華人民共和國農業(yè)部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所。本標準主要起草人：朱彩珠、盧永干。

GB/T18935-2003口蹄疫診斷技術范圍本標準規(guī)定了口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus.FMDV)的微量補體結合試驗、食道探杯查毒試驗、反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR).病毒中和試驗、液相阻斷-酶聯免疫吸附試驗、病毒感染相關抗原(VIA)瓊脂凝膠免疫擴散（AGID)試驗的技術要求本標準所規(guī)定的試驗技術適用于檢測各種不同樣品中的口蹄疫病毒抗原或抗體微微量補體結合試驗2材料2.1.1樣品采集和抗原制備2.1.1.1樣品的采集、保存和運送的方法和要求見附錄A2.1.1.2抗原制備：在無菌室內將水泡皮或乳鼠胸體用磷酸鹽緩沖液（PBS)洗凈,用滅菌濾紙吸干后稱重。放在滅菌研缽中先剪碎,后加滅菌石英砂研磨。加磷酸鹽緩沖液（PBS)pH7.4)制成1：4懸液。水泡液也以PBS作1：4稀釋，可與組織懸液合并。室溫浸毒2h以上·或4C冰箱過夜.3000r/min離心10min。分離出上清液;58C水浴滅活40min。再3000r/min離心10min。取上清液為待檢抗原2.1.2抗體口蹄疫病毒O、A和亞洲-1型，及豬水泡病病毒(SVDV)豚鼠高免血清。2.1.3補體健康成年公豚鼠新鮮血清。加保存液（Richardson'液)后.可4C保存6個月。使用前滴定效價2.1.4溶血素免抗綿羊紅細胞抗血清，使用前滴定效價2.1.5紅細胸成成年健康綿羊紅血球。。試驗當天制備2.8%工作液和敏化紅細胞。2.1.6主要儀器和器材"U"形底96孔微量滴定板.微量可調移液器及配套尖頭，轉頭經改裝可插入微量板的離心機.光電比色計。2.1.7緩沖液配制方法(見附錄B)2.2預備試驗2.2.12.8%紅細胞懸液的制備將脫纖的(綿羊)紅細胞用VBD洗滌3次。每次加5倍于紅細胞體積的VBD輕搖混勺.1500r/min離心10min。吸去上清液后再加入VBD.反復3次。最后吸取2.8mL紅細胞泥加入盛有97.2mLVBD的三角瓶中,充分混勾。取0.5mL紅細胞懸液;加4.5ml蒸水。對照管加5mL蒸留水。用波長62