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文檔簡介

實驗一一、淋巴細(xì)胞的分離二、細(xì)胞抗原片的制備三、人血清分離

杜聯(lián)峰外周血細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核-巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞紅細(xì)胞血小板一、淋巴細(xì)胞的分離

原理：根據(jù)淋巴細(xì)胞與血液中的其他細(xì)胞存在密度差異（比重差異），利用密度與淋巴細(xì)胞相近且近于等滲的分離液（ficoll液）作密度梯度離心進(jìn)行分離。方法：聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法（Ficoll分離液法）目的：將淋巴細(xì)胞從外周血細(xì)胞中分離出來分離液要求：①對細(xì)胞無毒②基本等滲③有一定比重（根據(jù)所分離物質(zhì)選擇分離液）實驗材料：淋巴細(xì)胞分離液，離心管，刻度吸管，毛細(xì)吸管，抗凝管等。

實驗步驟：1、無菌采外周靜脈血2ml加入抗凝管混勻、5分鐘后加入Hank’s液2ml稀釋血液。2、將抗凝血沿管壁緩慢加入分離液中。3、配平，放入水平離心機(jī)2000rpm離心10分鐘4、用毛細(xì)吸管吸取血漿與分離液處淋巴細(xì)胞，放入刻度離心管中。5、加入Hank’s液至5ml,，2000rpm離心5分鐘。棄去上清，沉淀為淋巴細(xì)胞Ficoll分離液法血漿淋巴細(xì)胞分離液粒細(xì)胞紅細(xì)胞2000r/min20min稀釋的抗凝血淋巴細(xì)胞分層液

淋巴細(xì)胞血漿

分層液稀釋液

紅血球二、淋巴細(xì)胞抗原片制備吹鋪冷風(fēng)吹干冷丙酮固定5~15min冷風(fēng)吹干，密封置－30℃以下低溫保存三、人血清分

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