實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)與分離

生物選修（1）

生物技術(shù)實(shí)踐

IB模塊選修模塊設(shè)計(jì)的指導(dǎo)思想

“選修模塊是為了滿足學(xué)生多樣化發(fā)展的需要而設(shè)計(jì)的，有助于拓展學(xué)生的生物科技視野、增進(jìn)學(xué)生對(duì)生物科技與社會(huì)關(guān)系的理解、提高學(xué)生的實(shí)踐和探究能力?！?/p>

課程設(shè)計(jì)思路中的表述

“選修1生物技術(shù)實(shí)踐”模塊重在培養(yǎng)學(xué)生設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、動(dòng)手操作、收集證據(jù)等科學(xué)探究的能力，增進(jìn)學(xué)生對(duì)生物技術(shù)應(yīng)用的了解。本模塊適于繼續(xù)學(xué)習(xí)理工類專業(yè)或?qū)?shí)驗(yàn)操作感興趣的學(xué)生學(xué)習(xí)。

生物技術(shù)概述1-1什么是生物技術(shù)1-2傳統(tǒng)生物技術(shù)1-3現(xiàn)代生物技術(shù)1-1什么是生物技術(shù)生物技術(shù)=生物工程應(yīng)用自然科學(xué)及工程學(xué)原理，以微生物體、動(dòng)物體、植物體或其組成部分作為生物反應(yīng)器將物料進(jìn)行加工，以提供產(chǎn)品來(lái)為社會(huì)服務(wù)的技術(shù)。1-2傳統(tǒng)生物技術(shù)傳統(tǒng)生物技術(shù)指主要通過(guò)微生物的發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)商品.如:醬、醋、酒、面包、奶酪、酸奶等1-3現(xiàn)代生物技術(shù)一般而言，現(xiàn)代生物技術(shù)可以分成以下五種：一、細(xì)胞工程二、發(fā)酵工程 三、蛋白質(zhì)工程四、酶工程五、基因工程

一、細(xì)胞工程

按照人們的需要和科學(xué)設(shè)計(jì)改變細(xì)胞的遺傳基礎(chǔ)，并通過(guò)細(xì)胞(組織)培養(yǎng)，細(xì)胞雜交(融合)，核移植和胚胎移植等技術(shù)，重組細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物，以改變生物的結(jié)構(gòu)和功能，快速繁殖和培養(yǎng)出人們所需要的新物種的生物工程技術(shù)。細(xì)胞工程包括動(dòng)物細(xì)胞工程和植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程:植物組織培養(yǎng)和植物細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞工程:細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、胚胎移植、核移植、胚胎分割、干細(xì)胞等二、發(fā)酵工程

微生物的無(wú)氧呼吸叫發(fā)酵1.定義：利用DNA重組技術(shù)對(duì)不同生物的遺傳基因，根據(jù)人們的意愿，進(jìn)行基因的切割、拼接及重新組合，再轉(zhuǎn)入生物體內(nèi)，產(chǎn)生出人們所期望的產(chǎn)物或創(chuàng)造出具有新的遺傳特征的生物類型。蛋白質(zhì)工程主要包括了解合成蛋白質(zhì)的DNA編碼序列、蛋白質(zhì)的分離純化、蛋白質(zhì)的序列分析和結(jié)構(gòu)功能分析、蛋白質(zhì)結(jié)晶和結(jié)構(gòu)力學(xué)分析等。三、蛋白質(zhì)工程

酶工程即利用基因工程等手段，改變酶或蛋白質(zhì)的折疊方式、空間結(jié)構(gòu)、催化活性和穩(wěn)定性等四、酶工程五、基因工程

1.定義：又叫DNA重組技術(shù)，即針對(duì)不同生物的遺傳基因，根據(jù)人們的意愿，進(jìn)行基因的切割、拼接及重新組合，再轉(zhuǎn)入生物體內(nèi)，產(chǎn)生出人們所期望的產(chǎn)物或創(chuàng)造出具有新的遺傳特征的生物類型?；蚬こ痰臈l件（1）工具酶（2）基因的分離（3）基因的載體（4）受體

選修1需學(xué)習(xí)的實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)4果汁中的果膠和果膠酶實(shí)驗(yàn)5加酶洗衣粉的使用條件很效果實(shí)驗(yàn)6α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)8果酒及果醋的制作實(shí)驗(yàn)10泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測(cè)定實(shí)驗(yàn)11植物的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離第一部分:微生物的利用一、基礎(chǔ)知識(shí)1微生物2培養(yǎng)基3無(wú)菌技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)操作2微生物的接種技術(shù)1操作步驟微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌和藍(lán)細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)植物特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單,個(gè)體多數(shù)十分微小。通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)。原核生物界原生生物界真菌界病毒界一基礎(chǔ)知識(shí)（一）微生物

1放線菌1、結(jié)構(gòu)：?jiǎn)渭?xì)胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素

微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產(chǎn)生的

應(yīng)用:2病毒的結(jié)構(gòu)2病毒

SARS病毒、禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）病毒的增殖：3真菌如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌青霉4細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌：?jiǎn)渭?xì)胞不分枝的原核微生物。細(xì)菌細(xì)胞微小而透明，通常用適當(dāng)染料染色（革蘭氏染色）后顯微鏡觀察圖1-1常見(jiàn)的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌

B.桿菌C.弧菌細(xì)菌細(xì)胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、擬核，細(xì)胞質(zhì)中又有液泡、儲(chǔ)存性顆粒、核質(zhì)等。細(xì)菌的構(gòu)造圖

細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)胞膜擬核*細(xì)胞壁成分：肽聚糖細(xì)胞壁有哪些功能？①固定細(xì)胞外形；

②保護(hù)細(xì)胞免受外力的損傷；

③阻攔大分子物質(zhì)進(jìn)人細(xì)胞；④使細(xì)胞具有致病性及對(duì)噬菌體的敏感性。傷寒桿菌細(xì)胞壁中含毒素芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異5細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

碳源

氮源

水無(wú)機(jī)鹽生長(zhǎng)因子即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶6細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營(yíng)養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌（autotroph）異養(yǎng)菌（heterotroph）腐生菌寄生菌大部分病原菌了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。

一、課題目標(biāo)：掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無(wú)菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：（二）培養(yǎng)基

培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)液。（1）按物理狀態(tài)來(lái)分：培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等，而液體培養(yǎng)基一般用于工業(yè)生產(chǎn)。（2）按功能來(lái)分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3）按化學(xué)成分來(lái)分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。1.培養(yǎng)基的類型和用途液體培養(yǎng)基：表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)按物理狀態(tài)來(lái)分固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔按物理狀態(tài)來(lái)分半固體培養(yǎng)基：無(wú)動(dòng)力有動(dòng)力(彌散)觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)、厭氧菌的分離和菌種鑒定按物理狀態(tài)來(lái)分選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:

分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞按功能來(lái)分鑒別培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基按功能來(lái)分天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：來(lái)源受限;成分復(fù)雜，影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析;易發(fā)生支原體污染;天然培養(yǎng)基：按化學(xué)成分來(lái)分

根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。

優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對(duì)固定;成本低缺點(diǎn)：缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。合成培養(yǎng)基:按化學(xué)成分來(lái)分血清中含有：①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子；③激素；④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長(zhǎng)因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分

人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。按化學(xué)成分來(lái)分3.培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)一般營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(1)水(2)碳源(3)氮源(4)無(wú)機(jī)鹽其他物質(zhì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如:生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。

2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方

.(2)碳源可作為碳源的物質(zhì)有:含碳無(wú)機(jī)物:、、含碳有機(jī)物：蛋白質(zhì)脂肪酸碳酸鹽碳酸氫鹽糖類（主要）葡萄糖乳糖二氧化碳不同微生物所利用的碳源不同異養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為含碳有機(jī)物（有機(jī)碳）含碳無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)碳）(3)氮源可作為氮源的物質(zhì)有:含氮無(wú)機(jī)物：、、、含氮有機(jī)物：蛋白胨牛肉膏尿素固氮微生物所利用的氮源是氮?dú)獍睔庀跛猁}氨鹽氮?dú)?培養(yǎng)基配制原則：營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)目的要明確PH要適宜（三）無(wú)菌技術(shù)1.無(wú)菌技術(shù)的概念

無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。（1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；（3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過(guò)程要無(wú)菌操作

（１）消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過(guò)程。區(qū)分為高程度消毒（High-levelDisinfection）、中程度消毒（Intermediate-levelDisinfection）、低程度消毒（Low-levelDisinfection）三種方式。2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

消毒1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min如牛奶的消毒3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(2)消毒的方法：滅菌概念：使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。方法：a

灼燒滅菌b

干熱滅菌c

高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌微生物的接種工具(接種環(huán)、接種針)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒注意適用范圍干熱滅菌

160－170℃；1－2h能耐高溫的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌100kPa121℃15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌

最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。而培養(yǎng)皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。

大腸桿菌的培養(yǎng)和分離菌種保存培養(yǎng)基的配制滅菌超凈工件臺(tái)倒平板接種液體培養(yǎng)劃線分離培養(yǎng)3.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手

答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。旁欄思考二、實(shí)驗(yàn)操作1制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基2純化大腸桿菌3將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h和24h后，觀察并記錄二、實(shí)驗(yàn)操作

1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1．計(jì)算、稱量2．溶化3．調(diào)pH：pH7．6

4．過(guò)濾：這一步可以省去。5．分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。6．加塞7．包扎操作步驟8．滅菌:

將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。9．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種.10．無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。倒平板技術(shù)1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問(wèn)題討論

答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？

答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。2、純化大腸桿菌接種方法有：劃線分離法和涂布分離法劃線分離法:通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.在數(shù)次畫(huà)線后,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體,這就是菌落.微生物的接種技術(shù)問(wèn)題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？

答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。涂布分離法純種的菌種稀釋一般采取最簡(jiǎn)單常規(guī)的稀釋涂布平板法。將菌種用接種環(huán)蘸取，放入培養(yǎng)液內(nèi)進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)即可。

涂布分離法(1)系列稀釋操作:涂布平板操作接種微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)四、課題成果評(píng)價(jià)

（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣?！镜淅馕觥坷?．關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽D.無(wú)機(jī)氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于