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第2章細(xì)胞工程第1節(jié)植物細(xì)胞工程從社會(huì)中來“其芽葺葺,其葉青青,猶綠衣郎,挺節(jié)獨(dú)立,可敬可慕。迨夫花開,凝晴滾露,萬態(tài)千妍,薰風(fēng)自來,四坐芬郁,豈非入蘭室乎!豈非有國香乎!”這是我國歷史上第一部蘭譜——《金漳蘭譜》(宋.趙時(shí)庚)中對(duì)蘭花的一段描述。從古至今,我國人民都把蘭花看作高潔、典雅的象征,很多人喜歡養(yǎng)蘭花。但是,蘭花種子通常發(fā)育不全,在自然條件下萌發(fā)率極低;傳統(tǒng)分株繁殖的方法又存在繁殖周期長、繁殖率低等問題,如果靠自然繁殖,蘭花的價(jià)格可想而知了。如何能讓名貴的蘭花大量、快速地繁殖,從而走入尋常百姓家呢?一植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)一、細(xì)胞工程1.概念:應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)等多學(xué)科的原理和方法,通過細(xì)胞器、細(xì)胞或組織水平上的操作,有目的地獲得特定的細(xì)胞、組織、器官、個(gè)體或其產(chǎn)品的一門綜合性的生物工程。2.分類:依據(jù)操作對(duì)象分植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程。二、植物組織培養(yǎng)技術(shù)1.細(xì)胞的全能性(1)定義:細(xì)胞經(jīng)分裂和分化后,仍然具有產(chǎn)生完整生物體或分化成其他各種細(xì)胞的潛能。(2)在生長發(fā)育過程中,細(xì)胞不能表現(xiàn)出全能性的原因:在特定的時(shí)間和空間條件下,細(xì)胞中的基因會(huì)選擇性地表達(dá)。2.植物組織培養(yǎng):(1)概念:將離體的植物器官、組織或細(xì)胞等,培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上,給予適宜的培養(yǎng)條件,誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù)。(2)植物組織培養(yǎng)的流程:①接種外植體②誘導(dǎo)愈傷組織③誘導(dǎo)生芽④誘導(dǎo)生根⑤移栽成活再分化:愈傷組織重新分化成根、芽等器官的過程。外植體:用于植物組織培養(yǎng)的離體的植物器官、組織或細(xì)胞。愈傷組織:細(xì)胞排列疏松且無規(guī)則、高度液泡化、不定形的薄壁組織團(tuán)塊。脫分化:已經(jīng)分化的細(xì)胞,經(jīng)過誘導(dǎo),失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過程。脫分化再分化菊花的組織培養(yǎng)探究·實(shí)踐消毒接種既要考慮消毒效果又要考慮植物的耐受力注意菊花莖段插入方向(形態(tài)學(xué)下端插入培養(yǎng)基)分割解剖刀使用前后均需滅菌菊花的組織培養(yǎng)探究·實(shí)踐移栽培養(yǎng)脫分化,一般不要光照再分化,每日需要適當(dāng)時(shí)間和強(qiáng)度的光照培養(yǎng)既要充分清洗根系表面培養(yǎng)基,又不能傷及根系1.植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ):植物細(xì)胞全能性。2.植物組織培養(yǎng)的條件:①離體;②無菌;③培養(yǎng)基;④適宜的培養(yǎng)條件。3.體現(xiàn)細(xì)胞全能性的條件核心歸納材料離體的細(xì)胞、組織或器官培養(yǎng)基種類齊全、比例合適的營養(yǎng)物質(zhì)及一定比例的植物激素外界條件①無菌操作;②光照:誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)一般不需要光照,再分化時(shí)需要光照4.生長素和細(xì)胞分裂素用量的比例對(duì)植物細(xì)胞發(fā)育方向的影響生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值結(jié)果比值高有利于根的分化,抑制芽的形成比值低有利于芽的分化,抑制根的形成比值適中促進(jìn)愈傷組織的形成三、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)1.概念:將不同來源的植物體細(xì)胞,在一定條件下融合成雜種細(xì)胞,并把雜種細(xì)胞培育成新植物體的技術(shù)。2.過程番茄——馬鈴薯想象圖光學(xué)顯微鏡下的煙草葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體(放大約200倍)在進(jìn)行體細(xì)胞雜交之前,必須先利用纖維素酶和果膠酶去除這層細(xì)胞壁,獲得原生質(zhì)體。2.過程A細(xì)胞B細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體正在融合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁愈傷組織雜種植株移栽后的植株植物B細(xì)胞去除細(xì)胞壁A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體誘導(dǎo)融合融合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞脫分化愈傷組織再分化雜種植株植物A細(xì)胞(融合完成的標(biāo)志)(2)人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法①物理法:電融合法、離心法等。②化學(xué)法:聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法等。3.植物體細(xì)胞雜交的原理原生質(zhì)體融合的過程利用了細(xì)胞膜的流動(dòng)性,雜種細(xì)胞發(fā)育成雜種植株利用了植物細(xì)胞的全能性。4.意義:打破生殖隔離、實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種,培育植物新品種。思考·討論植物體細(xì)胞雜交技術(shù)1.A種原生質(zhì)體與B種原生質(zhì)體融合后,有哪幾種類型(只考慮兩兩融合)?而我們需要的是哪種類型?所以原生質(zhì)體融合后,我們要進(jìn)行怎樣的處理?有3種類型:AA、BB、AB;我們需要的是AB;因此要對(duì)融合后的原生質(zhì)體進(jìn)行篩選。2.若A細(xì)胞具有2x條染色體,2個(gè)染色體組,基因型為Aabb。B細(xì)胞含有2y條染色體,2個(gè)染色體組,基因型為ccDd,則通過植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得的新植株的染色體條數(shù):
;染色體組數(shù):
個(gè);基因型:
;屬于可遺傳變異類型中的
。2x+2y4AabbccDd染色體數(shù)目變異植物體細(xì)胞雜交與植物組織培養(yǎng)的比較1.原理(1)植物體細(xì)胞雜交的原理:(2)植物組織培養(yǎng)的原理:2.過程植物體細(xì)胞雜交包括原生質(zhì)體融合和植物組織培養(yǎng)等過程。3.繁殖方式植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交都屬于無性繁殖;并且后者還能打破生殖隔離,實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交。思考·討論①細(xì)胞膜的流動(dòng)性;②植物細(xì)胞的全能性。植物細(xì)胞的全能性。二植物細(xì)胞工程的應(yīng)用一、植物繁殖的新途徑1.快速繁殖(1)概念:用于快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù),也叫作微型繁殖技術(shù)。(2)特點(diǎn)①高效、快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量鳘殖②無性繁殖,保持優(yōu)良品種的遺傳特性③可實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)(3)實(shí)例:一些優(yōu)良的觀賞植物、經(jīng)濟(jì)林木、無性繁殖作物和瀕危植物等都實(shí)現(xiàn)了利用快速繁殖技術(shù)來提供苗木。甘蔗、桉樹和鐵皮石斛等試管苗的生產(chǎn),已形成一定規(guī)模。2.作物脫毒(1)選材①部位:植物頂端分生區(qū)附近(如莖尖)。②原因:病毒極少,甚至無病毒。(2)優(yōu)點(diǎn):提高作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。(3)實(shí)例:采用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)脫去病毒,已在馬鈴薯、草莓、大蒜、甘蔗、菠蘿和香蕉等許多作物上獲得成功。脫毒馬鈴薯田和被病毒感染的未脫毒的馬鈴薯葉片(左上)繁殖新途徑取材優(yōu)點(diǎn)技術(shù)快速繁殖(微型繁殖)取材廣泛①高效、快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖;②保持優(yōu)良品種的遺傳特性植物組織培養(yǎng)作物脫毒頂端分生區(qū)附近獲得高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的無病毒植物比較兩種植物繁殖新途徑二、作物新品種的培育1.單倍體育種(1)原理:細(xì)胞的全能性和染色體變異。(2)過程:花藥(或花粉)單倍體植株人工誘導(dǎo)染色體加倍純合二倍體植株優(yōu)良品種。單倍體純合二倍體優(yōu)良品種選擇人工誘導(dǎo)染色體加倍離體培養(yǎng)花藥花粉(4)實(shí)例①世界上第一個(gè)單倍體作物新品種——單育1號(hào)煙草。②單倍體育種與常規(guī)育種相結(jié)合的新品種:水稻、玉米、油菜、甘藍(lán)和甜椒等。(3)優(yōu)點(diǎn)①子代是能穩(wěn)定遺傳的純合子。②極大地縮短了育種的年限。③是進(jìn)行體細(xì)胞誘變育種和研究遺傳突變的理想材料。2.突變體的利用(1)原理:在植物的組織培養(yǎng)過程中,由于培養(yǎng)細(xì)胞一直處于不斷增殖的狀態(tài),因此它們?nèi)菀资艿脚囵B(yǎng)條件和誘變因素(如射線、化學(xué)物質(zhì)等)的影響而產(chǎn)生突變。(2)利用:篩選出有用的突變體,培育新品種。如培育抗病、抗鹽、高產(chǎn)以及蛋白質(zhì)含量高的突變體。(3)實(shí)例:抗花葉病毒的甘蔗、抗鹽堿的煙草等。3.細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)(1)次生代謝物①定義:植物代謝產(chǎn)生的,一般認(rèn)為不是植物基本生命活動(dòng)所必需的產(chǎn)物。②本質(zhì):小分子有機(jī)化合物,如酚類、萜類和含氮化合物等。③作用:在植物抗病、抗蟲等方面發(fā)揮作用,還是藥物、香料和色素等的重要來源。(2)技術(shù):植物細(xì)胞培養(yǎng),指在離體條件下對(duì)單個(gè)植物細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù)。(3)實(shí)例:人參、三七、紫草和紅豆杉的細(xì)胞產(chǎn)物都已實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)。(4)優(yōu)勢(shì):不占用耕地,幾乎不受季節(jié)、天氣等的限制,因此對(duì)于社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、環(huán)境保護(hù)具有重要意義。植物組織培養(yǎng)和植物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)目的獲得植物體獲得細(xì)胞產(chǎn)物原理植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖過程應(yīng)用快速繁殖、作物脫毒、單倍體育種等細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn),如紫草寧、人參皂苷、紫杉醇等核心歸納四種育種方法的比較核心歸納育種方法原理
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