【課件】1.2微生物的培育技術及應用（二 微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)）課件高二下學期生物人教版選擇性必修3

自然界中微生物數(shù)量繁多，種類龐雜，要想從中分離出需要的特定微生物并不容易，尤其當要分離的微生物在混合的菌群中不是優(yōu)勢種群時，僅通過一般的平板劃線法或稀釋涂布平板法很難實現(xiàn)。該怎么辦呢？二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)本節(jié)聚焦1.怎樣運用生物與環(huán)境相適應的觀點來解釋選擇培養(yǎng)的原理？2.如何通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方來有目的地培養(yǎng)某種微生物？3.測定微生物數(shù)量的常用方法有哪些？二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)資料1973年，科學家從美國黃石國家公園的熱泉中篩選出水生棲熱菌(Thermusaquaticus)，進而從這種菌中提取出耐高溫的DNA聚合酶。這種酶目前已被廣泛用于體外擴增DNA片段的聚合酶鏈式反應(PCR)。提示1：這是因為水生棲熱菌能在70~80℃的高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存。提示2：實驗室中微生物的篩選，也可以應用同樣的原理，即人為提供有利于目的菌生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度和pH等)，同時抑制或阻止其他微生物的生長。討論1.為什么水生棲熱菌能從熱泉中被篩選出來呢？2.以上例子給我們在分離純化微生物帶來什么啟示？二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。（一）選擇培養(yǎng)基1.概念二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)類型條件分離得到的菌種（1）改變培養(yǎng)條件（2）添加某種化學物質(zhì)（3）營養(yǎng)缺陷70～80℃的高溫水生棲熱菌（一）選擇培養(yǎng)基2.類型加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌高濃度食鹽金黃色葡萄球菌不加碳源不加氮源自養(yǎng)型微生物固氮菌培養(yǎng)基中加氨芐青霉素沒有氨芐青霉素抗性的細菌具有氨芐青霉素抗性的菌落培養(yǎng)基應有菌落沒有氨芐青霉素抗性的細菌被淘汰怎樣選擇出抗氨芐青霉素能力的細菌?（一）選擇培養(yǎng)基二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)基配方的設計

尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化學性質(zhì)穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥。尿素施入土壤后，會被土壤中的某些細菌分解成NH3，再被轉(zhuǎn)化為NO3-、NH4+等被植物吸收。而這些細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成脲酶，脲酶催化尿素分解產(chǎn)生NH3，NH3可以作為細菌生長的氮源。

討論：1.如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設計？2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點和不同點？提示：設計一種選擇培養(yǎng)基,用尿素作為唯一氮源,可以將分解尿素的細菌分離出來。。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)基配方的設計

尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化學性質(zhì)穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥。尿素施入土壤后，會被土壤中的某些細菌分解成NH3，再被轉(zhuǎn)化為NO3-、NH4+等被植物吸收。而這些細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成脲酶，脲酶催化尿素分解產(chǎn)生NH3，NH3可以作為細菌生長的氮源。

討論：1.如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設計？2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點和不同點？提示：這種培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比，只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其他營養(yǎng)成分基本相同。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)基配方的設計牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基一

討論1.從物理性質(zhì)看兩種培養(yǎng)基屬于哪類？依據(jù)是什么？2.從用途上來講，哪個屬于選擇培養(yǎng)基？將得到何種細菌？3.兩種培養(yǎng)基中共有哪些成分？哪些作為碳源、氮源？培養(yǎng)基二二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)基配方的設計牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基一

討論1.從物理性質(zhì)看兩種培養(yǎng)基屬于哪類？依據(jù)是什么？培養(yǎng)基的主要用途是什么？培養(yǎng)基二提示：都屬于固體培養(yǎng)基。依據(jù)是添加了凝固劑瓊脂，且比例為1.5%-2%。培養(yǎng)基的主要用途是分離、鑒定、計數(shù)。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)基配方的設計牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基一

討論2.從用途上來講，哪個屬于選擇培養(yǎng)基？將得到何種細菌？培養(yǎng)基二提示：培養(yǎng)基二屬于選擇培養(yǎng)基；其可獲得能分解尿素的微生物。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)基配方的設計牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基一

討論3.兩種培養(yǎng)基中共有哪些成分？哪些作為碳源、氮源？培養(yǎng)基二提示：共有成分：碳源、氮源、無機鹽、水培養(yǎng)基一的碳源為_______，氮源為_______；培養(yǎng)基二的碳源為_______，氮源為_______；牛肉膏蛋白胨葡萄糖尿素二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

由以上分析，可知如何分離土壤中能分解尿素的細菌，然則，可否能估算出1g土壤中的有多少分解尿素的細菌呢？要如何解決？提示：不能，需要對土壤進行適當?shù)奶幚硪约翱茖W的測定微生物數(shù)量的方法。由于土壤中細菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的細菌的出培養(yǎng)物，必須對土壤進行充分稀釋，然后再將菌液涂布在制備好的選擇培養(yǎng)基上，也就是要采用稀釋涂布平板法。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)1.方法應采用稀釋涂布平板法。2.方法概述由于土壤細菌的數(shù)量龐大，要想得到特定微生物的純培養(yǎng)物，必須要對土壤進行充分稀釋，然后再將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上。兩個基本操作：梯度稀釋和涂布平板。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)3.實驗的具體操作（2）土壤取樣

從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。

取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。（1）制備培養(yǎng)基制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)（3）樣品梯度稀釋3.實驗的具體操作在火焰旁稱取土壤10g，加入90ml無菌水中，搖勻，制成稀釋10倍的土壤菌液。

分別取1ml上清液，加入盛有9ml無菌水的試管中，制成不同稀釋倍數(shù)的菌液。取6支試管，分別加入9ml無菌水。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)3.實驗的具體操作（3）樣品梯度稀釋1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1049mL無菌水1ⅹ1090mL無菌水1mL1mL1mL1mL1mL1mL10g二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)3.實驗的具體操作（4）取樣涂布平板①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ104②取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8-10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻

待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d，在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的單菌落。（二）微生物的選擇培養(yǎng)3.實驗的具體操作（5）培養(yǎng)與觀察二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)3.實驗的具體操作放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)1～2d（5）培養(yǎng)與觀察稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對照恒溫培養(yǎng)箱二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)

培養(yǎng)時要將一個未接種的培養(yǎng)基和一個已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)，為什么？未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長很關鍵，如果無菌落生長，說明了什么？提示：培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對照。未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫一段時間后。如果無菌落生長，說明培養(yǎng)基制備成功、合格，未受到污染。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)3.實驗的具體操作二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)注意事項：1.10g土樣加入盛有90mL無菌水中后，已稀釋10倍，在計算時，不要忽略；2.由于使用的是選擇培養(yǎng)基，所以一般情況下，獲得的單菌落即目的菌，但因為有些微生物可以利用目的菌的代謝產(chǎn)物來生長繁殖，所以還需要進一步驗證；3.過程中所有操作都應在酒精燈火焰旁進行；4.將涂布器從酒精中取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒；不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。常用微生物分離方法比較比較平板劃線法稀釋涂布平板法工具接種環(huán)涂布器原理在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細菌細胞繁殖而來的肉眼可見的細胞群體，即菌落在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細菌細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落特點方法簡單，但不適宜計數(shù)單菌落更易分開，可以計數(shù)，但操作復雜結(jié)果共同點使培養(yǎng)基上形成由單個細菌細胞繁殖而來的子細胞群體——菌落二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)問：以上兩張圖分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法培養(yǎng)細菌的結(jié)果。如果要對菌落進行計數(shù)，則哪種方法可行？為什么？得到的細菌數(shù)量是確切的細菌數(shù)量嗎？二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（三）微生物的數(shù)量測定1.間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法（1）原理

當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對照二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（三）微生物的數(shù)量測定1.間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法（2）計數(shù)原則①一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板計數(shù)。②在同一稀釋度下，應至少對3個平板進行重復計數(shù)，然后求出平均值。③適當?shù)南♂尪取⑼坎际欠窬鶆蚴浅晒y(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵。稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對照二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（三）微生物的數(shù)量測定1.間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法（3）結(jié)果分析①統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少；②統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。原因：當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（三）微生物的數(shù)量測定1.間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法（4）計算公式每g樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×MC代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)；M代表稀釋倍數(shù)。

例1.某同學在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每g樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL)()A.2.34×108B.2.34×109

C.234D.23.4B二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（三）微生物的數(shù)量測定1.間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法（5）使用范圍

可以用來測定土壤、水、食品等樣品中的細菌、酵母菌、芽孢和孢子等的數(shù)量，但不適于測定樣品中的放線菌、絲狀真菌等絲狀體微生物的數(shù)量。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（三）微生物的數(shù)量測定2.直接計數(shù)法（1）計數(shù)板計數(shù)法（2）比濁法血細胞計數(shù)板和細菌計數(shù)板二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)提出問題作出假設設計實驗實驗思路預測實驗培養(yǎng)液中酵母菌種群的數(shù)量是怎樣隨時間變化的？①培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量一開始呈“______”型增長；②隨著時間推移，由于營養(yǎng)物質(zhì)的______、有害代謝產(chǎn)物的__________、pH的_________，酵母菌數(shù)量呈_________型增長。J消耗積累改變S自變量：________________________因變量：________________________無關變量：_______________________時間酵母菌數(shù)量培養(yǎng)液的體積等培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗進行實驗實驗結(jié)果實驗結(jié)論培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路1.如何計數(shù)？如何計算？2.從試管中析出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，為什么要將試管輕輕震蕩幾次？3.實驗需要設置對照嗎？為什么？4.需要重復實驗嗎？5.怎樣設計表格記錄結(jié)果？6.如果一個小方格內(nèi)酵母菌數(shù)過多？難以數(shù)清，應采取怎樣的措施？7.對于壓在小方格界限上的酵母菌，應當怎樣計數(shù)？1.如何計數(shù)？如何計算？酵母菌培養(yǎng)液（1）血細胞計數(shù)板

（2）抽樣檢測法一定體積的培養(yǎng)液稀釋培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路（1）血細胞計數(shù)板

培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路（1）血細胞計數(shù)板

計數(shù)池計數(shù)室1mm0.1mm

每塊計數(shù)板由H形凹槽分為兩個同樣的計數(shù)池。每個計數(shù)池分為9個大方格，其中間的一大方格又稱為計數(shù)室，微生物的計數(shù)就在此大方格中進行。

每個計數(shù)室面積1mm2，液體高度0.1mm，所含液體體積為0.1mm3。培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路計數(shù)室（1）血細胞計數(shù)板

16個中方格25個中方格25個小方格16個小方格16×25一個計數(shù)室有小方格：400，每個小方格的面積：1/4000mm2。25×16每個計數(shù)室（大方格）共4000個小方格，總體積為0.1mm3。培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路每個計數(shù)室（大方格）共400個小方格，總體積為0.1mm3。16個中方格25個中方格16個小方格25個小方格（1）血細胞計數(shù)板

培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路思考1.如何對培養(yǎng)液進行稀釋？1ⅹ101ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ104培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路對樣方的計數(shù)原則是2.如何統(tǒng)計結(jié)果思考培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路（1）血細胞計數(shù)板

1.規(guī)格：每個計數(shù)室（大方格）共400小格（16或25個中方格），其面積是1mm2，總體積為0.1mm3。2.計數(shù)：方格內(nèi)+相鄰兩邊及頂角（取多個方格求平均值）。3.計算酵母菌細胞個數(shù)/mL=每個小方格平均細胞數(shù)×400×稀釋倍數(shù)10-40.1mm3=0.1×10-3cm3=10-4mL培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路16個中方格25個中方格16個小方格25個小方格（1）血細胞計數(shù)板

酵母菌細胞個數(shù)/mL=每個中方格平均細胞數(shù)×1610-4×稀釋倍數(shù)25酵母菌細胞個數(shù)/mL=每個小方格平均細胞數(shù)×40010-4×稀釋倍數(shù)培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路（1）血細胞計數(shù)板

培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路（2）抽樣檢測法培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路（2）抽樣檢測法1.將蓋玻片放在計數(shù)室上；2.吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行深入，多余的濾液用濾紙吸去；3.靜置片刻，待酵母菌全部沉降到計數(shù)室底部，將血細胞計數(shù)板置于載物臺上夾穩(wěn)；4.觀察并計數(shù)一個小方格內(nèi)的酵母菌數(shù)量，估算試管中酵母菌的總量。（方格內(nèi)及相鄰兩邊）（取幾個方格，然后求均值）培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路1.若先將培養(yǎng)液滴在計數(shù)板上，再蓋上蓋玻片，則實驗結(jié)果_______（填“偏大、偏小或不變”）；2.若酵母菌未全部沉降到計數(shù)室底部就觀察計數(shù)，則實驗結(jié)果_______（填“偏大、偏小或不變”）。培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路（2）抽樣檢測法培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路2.從試管中析出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，為什么要將試管輕輕震蕩幾次？提示：事酵母菌分布均勻，以保證估算的準確性，減少誤差。提示：不需要另設對照組，本實驗的對照類型是自身對照。4.需要重復實驗嗎？3.實驗需要設置對照嗎？為什么？提示：不需要，計數(shù)時取多個方格求平均值。培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗設計實驗—實驗思路5.怎樣設計表格記錄結(jié)果？培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗6.如果一個小方格內(nèi)酵母菌數(shù)過多？難以數(shù)清，應采取怎樣的措施？7.對于壓在小方格界限上的酵母菌，應當怎樣計數(shù)？設計實驗—實驗思路提示：增大稀釋倍數(shù)。設計實驗—預測結(jié)果培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗進行實驗液體培養(yǎng)基、無菌、適宜溫度（25℃）酵母菌的培養(yǎng)計數(shù)（抽樣調(diào)查法）重復前兩步試管輕輕震蕩（使酵母菌均勻分布，減小誤差）血細胞計數(shù)板+光學顯微鏡（有時需定量稀釋）連續(xù)7天（每天固定時段進行計數(shù)）實驗結(jié)果實驗結(jié)論

酵母菌種群數(shù)量的變化呈“S”形曲線增長，但是在增長后期多了衰亡期。培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究實驗

一般情況下，計數(shù)所得酵母菌種群數(shù)量，比實際值大還是?。繛槭裁?？提示：會比實際要大。因為在計數(shù)所得的數(shù)據(jù)包含了死菌和活菌。如何克服以上難題？提示：區(qū)分死菌和活菌?？刹捎门_盼藍對酵母菌進行染色。能被染成藍色的則為死菌，不能被染色的則是活菌。在此條件下，計數(shù)酵母菌時，只需計數(shù)不被染色的酵母菌。

酵母菌是屬于真核生物，可以用血細胞計數(shù)板對其進行種群數(shù)量的計數(shù)。血細胞計數(shù)板只適用于真核細胞的計數(shù)。要對細菌（原核細胞）進行計數(shù)則需要細菌計數(shù)板。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)血細胞計數(shù)板和細菌計數(shù)板有沒有卻別？（三）微生物的數(shù)量測定2.直接計數(shù)法（1）計數(shù)板計數(shù)法血細胞計數(shù)板和細菌計數(shù)板血細胞計數(shù)板和細菌計數(shù)板有沒有卻別？

它們的區(qū)別就是計數(shù)室的高度不同，細菌計數(shù)板計數(shù)室的高度是0.02mm2。故細菌計數(shù)板計數(shù)細菌的計算是：細菌細胞個數(shù)/mL=每個小方格平均細胞數(shù)×4002×10-5×稀釋倍數(shù)0.02mm3=0.02×10-3cm3=2×10-5mL二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（三）微生物的數(shù)量測定2.直接計數(shù)法（1）計數(shù)板計數(shù)法血細胞計數(shù)板和細菌計數(shù)板（三）微生物的數(shù)量測定2.直接計數(shù)法（1）計數(shù)板計數(shù)法血細胞計數(shù)板和細菌計數(shù)板（2）比濁法

也是一種直接計數(shù)法，能快速地測定菌懸液中細胞數(shù)量。由于菌懸液中的單細胞微生物的細菌濃度與光密度成正比，與透光度成反比，因此可以借助分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，進而將未知細胞的菌懸液的光密度與已知細胞數(shù)的相比，就可以換算出未知菌懸液所含的細胞數(shù)。以上兩種方法都無法區(qū)分死菌和活菌。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗提出問題作出假設設計實驗實驗思路預測實驗進行實驗實驗結(jié)果實驗結(jié)論

土壤中含有能分解尿素的細菌，我們?nèi)绾畏蛛x它們？每克土壤樣品究竟含有多少這樣的細菌？

利用以尿素作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，可以分離。自變量：________________________因變量：__________________________無關變量：______________________________尿素能分解尿素細菌的生長情況培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基的pH、溫度等設計實驗—實驗思路1.土壤取樣2.制備培養(yǎng)基3.樣品稀釋與取樣涂布4.微生物的培養(yǎng)與觀察設計實驗—預測實驗土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗進行實驗1.實驗目的（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌。（2）統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌。2.實驗原理絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分離尿素的細菌。葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml①提供無機鹽；②調(diào)節(jié)pH。CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2常見的分解尿素的微生物：芽孢桿菌、小球菌、棒狀桿菌等細菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗進行實驗注意事項：取土樣時用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。3.實驗步驟（1）土壤取樣①取樣地點要求：酸堿度接近中性的潮濕土壤。細菌適宜在該環(huán)境中生長。②取樣過程：鏟去表層土（一般3cm左右）。細菌絕大部分分布在距地表3～8cm的土壤層。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗進行實驗3.實驗步驟①測細菌數(shù)：一般用104、105、106稀釋液。②測放線菌：一般用103、104、105稀釋液。③測真菌數(shù)：一般用102、103、104稀釋液。（2）樣品的稀釋與涂布平板

不同微生物在土壤中含量不同，分離不同的微生物采用不同的稀釋度，以保證獲得菌落數(shù)在30～300之間適于計數(shù)的平板。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗

在初次實驗中，對于稀釋的范圍沒有把握，怎樣做才能保證從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)？

選用稀釋范圍更大的稀釋液進行平板培養(yǎng)；例如可以將1×103-1×107倍稀釋的稀釋液分別涂布平板上培養(yǎng)，以保證能從中選擇出菌落數(shù)為30-300的平板進行計算。思考土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗

每個濃度至少設置4個平板，1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基（實驗組，三個重復），4為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）；整個實驗還要設置2個平板：不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以驗證培養(yǎng)基中是否含有雜菌。進行實驗3.實驗步驟（2）樣品的稀釋與涂布平板土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗注意事項：本實驗使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標記。例如，在標記培養(yǎng)皿時應該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。進行實驗3.實驗步驟（2）樣品的稀釋與涂布平板土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗①培養(yǎng)條件：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1～2d。②觀察：每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果。防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目。③一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等。（3）微生物的培養(yǎng)與觀察進行實驗3.實驗步驟土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗結(jié)果分析與評價

每個濃度至少設置4個平板，1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基（實驗組，三個重復），4為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）；整個實驗還要設置2個平板：不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以驗證培養(yǎng)基中是否含有雜菌。1.說出下列各組培養(yǎng)基目的。（1）3組接種得選擇培養(yǎng)基：（2）1組接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：

對土壤中分解尿素的細菌分離和計數(shù)。

判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗結(jié)果分析與評價

每個濃度至少設置4個平板，1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基（實驗組，三個重復），4為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）；整個實驗還要設置2個平板：不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以驗證培養(yǎng)基中是否含有雜菌。1.說出下列各組培養(yǎng)基目的。（3）不接種的選擇培養(yǎng)基：（4）不接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：

驗證選擇培養(yǎng)基中是否含有雜菌。

驗證牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中是否含有雜菌。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗結(jié)果分析與評價2.說出以下現(xiàn)象對應的結(jié)果分析。現(xiàn)象分析未涂布培養(yǎng)基上無菌落生長未涂布培養(yǎng)基上有菌落生長牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)木培養(yǎng)基未被雜菌污染培養(yǎng)基被雜菌污染選擇培養(yǎng)基具有選擇作用土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗結(jié)果分析與評價3.結(jié)合對照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。提示：如果沒有接種的培養(yǎng)基上沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些尿素分解菌。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗結(jié)果分析與評價

4.你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30~300的平板？在這一稀釋度下，是否至少有2個平板的菌落數(shù)接近？提示：如果得到了兩個或多個菌落數(shù)為30～300的平板，說明稀釋度合適，操作比較成功，能夠進行菌落的計數(shù)。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗結(jié)果分析與評價

5.你統(tǒng)計的每克土樣中能分解尿素的細菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學統(tǒng)計的結(jié)果接近嗎？如果差異很大,可能是什么原因引起的？提示：如果是用同一土樣進行的操作，數(shù)據(jù)應該比較接近。如果差異很大，就需要從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗

本活動只是初步篩選了能分解尿素的細菌,對分離的菌種進行鑒定還需要借助生物化學的方法。你可以查閱相關資料,進一步設計實驗來鑒定自己分高的菌種。進一步探究土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗進一步探究1.原理

細菌合成的脲酶將尿素分解為氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，pH升高，因此可以通過檢測培養(yǎng)基pH的變化來判斷是否發(fā)生了該化學反應，進而判斷該菌是否為尿素分解細菌。土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細菌后，如果pH升高，指示劑將變紅：（1）液體培養(yǎng)基可以直接看液體的變色情況；（2）固體培養(yǎng)基上可以觀察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶，紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越強。進一步探究2.方法土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)探究實驗二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)到社會中去1.空氣中微生物總數(shù)的檢測？2.水中細菌總數(shù)的檢測？3.牛奶中細菌的分離與計數(shù)？4.土壤中真菌（或放線菌）的分離與計數(shù)？練習與應用一、概念檢測

1.研究人員用無機鹽、瓊脂和石油配制的培養(yǎng)基從被石油污染的土壤中篩選出了一種石油降解菌。判斷下列相關表述