實驗型高血壓

實驗型高血壓一、高血壓動物建模方法分類1、腎性高血壓模型2、內(nèi)分泌性高血壓模型3、神經(jīng)原性高血壓模型4、遺傳性高血壓模型5、環(huán)境型高血壓模型2021/4/272（一）、腎性高血壓模型1、腎血管性高血壓模型（腎動脈狹窄性高血壓模型）

分類：

（1）兩腎一夾型（兩側(cè)腎完好，一側(cè)腎動脈狹窄）（2）一腎一夾型（一側(cè)腎切除，另一側(cè)腎動脈狹窄）

（3）兩腎兩夾型(兩腎均完好，兩側(cè)腎動脈狹窄）原理：狹窄腎動脈可以造成腎臟缺血，導(dǎo)致腎臟內(nèi)腎素合成和分泌增多，進而增高血管緊張素的含量，使血壓升高。2021/4/273

腎血管性高血壓模型的操作步驟：

腎血管性高血壓大鼠的制備：150—200g大鼠，用安定5mg/kg和氯胺酮50mg/kg，麻醉，仰臥位固定，剪去腹部手術(shù)野毛，皮膚消毒后于劍下1.5cm沿腹中線切開皮膚及肌層，找到腎臟，將腎臟輕輕擠出，用眼科鑷分離腎動脈，在近主動脈端用U形銀夾套上，然后縫合切口。隨后血壓將逐漸升高，4—5周后70%的大鼠形成持續(xù)性高壓，收縮壓>160mmhg。

2021/4/2742、腎外包扎性高血壓模型（腎外壓迫性高血壓模型)

分類：

（1）兩腎一扎型（兩側(cè)腎完好，一側(cè)腎包扎）

（2）一腎一扎型（一側(cè)腎切除，另一側(cè)腎包扎）

（3）兩腎兩扎型（兩側(cè)腎完整，兩側(cè)腎包扎）

原理：腎外異物包扎，可致腎周圍炎在腎外形成纖維素性鞘膜，壓迫腎實質(zhì)，造成腎組織缺血，使腎素形成增加，進而是血管緊張素含量增多，血壓升高。2021/4/275

腎外包扎性高血壓模型操作步驟：150—200g大鼠，用安定5mg/kg和氯胺酮50mg/kg，ip麻醉，仰臥位固定，剪去腹部手術(shù)野毛，皮膚消毒后于劍下1.5cm沿腹中線切開皮膚及肌層，找到腎臟，將腎臟輕輕擠出，小心的將腎與周圍組織剝離，將自制的雙層乳膠薄膜剪成“X”形，繞開腎門交叉包扎，同法對右腎進行包扎，縫合手術(shù)切口，皮下注射2萬單位青霉素，約20天即可約有70%以上大鼠出現(xiàn)持續(xù)性高血壓，收縮壓一般可升高50%以上。2021/4/276（二）、內(nèi)分泌性高血壓模型1、DOC鹽性高血壓模型

原理：去氧皮質(zhì)酮（DOC）為鹽皮質(zhì)激素，具有明顯的水鈉潴留作用，使細胞外液增加，血壓升高。大鼠一側(cè)腎切除后皮下注射DOC和附加飲用1%氯化鈉溶液可形成持續(xù)高血壓。2021/4/277DOC鹽性高血壓模型制作步驟：

大鼠100—150g，用安定5mg/kg和氯胺酮50mg/kgip麻醉，腹部正中切口進行左腎切除。術(shù)后大鼠用醋酸去氧皮質(zhì)酮（DOCA）50mg/kg，sc，qd，每周給藥5天，共五周，同時飲用1%氯化鈉溶液，停藥后改飲普通水。給藥一周后約50%大鼠血壓升高，給藥五周停藥后70%大鼠形成持久性高血壓，收縮壓>21.3kpa

者用作實驗。2021/4/2782、腎上腺素再生性高血壓模型

幼年大鼠左側(cè)腎和腎上腺素切除，右側(cè)腎上腺包膜用小刀切一小口，用彎頭無頭眼科鑷輕壓腎上腺將髓質(zhì)和大部分皮質(zhì)剔除。術(shù)后飲用1%氯化鈉溶液。術(shù)后兩周動物血壓和血漿DOC含量明顯升高，術(shù)后7—14周血漿DOC下降到正常水平，但血壓仍維持高血壓水平。2021/4/279（三）、神經(jīng)原性高血壓模型1973年Jannetta在手術(shù)觀察基礎(chǔ)上提出腦干左側(cè)Ⅸ，Ⅹ顱神經(jīng)根入腦區(qū)（REZ）被血管壓迫是原發(fā)性高血壓的原因，即“神經(jīng)源性高血壓”假說。在此基礎(chǔ)上，許多學(xué)者從臨床及實驗研究證實了Jannetta的假說。最初采用脈動球囊法，即有大小兩個橄欖球囊，中間細管相連，內(nèi)充液體，大囊置于主動脈內(nèi)，小囊置于延髓左側(cè)來建立高血壓動物模型。2021/4/2710（四）、遺傳性高血壓模型１、選擇性近親繁殖高血壓模型遺傳性高血壓大鼠有多種品系，如：遺傳性高血壓大鼠（GH）自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）Dahl鹽敏感大鼠（DS）里昂株高血壓大鼠（LH）蒙特斯種高血壓大鼠（SHM）米蘭種高血壓大鼠（MHS）其中具有使用價值，應(yīng)用較廣泛的是日本學(xué)者培育的突變系-自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）及其亞系，它們是目前國際上公認的最接近人類原發(fā)性高血壓的動物模型。2021/4/27112、基因工程高血壓模型1990年德國科學(xué)家首先將一個高血壓候選基因（小鼠DBA/2JR-2腎素基，Ren-2）轉(zhuǎn)入大鼠的生殖細胞而制備攜帶該候選基因的轉(zhuǎn)基因大鼠（TGR），由此而建立了一種新的高血壓大鼠模型：TGR，該模型4周齡時血壓升高，9周時達199.5～259.4mmHg（對照組119.7～129.7mmHg）。血漿活性腎素（PRA）和血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）水平正?；蚪档?，腎臟的腎素合成明顯受抑，但腎上腺等腎外組織的腎素合成卻顯著增強。2021/4/2712（五）、環(huán)境性高血壓模型研究發(fā)現(xiàn)正常大鼠暴露于5℃的環(huán)境中3周即可形成高血壓并且伴有心肌肥厚。如果暴露7周，去除冷環(huán)境后4周內(nèi)其血壓都不會恢復(fù)正常。故推測，暴露時間更長將會形成不可逆轉(zhuǎn)的高血壓動物模型。2021/4/2713二、高血壓藥物的研究方法1、辛伐他汀對高血壓大鼠的作用研究方法2、阻斷環(huán)氧化沒-2對高血壓大鼠的作用研究方法2021/4/2714（一）、辛伐他汀對高血壓大鼠的作用研究方法

1、實驗材料

（1）實驗動物：8周齡健康雄性wistar大鼠40只，體重180—220g

（2）試驗藥物：辛伐他?。?0mg/片

卡托普利：12.5mg/片2、主要試劑及儀器

血管緊張素II放射免疫分析試劑盒、NO含量檢測試劑盒、

羥脯氨酸含量檢測試劑盒、8-iso-PGF2a檢測試劑盒、TC、TG、LDL-C檢測試劑盒，MD100-1電子分析、BX51型光顯微鏡、HX-II型為套式小動物血壓測量儀、分光光度計、-4到-70攝氏度冰箱2021/4/27153、實驗方法

（1）建模：

建立兩腎一夾腎性高血壓大鼠模型。并選用收縮壓超過150mmHg,并且在原來基礎(chǔ)上升20mmHg以上者位高血壓大鼠建模成功，備用。

（2）分組：選用健康雄性8周齡的wistar大鼠40只，體重180-220g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機取7只作為假手術(shù)組，其余33只進行兩腎一夾手術(shù)造模。造模組及假手術(shù)組均喂養(yǎng)4周，選取造模成功的大鼠并重新分組：高血壓組（H組，n=6）、辛伐他汀治療組（S組，n=8）、卡托普利組（C組，n=6)、合用組（C+S組，n=8）。另設(shè)假手術(shù)組為對照組（sh組，n=6）。一組一籠，每籠的大鼠用苦味酸標(biāo)記，以便飼養(yǎng)，觀察和記錄數(shù)據(jù)。2021/4/2716

(3)給藥：

a、卡托普利組：25mg卡托普利溶于3.75ml雙蒸水內(nèi)，一天一次，每次1.5ml/100g。藥物劑量100mg/kg.d。

b、辛伐他汀組：8mg辛伐他汀溶于60ml雙蒸水中，一天一次，每次1.5ml/100g。藥物劑量2mg/kg.d

c、卡托普利+辛伐他汀組：辛伐他汀2mg和卡托普利100mg溶于16ml雙蒸水內(nèi)，一天一次，每次1.5ml/100g,藥物劑量：辛伐2mg/kg.d、卡托普利：100mg/kg.d。

d、假手術(shù)組與高血壓組在同樣的時間內(nèi)每日同一時間灌雙蒸餾水一次，每次1.5ml/kg.d

（4）血壓測量：用HX-II型尾套是小動物血壓測量計測定大鼠血壓，并且應(yīng)當(dāng)在一定時間內(nèi)，完成所有操作，一般固定于每天上午的8點至12點。血壓測定重復(fù)測定3次，求三次的均值作為測壓結(jié)果。2021/4/2717（5）相關(guān)數(shù)據(jù)的采集

檢測NO和血脂含量、血漿和心肌AngII的測定、血漿8-異前列素F2a

的測定

（6）相關(guān)結(jié)構(gòu)及生理變化的檢測

左室質(zhì)量指數(shù)的測定、心肌組織羥脯氨酸龍都的測定

（7）統(tǒng)計學(xué)分析

注：方法來源于山西醫(yī)科大學(xué)碩士論文

2021/4/2718（二）、阻斷環(huán)氧化沒-2對高血壓影響的研究方法

1、實驗動物的來源于分組：

（1）實驗動物的來源：8周齡雄性大鼠10只

（2）藥物來源與分組：COX-2選擇性抑制劑塞來昔布膠囊，增加鹽負荷的效果，本研究選擇低鹽飲食與高鹽飲食進行對比。大鼠隨機分組（n=5）：低鹽飲食組、高鹽飲食組。

2021/4/2719

2、實驗方法：

實驗前大鼠置于大鼠籠中飼養(yǎng)3天，所有大鼠給予低鹽飲食（含0.04%NaCl）同時給予celecoxib（25mg/kg.d)灌胃5天。第6天開始，低鹽實驗組給予celecoxib灌胃及低鹽飲食，高鹽飲食組改為給予celecoxib灌胃及高鹽飼料（含8%NaCl），連續(xù)三天。實驗過程中稱量每日投放量及回收量，計算每日鹽攝入量

2021/4/2720

3、結(jié)果

（1）一般情況：體重、腎功能及腎臟組織學(xué)檢測、尾動脈收縮壓、鈉攝入量、血鈉濃度、24H尿量（UV）及尿鈉排泄

（2）改變鹽負荷后UV的每日變化情況

（3）改變鹽負荷后尿鈉每日變化情況

（4）不同COX的分布于表達（cox-1、cox-2、腎臟髓質(zhì)COX-2）

（5）血、24h尿醛固酮的變化

注：方法來源于復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文2021