月季花藥培養(yǎng)

月季花藥培養(yǎng)2021/3/102花的結(jié)構(gòu)：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊2021/3/1034、花的作用被子植物的有性生殖是在花里進(jìn)行的，雌蕊和雄蕊是進(jìn)行有性生殖的主要部分二、被子植物花粉粒的形成花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉粒1、雄蕊的結(jié)構(gòu)雄蕊：2021/3/104藥隔：花藥中部，由薄壁細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)有維管束花藥花粉囊（4或2）囊壁花粉粒表皮纖維層2、花藥的結(jié)構(gòu)2021/3/1052021/3/1063、花藥的發(fā)育周緣細(xì)胞（初生壁細(xì)胞）外：體積較大藥室內(nèi)壁中：一層或幾層細(xì)胞內(nèi)：絨氈層分裂孢原細(xì)胞造孢細(xì)胞花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）有絲分裂絨氈層：為花粉粒的發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)，最后消失藥室內(nèi)壁：多量淀粉，發(fā)育成纖維層中層：早期分解，吸收，消失2021/3/107花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞4、被子植物的花粉發(fā)育②花粉粒的形成花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）減數(shù)分裂①經(jīng)歷時(shí)期：四分體時(shí)期、單核期、雙核期2021/3/108四分體時(shí)期（進(jìn)入單核期）有絲分裂單核靠邊期(小孢子)單核居中期(小孢子)

小孢子（單核花粉粒）2021/3/109精子精子有絲分裂花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核生殖細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞雙核期兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型相同2021/3/10101花粉母細(xì)胞4個(gè)小孢子減分有分4個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核有分8個(gè)精子2021/3/1011③花粉粒類型一個(gè)成熟的花粉粒即為雄配子體，有兩種情況：二核花粉粒:成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒:有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子。2021/3/1012三、被子植物胚囊的形成1、雌蕊的組成柱頭、花柱、子房2、子房的結(jié)構(gòu)2021/3/1013被子植物子房的結(jié)構(gòu)胚珠的結(jié)構(gòu)花粉管精子卵細(xì)胞極核子房壁珠被珠孔2021/3/1014花粉落到雌蕊柱頭上以后，在柱頭上黏液的刺激下，花粉開始萌發(fā)并形成花粉管，花粉管沿著花柱向胚珠方向生長(zhǎng)，到達(dá)胚珠后從珠孔繞過(guò)卵細(xì)胞進(jìn)入胚囊，到達(dá)胚囊中卵細(xì)胞和極核之間，這時(shí)花粉管的前端破裂，兩個(gè)精子釋放出來(lái)，其中一個(gè)精子與兩個(gè)極核結(jié)合形成受精極核，另一個(gè)精子與卵細(xì)胞結(jié)合形成受精卵，這是被子植物特有的雙受精現(xiàn)象4、受精過(guò)程2021/3/10152021/3/1016花雄蕊雌蕊花藥花粉粒精子精子子房胚珠胚囊子房壁珠被卵細(xì)胞兩個(gè)極核受精卵受精極核胚胚乳種皮種子果皮果實(shí)有絲分裂有絲分裂1n1n2n1n3n2n2n2n2n胚是一個(gè)新個(gè)體的幼體5、發(fā)育結(jié)果2021/3/10172021/3/1018（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑花粉花粉胚狀體愈傷組織叢芽生根移栽脫分化分化再分化誘導(dǎo)脫分化

說(shuō)明：兩種途徑之間并沒有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。2021/3/1019①不選擇單核期之前花藥原因：花藥質(zhì)地幼嫩，容易破碎；②不選擇單核期之后花藥原因：花瓣開始松動(dòng)，給材料消毒帶來(lái)困難；③挑選單核期花藥方法：應(yīng)當(dāng)選擇完全未開放的花蕾，菌少，易消毒。（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇：⑴不同種類植物的誘導(dǎo)成功率不同。⑵同一種植物，親本植株的生理狀況對(duì)誘導(dǎo)成功率有直接影響。⑶合適的花粉發(fā)育時(shí)期：花期早期時(shí)的花藥最佳。⑷選擇最合適的花粉發(fā)育時(shí)期2021/3/1020 1．影響花粉植株的主要因素:

和

等。

2．材料的選擇： ①?gòu)幕ㄋ巵?lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（初花期、盛花期、晚花期）的花藥； ②從花粉來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（四分體期、單核期、雙核期、萌發(fā)期）的花粉； ③從花蕾來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（完全未開放、略微開放、完全盛開）的花蕾。

〖思考4〗除此之外，你認(rèn)為影響花粉誘導(dǎo)成功的因素還有哪些？〖思考5〗為什么選擇合適的花粉發(fā)育期是誘導(dǎo)花藥培養(yǎng)成功的重要因素？材料的選擇培養(yǎng)基的組成植物的種類、親本植株的生理狀況、親本生長(zhǎng)條件、材料的低溫處理、接種密度、培養(yǎng)基組成、培養(yǎng)的環(huán)境條件等。

這是因?yàn)椴⒉皇侨魏螘r(shí)期的花粉都可以經(jīng)過(guò)培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，在花粉發(fā)育的過(guò)程中，只有某一個(gè)時(shí)期對(duì)離體刺激敏感。2021/3/1021

花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基各成分中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的水平和配比起決定作用。⑴誘導(dǎo)愈傷組織或胚狀體產(chǎn)生的培養(yǎng)基：廣泛使用2，4-D、IAA；⑵誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基常除去2，4-D而以IBA代之。親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理、接種密度、培養(yǎng)的環(huán)境條件等對(duì)誘導(dǎo)的成功率都有一定的影響。2、培養(yǎng)基的組成：3、其他因素：2021/3/1022

花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來(lái)困難。

為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難？2021/3/1023月季花藥培養(yǎng)時(shí)的花粉粒最好是（）

A、四分體時(shí)期B、單核居中期

C、單核靠邊期D、二核或三核花粉粒C2、培養(yǎng)基：花藥培養(yǎng)基所采用的培養(yǎng)基可能因植物的不同而有所變化小麥中為N6，馬鈴薯、月季中為MS，油菜中為B5培養(yǎng)基2021/3/10243、其他因素親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種的密度等對(duì)誘導(dǎo)成功都有一定的影響六、實(shí)驗(yàn)操作（一）材料的選?、谀承┲参锏幕ǚ奂?xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。①最常用的方法有醋酸洋紅法1、方法2021/3/1025①醋酸洋紅法染色機(jī)理醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNA和蛋白質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色

。將體積分?jǐn)?shù)45％的醋酸100ml煮沸，緩緩加入1g洋紅，在加熱回流8h，冷卻至50℃，過(guò)濾即可。②醋酸洋紅的配置2、醋酸洋紅法2021/3/10262021/3/1027將花藥放在載玻片上，加一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)1％的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。③染色操作3、焙花青—鉻釩法將無(wú)水酒精與冰醋酸按體積比為3：1的比例混勻①卡諾氏固定液的配制方法2021/3/1028花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青—鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。將5g鉻明礬[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸餾水中，溶解后加入0.1g焙花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸5分鐘后冷卻至室溫，過(guò)濾，加蒸餾水定容至100ml。②焙花青—鉻釩溶液的配制方法③染色操作2021/3/1029（二）材料的消毒1、酒精處理①花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒，立即取出。②無(wú)菌水清洗③無(wú)菌吸水紙吸干花蕾表面的水分2021/3/10302、消毒液處理（三）接種和培養(yǎng)①放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）②無(wú)菌水沖洗3~5次用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無(wú)菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可。2021/3/1031在無(wú)菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個(gè)。1、剝?nèi)』ㄋ帰傥饟p傷花藥，以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織2、接種注意：2021/3/1032①培養(yǎng)條件：溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培養(yǎng)②培養(yǎng)：一般經(jīng)過(guò)20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體長(zhǎng)出愈傷組織則將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株③注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株