第四章-定量分析

第四章藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證主要內(nèi)容藥品分析方法的驗(yàn)證定量分析方法的分類(lèi)與特點(diǎn)233定量分析樣品的前處理方法31定量分析？藥品定量分析－定量分析是依據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，建立數(shù)學(xué)模型，并計(jì)算出分析對(duì)象的各項(xiàng)指標(biāo)及其數(shù)值的一種方法。定性分析與定量分析是統(tǒng)一的，相互補(bǔ)充的；定性分析是定量分析的基本前提，沒(méi)有定性的定量是一種盲目的、毫無(wú)價(jià)值的定量；定量分析使之定性更加科學(xué)、準(zhǔn)確，它可以促使定性分析得出廣泛而深入的結(jié)論。藥物含量測(cè)定基于化學(xué)或物理學(xué)原理的含量測(cè)定基于生物學(xué)原理的效價(jià)測(cè)定藥物的含量系指所含主成分的量，是評(píng)價(jià)藥物的重要指標(biāo)第一節(jié)、定量分析方法的分類(lèi)與特點(diǎn)含量測(cè)定項(xiàng)采用的定量分析方法容量分析法光譜分析法色譜分析法

基本原理：將已知濃度的滴定液由滴定管加到待測(cè)藥物的溶液中，直到所加滴定液與被測(cè)藥物按化學(xué)計(jì)量反應(yīng)完全為止，然后根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積可以計(jì)算出被測(cè)物的含量?；瘜W(xué)計(jì)量關(guān)系特點(diǎn)：所用儀器價(jià)廉、易得；操作簡(jiǎn)便、快速、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差一般應(yīng)不大于0.2％)；專(zhuān)屬性較差，適用于含量較高的樣品指示劑指示反應(yīng)化學(xué)計(jì)量點(diǎn)的到達(dá)一、容量分析法(滴定法)容量分析的相關(guān)計(jì)算滴定度－指每1mL規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量滴定度（T）的計(jì)算(mg/mL)：P144-145aA+bBcC+dD

T(mg/mL)=m(a/b)M

WA=TVBm-滴定液的摩爾濃度（mol/L）；a-被測(cè)藥物的摩爾數(shù)；b-滴定液的摩爾數(shù)；M-被測(cè)藥物的摩爾毫摩爾質(zhì)量（mg/mmol）；含量計(jì)算（1）直接滴定法

VxT含量（%）=x100%W實(shí)際滴定度－藥典給出的是規(guī)定濃度下，實(shí)際滴定度要乘以校正因子

F=實(shí)際摩爾濃度/規(guī)定摩爾濃度

VxTxF含量（%）=x100%W間接滴定法生成物滴定法藥物+AB（定量反應(yīng)）剩余量滴定法（回滴定法）

先加入過(guò)量的滴定液A，使其與藥物定量反應(yīng)，但反應(yīng)完全后，再用另一滴定液來(lái)回滴反應(yīng)后剩余的滴定液A

藥物B滴定劑例：P146

(VBo-VBs)xTAxFB含量（%）=x100%W實(shí)例－溴量法凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類(lèi)藥物，其不飽和鍵可與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，故可采用溴量法進(jìn)行測(cè)定。如司可巴比妥鈉的測(cè)定原理為：

精密量取維生素C注射液4mL（相當(dāng)于維生素C0.2g），加水15mL與丙酮2mL，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4mL與淀粉指示液1mL，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液顯藍(lán)色，并持續(xù)30秒鐘不退。已知：注射液規(guī)格2mL:0.1g，消耗0.05mol/L碘滴定液（F=1.005）22.45mL，維生素C的分子量為176.12，反應(yīng)摩爾比為1:1，問(wèn)：（1）每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于多少mg的維生素C？（2）求本品相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量？課堂練習(xí)12023/2/112維生素C1摩爾維生素C與1摩爾碘相當(dāng)T＝0.05×176.12×1/1=8.806mg/ml標(biāo)示量%=T×F×V/W×標(biāo)示量×100%8.806×22.45×1.005=0.2×1000

×100%=99.34%課堂練習(xí)2煙酸片的含量測(cè)定：取本品20片，精密稱(chēng)定重量為7.1680g，研細(xì)，取片粉0.3729g，加新沸放冷的水50mL，加熱使溶解，放冷，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，消耗25.20mL，每1mLNaOH滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于12.31mg煙酸，已知煙酸片規(guī)格0.3g，NaOH滴定液（0.1mol/L）的F=1.005，計(jì)算每片含煙酸的量。光譜－記錄由能級(jí)躍遷所產(chǎn)生的輻射能隨波長(zhǎng)的變化所得的圖譜光譜分析法－利用物質(zhì)的光譜進(jìn)行定性定量和結(jié)構(gòu)分析的方法。分光光度法－測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在光譜的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的方法。中國(guó)藥典收載的光譜分析法包括紫外可見(jiàn)分光光度法（UV-VIS）紅外分光光度法(IR)原子吸收分光光度法(AAS)熒光分析法(FL)光焰光度法(FP)二、光譜光譜分析法紫外分光光度法（UV-VIS）基于物質(zhì)分子對(duì)紫外光譜區(qū)（200-400nm）和可見(jiàn)光區(qū)（400-760nm）的單色光輻射的吸收特性建立的光譜分析法。朗伯－比耳定律：?jiǎn)紊廨椛浯┻^(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收光的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光程）成正比。吸光度A一般在0.3～0.7（誤差最小）濃度點(diǎn)n＝5，用濃度c對(duì)A作線性回歸處理，得一直線方程，r應(yīng)大于0.999(n＝5)，方程的截距應(yīng)近于零。A為吸光度T為透光率C為吸光物質(zhì)的濃度

L為吸收層厚度A=ECLUV－VIS的特點(diǎn)

(1)靈敏度高（10-410-7g/mL)

(2)準(zhǔn)確度高(RSD,25%)

(3)儀器價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)單、易于普及

(4)應(yīng)用廣泛注意事項(xiàng)儀器校正－波長(zhǎng)，準(zhǔn)確度溶劑要求－光譜純（甲醇、乙醇、扣除空白）含量測(cè)定方法＊對(duì)照品比較法原料藥百分含量D：為稀釋體積固體制劑含量液體制劑含量吸收系數(shù)法1

含量％＝×100×WA×D×100%

E%cm示例4-6定量計(jì)算復(fù)習(xí)對(duì)照法固體制劑------1.容量分析法

（1）直接滴定法（2）剩余滴定法

2.紫外分光光度法（1）吸收系數(shù)法（2）對(duì)照法

習(xí)題1.維生素B12注射液規(guī)格為1mL：0.1mg，含量測(cè)定方法如下：精密量取本品7.5mL，置25mL量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，混勻，置1cm石英池中，以蒸餾水為空白，在361±1nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度為0.593，以E1%1cm為207，計(jì)算得維生素B12相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量2.煙酸片的含量測(cè)定：取本品20片，精密稱(chēng)定重量為7.1680g，研細(xì)，取片粉0.3729g，加新沸放冷的水50mL，加熱使溶解，放冷，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，消耗25.20mL，每1mLNaOH滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于12.31mg煙酸，已知煙酸片規(guī)格0.3g，NaOH滴定液（0.1mol/L）的F=1.005，計(jì)算每片含煙酸的量。3.HPLC測(cè)定復(fù)方SMZ片中SMZ含量，以SG為內(nèi)標(biāo)，測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)液中：SMZ峰高14.90cm，濃度8.0mg/mL，SG峰高13.80cm，濃度4.0mg/mL。樣品液中SMZ峰高11.92cm，SG峰高16.20cm，濃度4.0mg/mL。（進(jìn)樣量均為5μl）,樣品液中SMZ的濃度為：課堂習(xí)題非那西丁含量測(cè)定：精密稱(chēng)取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時(shí)后，放冷，用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00mL。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.92mg的C10H13O2N。計(jì)算非那西丁的含量為（）A.95.55%B.96.55%C.97.55%D.98.55%E.99.72%三、色譜分析法色譜分析法是基于混合物各組分在體系中兩相的物理化學(xué)性能差異（如吸附、分配差異等）而進(jìn)行分離和分析的方法分離原理：吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法與排阻色譜法分離方法：紙色譜、薄層色譜法、柱色譜、紙色譜、氣相色譜法、高效液相色譜法。色譜法分類(lèi)高效液相色譜法

特點(diǎn)：高壓、高效、高速高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。1.儀器要求：高效液相色譜儀AgilentHP11002.對(duì)色譜柱要求高效液相色譜：硅膠和化學(xué)鍵合硅膠（C18，CN，苯基）離子色譜：離子交換填料分子排阻色譜：凝膠或高分子多孔小球色譜柱是HPLC的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分。3.對(duì)檢測(cè)器要求紫外檢測(cè)器熒光檢測(cè)器示差檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器質(zhì)譜檢測(cè)器4.流動(dòng)相要求紫外檢測(cè)器：溶劑無(wú)干擾蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器：不含不揮發(fā)性鹽C18：水、甲醇、乙腈、緩沖液離子色譜(IonChromatography)利用溶液中不同離子與離子交換劑間的交換能力的不同而進(jìn)行分離的方法。利用多孔性物質(zhì)對(duì)不同大小的分子的排阻作用進(jìn)行分離的方法。固定相為化學(xué)情性多孔物質(zhì)——凝膠，它類(lèi)似于分子篩，但孔徑比分子篩大。凝膠內(nèi)具有一定大小的孔穴，體積大的分子不能滲透到孔穴中去而被排阻，較早地被淋洗出來(lái)；中等體積的分子部分滲透；小分子可完全滲透入內(nèi)，最后洗出色譜柱。這樣，樣品分子基本上按其分子大小，排阻先后由柱中流出。M.W.tR空間排阻色譜(SizeExclusionChromatography)5.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)理論塔板數(shù)（N）：色譜柱分離效能分離度（R）：Rs>1.5重復(fù)性：RSD<2.0%(n=5)拖尾因子：0.95-1.05(圖例)測(cè)定法內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定法外標(biāo)法As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；AR為雜質(zhì)對(duì)照品的峰面積或峰高；Cs為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；CR為雜質(zhì)對(duì)照品的濃度。Ax為供試品中雜質(zhì)峰面積或峰高；Cx為供試品中雜質(zhì)的濃度；As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；Cs為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；f為校正因子。

Ax

含量（Cx）＝CR──────AR

氣相色譜法(略）以氣體為流動(dòng)相的色譜法稱(chēng)為氣相色譜法。不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)分析。原理：各組分在固定相與載氣(流動(dòng)相)間分配系數(shù)不等，按大小依次被載氣帶出色譜柱，小先流出。色譜系統(tǒng)適用性問(wèn)題同高效液相色譜

測(cè)定法加入對(duì)照品溶液前后校正因子應(yīng)相同，即：

Ais/Ax=（Cx+△Cx）/Cx則待測(cè)組分的濃度Cx可通過(guò)如下公式進(jìn)行計(jì)算：

Cx=△Cx/(Ais/Ax)-1前處理的主要目的凈化濃縮增強(qiáng)響應(yīng)、提高選擇性（比如化學(xué)衍生）濃縮痕量的被測(cè)組分，提高方法的靈敏度，降低檢測(cè)限；去除樣本中的基體與其他干擾物質(zhì)；通過(guò)衍生化，使被測(cè)物轉(zhuǎn)化成為檢測(cè)靈敏度更高的物質(zhì)或轉(zhuǎn)化為與樣本中干擾組分能夠分離的物質(zhì)，提高方法的靈敏度和選擇性保護(hù)下游分析儀器以及測(cè)試系統(tǒng)、避免影響整機(jī)性能及壽命第二節(jié)、定量分析樣品的前處理方法為什么要進(jìn)行前處理?概述對(duì)樣品進(jìn)行前處理以滿足所用分析方法對(duì)樣品的要求含金屬、鹵素、硫、磷、棲等特殊元素的藥物分析前處理方法結(jié)構(gòu)決定性質(zhì)，同時(shí)也決定了樣品的前處理方法泛影酸碘番酸磺溴酞鈉三氯叔丁醇碘苯酯含金屬有機(jī)物金屬原子不直接與碳原子相連金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連-破壞后分析含金屬有機(jī)藥物酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵卡巴胂金屬有機(jī)藥物該類(lèi)藥物的分析方法通?？煞譃椴唤?jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法特點(diǎn)：不對(duì)藥物分子中的有機(jī)結(jié)構(gòu)部分進(jìn)行完全破壞，僅選用適當(dāng)?shù)娜軇┦勾郎y(cè)元素電離或經(jīng)簡(jiǎn)單回流使之解離為無(wú)機(jī)鹽后測(cè)定。水解后測(cè)定還原分解后測(cè)定

堿水解后測(cè)定法

含鹵素的有機(jī)藥物溶解于適當(dāng)溶劑中，加氫氧化鈉溶液回流使其水解，鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)殡x子，用間接銀量法測(cè)定。適用于含鹵素的不穩(wěn)定有機(jī)藥物。如：鹵素和脂肪碳相連（2)酸水解后測(cè)定法含金屬的有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)牡V酸共熱，將不溶性金屬鹽類(lèi)水解置換為可溶性鹽，然后用配位滴定或剩余酸滴定。（一）經(jīng)水解后測(cè)定法

原理三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過(guò)量的硝酸銀滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，過(guò)量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨液回滴定。例三氯叔丁醇的測(cè)定CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH

△回流(CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3

AgCl↓

+NaNO3

AgNO3+

NH4SCNAgSCN↓+

NH4NO3（淡棕紅色）(Ksp=1.56×10–10)(Ksp=1.0×10-12)Fe3+

+SCNˉFe(SCN)2+

（2)酸水解后測(cè)定法含金屬的有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)牡V酸共熱，將不溶性金屬鹽類(lèi)水解置換為可溶性鹽，然后用配位滴定或剩余酸滴定。3.經(jīng)還原分解后測(cè)定法

本法是將含鹵素有機(jī)藥物在堿性或酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應(yīng)，使有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法測(cè)定。本法適用于測(cè)定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)碘原子的含鹵素有機(jī)藥物。例泛影酸的含量測(cè)定取本品約0.4g，精密稱(chēng)定，加氫氧化鈉溶液30ml與鋅粉1.0g，加熱回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾過(guò)，燒瓶與濾器用水洗滌3次，每次15ml，洗液與濾液合并，加冰醋酸5ml與曙紅鈉指示液5滴，用硝酸銀滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于20.46mg的C11H9I3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+11NaOH+Zn回流△COONaNH2

H2N+3NaI+2CH3COONa+2Na2ZnO2+H2ONaI+AgNO3AgI+NaNO3二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法含金屬藥物、鹵素、氮、硫、磷等與碳原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合比較牢固，水解或氧化還原的方法難以湊效，需采用有機(jī)破壞的方法。濕法破壞干法破壞使用硫酸作為分解劑（消解劑或消化劑），常加入氧化劑（硝酸、高氯酸、過(guò)氧化氫）作為輔助分解劑。分解劑組合方式：硫酸-硝酸法硫酸-高氯酸法硫酸-硫酸鹽法

濕法破壞（凱氏定氮法，含氮有機(jī)藥物定量分析方法）

硫酸-硫酸鹽法原理是首先將試樣放入凱氏燒瓶中，加入濃硫酸及催化劑(硒、汞或銅鹽)加熱分解消解試樣，使試樣中的氮轉(zhuǎn)化為銨態(tài)氮(硫酸銨)；有機(jī)結(jié)構(gòu)被氧化成二氧化碳和水（消解），消解好的試樣轉(zhuǎn)移入蒸餾器中，加濃苛性鈉液，使揮發(fā)出的氨氣(NH3)用過(guò)量的標(biāo)準(zhǔn)酸溶液吸收，剩余的酸用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液返滴定；或用硼酸作吸收液，再用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液直接滴定。1.有機(jī)物中的氨根在強(qiáng)熱和CuSO4，濃H2SO4

作用下，硝化生成（NH4）2SO4

反應(yīng)式為：2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04

（其中CuSO4做催化劑）

2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過(guò)蒸餾釋放出NH3

，收集于H3BO3溶液中

反應(yīng)式為:(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O

3.用已知濃度的H2SO4（或HCI）標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)H2SO4消耗的量計(jì)算出氮的含量，然后乘以相應(yīng)的換算因子，既得含氮（蛋白質(zhì)）的含量

反應(yīng)式為：(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3

本法是往樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。

消解劑：硫酸，并加入硫酸鉀（無(wú)水硫酸鈉）－提高硫酸沸點(diǎn)進(jìn)而提高消解溫度。催化劑：加快消解速度、縮短消解時(shí)間。常用的催化劑包括汞或汞鹽、硒粉、銅鹽、二氧化錳。輔助催化劑：適用于某些難以分解的含氮雜環(huán)類(lèi)藥物。包括30％的過(guò)氧化氫、高氯酸。使用注意事項(xiàng)適用范圍：含有氨基或酰胺類(lèi)結(jié)構(gòu)的藥物。偶氮類(lèi)、肼結(jié)構(gòu)：需加鋅粉先還原后消解以避免生產(chǎn)氮?dú)舛绊憸y(cè)定雜環(huán)類(lèi)：先用HI酸或紅磷還原為氫化雜化，后消解；含氮量高>10%，加入少量多碳化合物還原劑（如蔗糖、淀粉）以利于氮轉(zhuǎn)變?yōu)榘蓖ㄟ^(guò)高溫灼燒的方式實(shí)現(xiàn)對(duì)有機(jī)結(jié)構(gòu)的破壞。適用于含鹵素、硫、磷、硒及砷鹽等有機(jī)合成藥物的前處理。高溫?zé)胱品ㄑ跗咳紵?/p>

干法破壞高溫?zé)胱品ǎ瓕⒑郎y(cè)元素的有機(jī)藥物經(jīng)高溫灼燒灰化，使有機(jī)結(jié)構(gòu)分解而待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)元素或可溶性無(wú)機(jī)鹽。適用對(duì)象：含鹵素類(lèi)藥物鑒別、含磷藥物的定量測(cè)定和藥物中砷鹽的檢查。加入無(wú)水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。含碘藥物鑒別含氟、氯、溴等元素藥物的鑒別含磷藥物的定量測(cè)定砷鹽的檢查

氧瓶燃燒法－將含待測(cè)元素的有機(jī)藥物置于充滿氧氣的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)徹底分解為二氧化碳和水，而待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為不同價(jià)態(tài)的氧化物（或無(wú)氧酸），被吸收到適當(dāng)吸收液中，再采用適宜的方法分析。特點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析適用對(duì)象：含鹵素、硫、磷等元素的鑒別、限度檢查和含量測(cè)定。（2）儀器與材料①儀器裝置燃燒瓶為500、1000或2000ml無(wú)色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞空心，底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀②稱(chēng)樣用材料及稱(chēng)樣（樣品制備）:

A.固體樣品無(wú)灰濾紙；B.液體樣品紙袋；C.軟膏類(lèi)樣品：將適量樣品置不含被測(cè)成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無(wú)灰濾紙包裹③吸收液

吸收液：

作用將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y(cè)定的價(jià)態(tài)；吸收液的選擇氟水

（茜素氟藍(lán)比色法）

氯

氯化氫水中溶解度低，NaOH溶液溴H2O-NaOH

NaOH-二氧化硫（還原劑）飽和溶液碘NaOH－水-二氧化硫飽和溶液硫濃H2O2

與水的混合液

（SO3SO42-)

硒硝酸溶液（SeO3H2SO4)

（3）操作方法①燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備用洗液洗凈后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤(rùn)，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。②樣品的準(zhǔn)備取樣品適量，精密稱(chēng)定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。③樣品的燃燒點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，俟燃燒完畢（應(yīng)無(wú)黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗(yàn)。然后按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。①根據(jù)被燃燒分解的樣品量選用適宜大小的燃燒瓶。藥典規(guī)定的燃燒瓶體積為500、1000或2000ml三種，采用常量或半微量分析（4）注意事項(xiàng)待分解樣品量燃燒瓶的體積

3~5mg（微量分析）

150~250ml

20~30mg（半微量分析）

300~500ml

50~60mg

1000ml

0.6~0.7g或更多

2000ml或特殊結(jié)構(gòu)的燃燒瓶正確選用燃燒瓶的目的在于：樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。②測(cè)定含氟有機(jī)藥物時(shí)，用石英制燃燒瓶③鉑絲燃燒時(shí)起催化作用④應(yīng)同時(shí)做空白試驗(yàn)⑤燃燒時(shí)要注意防爆⑥燃燒產(chǎn)生的煙霧完全被吸收例碘苯酯的含量測(cè)定原理碘苯酯系有機(jī)碘化物，用氧瓶燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣?，繼而氧化為游離的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氫氧化鈉反應(yīng)，生成碘化物與碘酸鹽，加入溴-醋酸溶液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過(guò)量的溴以甲酸及通空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽反應(yīng)析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍(lán)色消失即為終點(diǎn)。碘苯酯I2(HIO3,HIO,HI)

取本品約20mg，精密稱(chēng)定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用氫氧化鈉試液2ml與水l0ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸鉀10g，加冰醋酸適量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約lml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約3～5min以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀2g，密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg的C19H29IO2。

測(cè)定法滴定度的計(jì)算2mol碘苯酯→1molI21molI2→1molNaIO+1molNaI1molNaIO→1/3molNaIO3+2/3molNaImolNaI+Br2→molNaIO3即2mol碘苯酯→2molNaIO32molNaIO3+10molI-→6molI2即2mol碘苯酯→6molI2→12molNa2S2O3反應(yīng)摩爾比為1∶6第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證一、目的

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求，方法驗(yàn)證過(guò)程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草和修訂說(shuō)明中。二、用途（一）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。（二）藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。三、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目

鑒別試驗(yàn)；雜質(zhì)定量或限度檢查；

原料或制劑中有效成分含量測(cè)定；

制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定；

溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測(cè)試方法。四、驗(yàn)證內(nèi)容

1.準(zhǔn)確度

2.精密度

3.專(zhuān)屬性

4.檢測(cè)限

5.定量限

6.標(biāo)準(zhǔn)曲線

7.線性范圍

8.耐用性重復(fù)性中間精密度重現(xiàn)性

準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。測(cè)定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗(yàn)法”和“加樣回收試驗(yàn)法”。

（一）準(zhǔn)確度（accuracy）空白+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M回收試驗(yàn)已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M。加樣回收試驗(yàn)

加入已知純度對(duì)照品的量為原制劑中含量的80%、100%、120%,每一濃度測(cè)3份.規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。數(shù)據(jù)要求UV、HPLC、GC法

98.0102.0%容量法

99.7100.3%體內(nèi)藥物分析

85.0115.0%RSD≤2%雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。（二）精密度（precision）精密度偏差（d）：測(cè)量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD或S）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD），也稱(chēng)變異系數(shù)（CV）重復(fù)性

在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)。2.中間精密度

同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備驗(yàn)證內(nèi)容3.重現(xiàn)性

不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如建立藥典分析方法時(shí)通過(guò)協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗(yàn)的過(guò)程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。RSD允許值容量分析

≤0.2%重量分析法

≤0.5%氧瓶燃燒法、凱氏定氮法

≤0.5%紫外、原子吸收分析法

≤1%HPLC、GC、TLC分析法

≤

2%指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專(zhuān)屬的測(cè)定能力。是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾程度的度量。

（三）專(zhuān)屬性（specificity）

專(zhuān)屬性不夠,應(yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充1.鑒別反應(yīng)不含被測(cè)成分的樣品,以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物,均呈負(fù)反應(yīng)2.含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定注明成分在譜圖中的位置雜質(zhì)是否干擾含量測(cè)定(是否和主峰分離)降解試樣峰純度檢查(PDA)兩法比較測(cè)定結(jié)果檢測(cè)限系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。是限度檢查效能指標(biāo)，反應(yīng)方法是否靈敏,無(wú)需定量測(cè)定。常用%、ppm、ppb表示。

（四）檢測(cè)限（limitofdetection，LOD）

1．非儀器分析目視法用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。5g/mL10g/mL20g/mL50g/mL100g/mL

2．信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1時(shí)的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。

3．?dāng)?shù)據(jù)要求應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。（五）定量限（1imitofquantitation，LOQ）常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定，也可用儀器所測(cè)空白背景響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）的10倍為估計(jì)值，再經(jīng)試驗(yàn)確定。在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖