超高效液相色譜

超高效液相色譜及其應(yīng)用環(huán)境科學(xué)班第五組演講人：孫碩ppt制作：宋云龍材料收集：任蘇瑜石君隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，對(duì)液相色譜技術(shù)的要求也不斷提高，單從技術(shù)角度的改進(jìn)已經(jīng)不行。這就需要同時(shí)從科學(xué)與技術(shù)的角度出發(fā)，或者說(shuō)從理論高度對(duì)液相色譜重新認(rèn)識(shí)。因此，UPLC（超高效液相色譜）概念得以提出，將HPLC的極限作為自己的起點(diǎn)。前言概念超高效液相色譜技術(shù)（ultraperformanceliquidchcromatography，簡(jiǎn)稱(chēng)UPLC）是一種綜合了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積(死體積)及快速檢測(cè)手段等全新的檢測(cè)技術(shù)。在全面提升HPLC的速度、靈敏度及分離度的同時(shí)，保留其原有的實(shí)用性及原理。構(gòu)造

范德米特(VanDeemeter)方程HETP=AdP+B／v+CdP2HETP：理論塔板高度A：渦流擴(kuò)散系數(shù)dP：填料粒徑B：分子徑向擴(kuò)散系數(shù)C：傳質(zhì)因子為流動(dòng)相線(xiàn)速度由該方程可得出結(jié)論：顆粒度越小柱效越高；每個(gè)顆粒度尺寸有自己的最佳柱效的流速；更小的顆粒度使最高柱效點(diǎn)向更高流速(線(xiàn)速度)方向移動(dòng)，而且有更寬的線(xiàn)速度范圍所以降低顆粒度不但提高柱效，同時(shí)也提高速度。原理優(yōu)點(diǎn)超高分離度基于1．7m小顆粒技術(shù)的UPLC與人們熟知的高效液相色譜技術(shù)，具有相同的分離原理。不同的是，UPLC不僅比HPLC具有更高的分離能力，而且結(jié)束了人們多年不得不在速度和分度之間取舍的歷史。使用UPLC可以在很寬的線(xiàn)速度、流速和反壓下進(jìn)行高效的分離工作，并獲得優(yōu)異的結(jié)果。由右圖可見(jiàn)：UPLCTM可以大大提高分離度，同時(shí)色譜峰強(qiáng)度也得到了提高。超高速度新一代UPLC系統(tǒng)用1.7μm顆粒，柱長(zhǎng)可以比用5μm顆粒時(shí)縮短3倍而保持柱效不變，而且使分離在高3倍的流速下進(jìn)行，結(jié)果使分離過(guò)程快了9倍而分離度保持不變。較小的顆粒能提高分析速度而不降低分離度；且VanDeemter理論表明柱長(zhǎng)縮短會(huì)加快分離速度，而顆粒度越小，最佳流速也越大，進(jìn)而可以通過(guò)提高流速來(lái)進(jìn)一步加快分離速度。圖4:UPLC與HPLC：速度比較圖5：UPLC美國(guó)藥典有關(guān)物質(zhì)分析實(shí)例原有HPLC分析需要4個(gè)不同的方法、三根不同的色譜柱，至少需要65分鐘才能完成；UPLC使用了一根色譜柱、一種簡(jiǎn)單方法，在1分鐘內(nèi)即可完成。超高靈敏度由于待測(cè)有機(jī)物的濃度越來(lái)越低，使得靈敏度成為很多分析對(duì)象的關(guān)鍵。UPLC使用小顆粒技術(shù)可以得到更高的柱效從而改善了分離度、更窄的色譜寬度，即更高的靈敏度。圖6:HPLC到UPLCTM：靈敏度的改善無(wú)需折衷方法轉(zhuǎn)換簡(jiǎn)便易與質(zhì)譜串聯(lián)......應(yīng)用食品安全領(lǐng)域1.1農(nóng)藥殘留物檢測(cè)領(lǐng)域農(nóng)藥殘留分析屬于微量至超微量分析范疇，要求檢測(cè)儀器有非常高的靈敏度；同時(shí)，由于其具有種類(lèi)繁多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜等特點(diǎn)，對(duì)檢測(cè)方法的通量和速度也提出了更高的要求。在農(nóng)殘分析檢測(cè)中，UPLC與傳統(tǒng)的HPLC相比較，不僅在分離度、靈敏度和分析速度上得到較大提高，而且很大程度上減少了樣品和試劑的消耗量，具有很好的應(yīng)用前景。1.2食品添加劑分析檢測(cè)中的應(yīng)用隨著食品品種和添加劑種類(lèi)的增加、多種添加劑的復(fù)配使用，迫切需要建立多種添加劑同時(shí)快速檢測(cè)的方法。目前，HPLC技術(shù)是食品添加劑檢測(cè)的最常用方法；而較這一傳統(tǒng)方法而言，在技術(shù)性能上擁有優(yōu)勢(shì)的UPLC得到了更突出的應(yīng)用。藥物開(kāi)發(fā)領(lǐng)域2.1化學(xué)藥品分析在針對(duì)藥物合成的分析方面，UPLC可實(shí)現(xiàn)隨時(shí)快速準(zhǔn)確檢測(cè)合成過(guò)程中的中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。2.2中藥藥品分析Waters公司合成了1．7p．m顆粒度的AcquityUPLC填料，減少了固定相表面殘余硅羥基，因而在分析生物堿類(lèi)樣品時(shí)，流動(dòng)相中只加入酸抑制劑，不需添加有機(jī)胺即可使其獲得良好的分離。由于在流動(dòng)相中避免了有機(jī)胺及鹽的加入，可以在一定程度上降低質(zhì)譜噪音、減少對(duì)質(zhì)譜的污染，且使用的