白酒中鄰苯二甲酸酯類的測定-201404

白酒中鄰苯二甲酸

酯類的測定山東省食品藥品檢驗所王駿2014年4月

主要內(nèi)容

鄰苯二甲酸酯類化合物的特性

檢測方法概述

氣質(zhì)聯(lián)用方法

檢測過程中的關(guān)鍵控制點

檢驗結(jié)果的分析和確認(rèn)一、鄰苯二甲酸酯類特性分析

鄰苯二甲酸酯類化合物（PAEs），是指從鄰苯二甲酸二甲基酯到十三烷基酯，共20多種化合物。是目前最常用的增塑劑，主要

用于聚氯乙烯材料，令聚氯乙烯

由硬塑膠變?yōu)橛袕椥缘乃苣z。其具有種類多、難以降解、生物富

集性強(qiáng)的特點,具有雌激素樣作用，是全球環(huán)境污染最為嚴(yán)重物質(zhì)之一。PAEs性質(zhì)鄰苯二甲酸酯的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)是由一個剛性平面芳烴和兩個可塑的非線性脂肪側(cè)鏈組成,常溫下呈無色油狀粘稠液體。一般難溶于水,易溶于有機(jī)溶劑,屬中等極性物質(zhì)。該類化合物的液態(tài)溫度范圍相當(dāng)寬,具有非常大的流動性和較小的揮發(fā)性和水溶性,這些理化性質(zhì)決定了PAEs的行為特點。幾種重點關(guān)注的PAEs性質(zhì)DMP:沸點282℃。與乙醇、乙醚混溶，溶于苯、丙酮等多種有機(jī)溶劑20℃水中溶解度小于0.1g/L。logP=1.56。DEP：沸點350℃。與乙醇、乙醚混溶，溶于丙酮、苯等有機(jī)溶劑，20℃水中溶解度1g/L。logP=3.3。DBP：沸點340℃。水溶性及揮發(fā)性都很低，但易溶于乙醇、乙醚、丙酮和苯等有機(jī)溶劑也能與大多數(shù)烴類互溶。logP=4.72。DIBP：沸點327℃。在水中溶解度0.05g/L（25℃）。logP=4.11。

DEHP：沸點386℃。不溶于水，溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑和烴類。

logP=7.19。

PAEs特性總結(jié)與分析思路PAEs具有較高的沸點，對光熱穩(wěn)定。大部分PAEs具有親脂性，易溶于非極性溶劑。其中DMP、DEP等有一定的親水性。適合用液液萃取、固相萃取等方式進(jìn)行凈化、富集，但須照顧到具有一定親水性的組分DMP、DEP、DMEP、DEEP。二、白酒中PAEs的檢測方法概述1、方法和標(biāo)準(zhǔn)試劑盒法氣相色譜法(GC)、氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS）。液相色譜法(LC），液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS/MS）。GB/T21911-2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測定

》2、試劑盒法

基于ELISA原理針對鄰苯二甲酸酯一類全部物質(zhì)的試劑盒專門針對DBP的試劑盒檢測限多在0.05ppm~1ppm之間多達(dá)數(shù)十種應(yīng)用分析最為關(guān)注的就是DBP。由于DBP限量低，其余兩種成分限量要求高，還可能有其他沒有限量要求的組分存在。因此，試劑盒篩查發(fā)現(xiàn)有檢出的，并不能確認(rèn)合格與否。專門針對DBP檢測的試劑盒，存在同類物質(zhì)的交叉反應(yīng)，特別是作為異構(gòu)體的DIBP，交叉反應(yīng)率較高，多數(shù)試劑盒都在30%上，存在較高的誤判可能。3、氣相色譜檢測方法

氣相色譜法：氣相色譜法使用FID檢測器，可以對鄰苯二甲酸類物質(zhì)進(jìn)行檢測。但是受靈敏度的限制，對于酒類中的微量DBP不能滿足檢測要求。若采用濃縮富集、以及使用大體積進(jìn)樣的方式雖可提高靈敏度，但考慮到塑化劑類物質(zhì)在各種試劑乃至器具中都存在本底值，濃縮富集可能加劇這種影響，實際操作中應(yīng)當(dāng)慎用。三、白酒中PAEs氣質(zhì)聯(lián)用檢測方法1、方法原理白酒中的PAEs以正己烷提取，使用HP-5MS石英毛細(xì)管柱，經(jīng)氣相色譜分離后，使用帶EI源的單四極桿質(zhì)譜儀，選擇離子模式（SIM）監(jiān)測，以各組分保留時間和特征離子的豐度比定性，外標(biāo)法定量。2、試劑、材料、儀器正己烷（色譜純或重蒸分析純）、氯化鈉；具塞玻璃離心管、玻璃膠頭滴管、渦旋混合器、水浴鍋；16種鄰苯二甲酸酯類化合物標(biāo)樣，正己烷稀釋至濃度為0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液待用；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，具有電子轟擊電離源。3、白酒樣品的處理3.1標(biāo)準(zhǔn)方法稱取白酒樣品5.00g（精確至1mg）于10mL具塞玻璃離心管中，加入2.00mL正己烷，振蕩1min，再加適量氯化鈉，靜置或離心分層；取上層正己烷進(jìn)GC-MS分析。問題：部分組分，如DMP、DEP、DMEP、DEEP等，回收率差，僅為30%~60%。3.2改進(jìn)的方法方法一稱取白酒樣品2.00g（精確至1mg）于10mL具塞玻璃離心管中，置于95℃水浴中30分鐘，驅(qū)除乙醇；離心管取出冷至室溫，補(bǔ)加水至2mL，加入5.00mL正己烷，渦旋提取2min，再加1g氯化鈉，振搖0.5min，靜置或離心分層；取上層正己烷進(jìn)GC-MS分析。方法二稱取白酒樣品2.00g（精確至0.1mg）于10mL具塞玻璃離心管中；加入4.00mL正己烷，渦旋提取2min，再加1g氯化鈉，振搖0.5min，靜置或離心分層；用玻璃滴管將上層正己烷相轉(zhuǎn)移至另一10mL刻度管中，再依次用3mL、2mL正己烷萃取2次，合并三次萃取液，正己烷定容至10mL，搖勻后進(jìn)GC-MS分析。4、儀器操作參數(shù)進(jìn)樣口：溫度250℃，進(jìn)樣量1μL，不分流進(jìn)樣；柱溫程序：初始溫度60℃，保持1min，以20℃/min升溫至220℃，保持1min，再以5℃/min升溫至280℃，保持4min；傳輸線溫度：280℃；載氣：氦氣(純度≥99.999），流速1mL/min；色譜柱：HP-5MS石英毛細(xì)管柱[30m×0.25mm×0.25μm]離子源為EI模式，質(zhì)譜調(diào)諧參數(shù)根據(jù)儀器的特點進(jìn)行調(diào)整，確保充分滿足方法的檢出限要求。各組分監(jiān)測離子附后。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

5、陽性樣品定性驗證試樣待測液與標(biāo)準(zhǔn)品的選擇離子色譜峰在相同保留時間處偏差不超過±0.5%，并且對應(yīng)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比與標(biāo)準(zhǔn)品一致，其豐度對與標(biāo)準(zhǔn)品相比應(yīng)符合：相對豐度＞50%時，允許±10%偏差；相對豐度20%~50%時，允許±15%偏差；相對豐度10%~20%時，允許±20%偏差；相對豐度≤10%，允許±50%偏差，此時可定性確證目標(biāo)分析物。6、檢出限、線性范圍檢出限按照GB/T21911-2008，白酒屬于不含油脂的樣品，檢出限為0.05mg/kg?？赏ㄟ^空白值分析、標(biāo)準(zhǔn)添加確定是否滿足。改進(jìn)的處理方法均可滿足0.05mg/kg的檢出限。線性范圍

0.02μg/mL~1μg/mL。四、關(guān)鍵控制點1、玻璃器皿的洗滌

所用玻璃器皿洗凈后，用重蒸水洗三次，丙酮中浸泡1h，在200℃下烘烤2h，冷卻至室溫備用。全部器皿單獨存放，避免誤用。另外，接觸過標(biāo)準(zhǔn)品的玻璃器皿應(yīng)單獨洗滌，防止交叉污染。2、其他可能導(dǎo)致污染的因素標(biāo)樣的儲存、配置標(biāo)準(zhǔn)系列的過程蒸餾水洗瓶滴管的膠頭試劑瓶的內(nèi)蓋氣相色譜自動進(jìn)樣器針、洗針液和廢液瓶氣相色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣隔墊……3、試劑、器具的選擇與評價正己烷、水：PAEs背景低，含量穩(wěn)定；杜絕使用塑料材質(zhì)的器具；所有的器具和試劑應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的評價；來自不同瓶的試劑均需做空白試驗試劑評價結(jié)果環(huán)己烷石油醚重蒸石油醚乙酸乙酯色譜級正己烷農(nóng)殘級正己烷在溶劑中存在的鄰苯酯類主要有三種，鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）。實驗時應(yīng)嚴(yán)格控制，注意選取空白值低的溶劑。4、質(zhì)控措施空白試驗：每批測定時，須帶至少一個空白試樣，除不加樣品外，其他操作同樣品處理步驟一致，考察背景空白影響。質(zhì)控樣：使用質(zhì)控樣。沒有質(zhì)控樣可采用加標(biāo)回收，在陰性樣品中加入乙醇配制的標(biāo)樣溶液，按相同方法處理后，計算回收率。加標(biāo)水平應(yīng)包含檢出限、兩倍檢出限和十倍檢出限。對于結(jié)果存有疑問需確證的樣品，還應(yīng)做樣品加標(biāo)。在儀器運行高含量的標(biāo)樣或樣品后，應(yīng)進(jìn)行空白溶劑分析，驗證儀器的交叉污染水平。在樣品分析過程中，按照一定頻次加入質(zhì)控樣，驗證測試系統(tǒng)的穩(wěn)定性。五、檢驗結(jié)果的分析1、結(jié)果定性在相同條件下，試樣和標(biāo)樣選擇離子色譜峰的相同保留時間偏差不超過±0.5%，對應(yīng)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比一致，其豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品的偏差符合要求，可定性確證目標(biāo)物。

保留時間和離子豐度比超出但接近定性的正常偏差范圍怎么辦？問題分析保留時間的偏差是否基質(zhì)差異導(dǎo)致？多次進(jìn)樣偏差是單向性還是隨機(jī)性的？——再加標(biāo)確認(rèn)同一化合物，各碎片離子質(zhì)量色譜圖中的保留時間、峰形是否一致？每個組分色譜峰采集的數(shù)據(jù)點數(shù)是否滿足定量要求？15個點以上方可準(zhǔn)確定量。所用儀器定性離子豐度比的RSD是多少？<3%2、質(zhì)控結(jié)果的分析空白：水平低而穩(wěn)定?？瞻字抵貜?fù)測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，影響方法的檢出限。加標(biāo)回收率：應(yīng)符合要求，與加標(biāo)水平相關(guān)。檢出限加標(biāo)應(yīng)特別關(guān)注。結(jié)合