動物細(xì)胞工程

2.2動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體技術(shù)動物細(xì)胞核移植技術(shù)動物細(xì)胞工程常用技術(shù)（基礎(chǔ)）植物細(xì)胞工程常用技術(shù)植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)從動物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它們分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。1、概念及原理原理:細(xì)胞增殖（有絲分裂）選材：

動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們比老齡動物的組織細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，容易培養(yǎng)。分散成單個(gè)細(xì)胞：在進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。植物組織培養(yǎng)選擇離體的植物器官、組織或細(xì)胞2、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程胚胎或幼齡動物的組織器官細(xì)胞懸液10代細(xì)胞50代細(xì)胞剪碎重新用胰蛋白酶處理，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞增殖緩慢，核型可能發(fā)生變化細(xì)胞貼壁10代以內(nèi)，保持正常二倍體核型傳代培養(yǎng)胰蛋白酶（分解彈性纖維等蛋白質(zhì)）接觸抑制分散成單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)繼續(xù)傳代培養(yǎng)時(shí)，少部分細(xì)胞發(fā)生癌變細(xì)胞株細(xì)胞系原代培養(yǎng)簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程分離組織（低幼動物）分散細(xì)胞（胰蛋白酶）原代培養(yǎng)（細(xì)胞增殖）傳代培養(yǎng)（細(xì)胞增殖）分裝動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體3、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境

無菌處理，添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液（2）營養(yǎng)（培養(yǎng)基）

葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素、血清、血漿等。（3）溫度和PH

36.5±0.5℃,7.2～7.4（4）氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2）O2是細(xì)胞代謝所必須的，CO2主要作用是維持培養(yǎng)液的PH4、動物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）皮膚移植材料的培育作為基因工程中的受體細(xì)胞培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物（細(xì)胞分泌蛋白）快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較1.關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述，正確的是()A.細(xì)胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中B.動物細(xì)胞培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、生長素和動物血清等C.動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白D.動物細(xì)胞培養(yǎng)前和培養(yǎng)過程中都要用胰蛋白酶處理D

2、下列屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)主要區(qū)別的是

A.培養(yǎng)基成分不同

B.動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行

C.動物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能

D.動物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株A愈傷組織條件適宜可以傳代培養(yǎng)不分化。3.回答下列有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：⑴在動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面

時(shí)，細(xì)胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的

。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是

，要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是

。

⑵隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)

的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成

細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性

，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量

。相互接觸單層胰蛋白酶衰老甚至死亡接觸抑制不死性降低減少

⑷檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到

期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。⑸在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在

條件下保存細(xì)胞，因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中

的活性降低，細(xì)胞的

速率降低。⑹給患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)闄C(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作

進(jìn)行攻擊

。中冷凍酶新陳代謝抗原

細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上細(xì)胞要貼附于底物上才能生長增殖細(xì)胞要能夠貼附在底物上才能生長繁殖，所以要求培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

要求：接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制動物細(xì)胞生長特性部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。原代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：單個(gè)細(xì)胞10代左右原代培養(yǎng)細(xì)胞40~50代左右

從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖，這樣的培養(yǎng)過程稱為傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40～50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。

細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后少部分細(xì)胞會克服細(xì)胞壽命的自然極限，獲得不死性，這些細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生了突變，正在朝著等同于癌細(xì)胞的方向發(fā)展。這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。

細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。10代～50代細(xì)胞，遺傳物質(zhì)沒發(fā)生改變50代以后的細(xì)胞，遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，可無限增殖將動物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動物個(gè)體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。核移植（難度高）胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易二、動物細(xì)胞核移植技術(shù)分化程度高，移植成活率低2、分類1、概念3、體細(xì)胞核移植技術(shù)過程取供體細(xì)胞取卵母細(xì)胞

供體細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)到MⅡ期

卵母細(xì)胞去核

供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞

兩細(xì)胞融合，核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞

重組胚胎

代孕母牛

生出與供體遺傳物質(zhì)基本相同的個(gè)體動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)（受體細(xì)胞）顯微操作技術(shù)體細(xì)胞核移植技術(shù)細(xì)胞融合技術(shù)胚胎移植技術(shù)高產(chǎn)奶牛１、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植動物的遺傳物質(zhì)最大程度來自有利用價(jià)值的動物提供的細(xì)胞。２、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變。P49討論題3、體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是，克隆動物絕大部分DNA來自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來自受體卵母細(xì)胞。思考題卵細(xì)胞蘇格蘭黑面母羊芬蘭白面母羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎另一頭母綿羊子宮胚胎移植多莉羊多莉羊的培育過程重組細(xì)胞電脈沖刺激1、對比多莉羊和課本高產(chǎn)奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點(diǎn)？多莉克隆過程的受體細(xì)胞是去核卵細(xì)胞，而高產(chǎn)奶牛的克隆過程的受體細(xì)胞是去核卵母細(xì)胞；多莉克隆過程是將供體細(xì)胞核注入受體細(xì)胞，而高產(chǎn)奶牛的克隆過程是將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞。2、討論分析上述哪一種措施更科學(xué)？并說明理由？卵母細(xì)胞當(dāng)中的細(xì)胞周期蛋白含量、活性比卵細(xì)胞高，用它作受體更容易成功；將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞，使克隆動物更像供體動物，操作也方便。思考題3、動物的克隆與植物組織培養(yǎng)一樣嗎？4、用動物體細(xì)胞進(jìn)行克隆的過程,其實(shí)際操作過程是什么？動物克隆過程的實(shí)際是細(xì)胞核移植不思考題4、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景1、加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2、保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量3、轉(zhuǎn)基因克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織器官的移植成功率非常低絕大多數(shù)克隆動物存在健康問題對克隆動物食品的安全性問題也存在爭議5、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體技術(shù)動物細(xì)胞核移植技術(shù)動物細(xì)胞工程常用技術(shù)1.原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)有何區(qū)別?2.哪些細(xì)胞會失去接觸抑制？3.為什么要將組織分散成了單個(gè)細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)？將動物組織消化后的初次培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)。當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞貼滿瓶壁后，用胰蛋白酶處理，制成細(xì)胞懸浮液后再次分瓶繼續(xù)培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)。①單個(gè)細(xì)胞容易和周圍環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換——獲得營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣等，排出代謝廢物；②分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)能使細(xì)胞水平操作的其他技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)。

腫瘤細(xì)胞1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是--------------------（）

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株

C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是------（）

A.動物細(xì)胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動物細(xì)胞培養(yǎng)

AD3、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異B.具有更強(qiáng)的全能性C.取材十分方便D.分裂增殖的能力強(qiáng)D4、一般說來，動物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件（）①無毒的環(huán)境②無菌的環(huán)境③培養(yǎng)基需要加入血清④溫度與動物體溫相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥

D、①②③④⑥D(zhuǎn)

5、動物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)（）①細(xì)胞貼壁②有絲分裂③細(xì)胞分化④接觸抑制⑤減數(shù)分裂⑥原代培養(yǎng)一般傳1－10代A、①②④⑥

B、②③④⑤C、①③④⑥

D、③④⑤⑥A1.體細(xì)胞核移植獲得高產(chǎn)奶牛過程中，利用了哪些現(xiàn)代生物技術(shù)手段？2.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、亞顯微操作技術(shù)、核移植技術(shù)、胚胎移植技術(shù)、細(xì)胞融合技術(shù)否。絕大部分DNA來自于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的DNA，即線粒體中的DNA是來自于受體卵母細(xì)胞。3.無性繁殖和有性繁殖的主要區(qū)別是什么？4.什么是病毒的滅活？有性繁殖是通過產(chǎn)生有性生殖細(xì)胞——配子（包括精細(xì)胞、卵細(xì)胞），配子結(jié)合后生長成新的個(gè)體。無性繁殖是不經(jīng)生殖細(xì)胞結(jié)合的受精過程，由母體的一部分直接產(chǎn)生子代的繁殖方法。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。5.滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是什么？病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。1.一只羊的卵細(xì)胞核被另一只羊的體細(xì)胞核置換后，這個(gè)卵細(xì)胞經(jīng)過多次分裂，再植入第三只羊的子宮內(nèi)發(fā)育，結(jié)果產(chǎn)下一只羊羔。這種克隆技術(shù)具有多種用途，但是不能A．有選擇地繁殖某一性別的家畜B.繁殖家畜中的優(yōu)秀個(gè)體C．用于保存物種D.改變動物的基因型D3.下列哪一項(xiàng)屬于克??？A.將雞的某個(gè)DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B.將抗藥菌的某基因引人草履蟲的細(xì)胞內(nèi)C.將鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過免疫的脾細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞D.將某腫瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個(gè)細(xì)胞系D2.科學(xué)家將雌黑鼠乳腺細(xì)胞的細(xì)胞核移入白鼠去核的卵細(xì)胞內(nèi)，待發(fā)育成早期胚胎后移植入褐鼠的子宮，該褐鼠產(chǎn)下小鼠的體色和性別分別是A.黑、雌B.褐、雌C.白、雄D.黑、雄A動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體技術(shù)動物細(xì)胞核移植技術(shù)動物細(xì)胞工程常用技術(shù)

“番茄—馬鈴薯”（理想圖）通過長期的實(shí)驗(yàn)，科學(xué)家們采用體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得了“番茄—馬鈴薯”植株。雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化過程植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去壁去壁人工誘導(dǎo)方法？植物細(xì)胞B植物體細(xì)胞雜交技術(shù)纖維素酶、果膠酶等物理法：離心、振動、電激等化學(xué)法：聚乙二醇等試劑篩選如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶嗎？動物細(xì)胞也能融合嗎？動物細(xì)胞的全能性會隨著動物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到抑制，分化潛能逐漸變?nèi)跛伎碱}1.植物體細(xì)胞雜交時(shí)首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？

酶解法，如纖維素酶或果膠酶2.動物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無需，因?yàn)閯游锛?xì)胞無細(xì)胞壁3.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、振動、電激等物理方法；聚乙二醇等化學(xué)方法4.動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)5.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個(gè)體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個(gè)體嗎？不能，只能形成雜種細(xì)胞可用胰蛋白酶將細(xì)胞分散三、動物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：

動物細(xì)胞融合（cellfusion）也稱為細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。結(jié)果：“2個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞”→“1個(gè)雜交單核細(xì)胞””2、誘導(dǎo)方法物理法：離心、振動、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核

滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成單核雜種細(xì)胞原理：細(xì)胞膜具有一定的流動性4、過程：動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合雜交細(xì)胞AB核融合發(fā)生在有絲分裂過程中（膜融合、質(zhì)融合、核融合）注意：動物細(xì)胞的融合也需要把多個(gè)兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)胞。3、原理：細(xì)胞膜的流動性6、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體。5、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理誘導(dǎo)方法結(jié)果用途、優(yōu)點(diǎn)意義細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理（離心、振動、電刺激）化學(xué)（PEG）物理、化學(xué)方法滅活的病毒培育新品種制備單克隆抗體、病毒疫苗、干擾素等形成雜種植株形成雜種細(xì)胞，生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品突破有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能1、在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是A．誘導(dǎo)融合的方法完全相同B．所用的技術(shù)手段完全相同C．所采用的原理完全相同D．都能形成雜種細(xì)胞D2、下列關(guān)于動物細(xì)胞融合，敘述正確的是A．動物細(xì)胞融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞遺傳信息的雙核或多核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞B．原理是細(xì)胞的全能性C．打破生殖障礙，使遠(yuǎn)緣雜交成為現(xiàn)實(shí)D．常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、離心等3、動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是A.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞DB1.什么是抗體？2.主要分布在哪里？3.由什么細(xì)胞產(chǎn)生提問？抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。四、制備單克隆抗體技術(shù)主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中?？贵w抗原B淋巴細(xì)胞刺激增殖分化效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）分泌每一個(gè)漿細(xì)胞只能分泌一種抗體4.傳統(tǒng)抗體的生產(chǎn)方法及缺陷？反復(fù)注射抗原克隆單一的效應(yīng)B細(xì)胞不能無限增殖產(chǎn)量低、純度低抗體特異性差①設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞——只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞——能無限增殖米爾斯坦和科勒雜交瘤細(xì)胞②制備過程：繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)：5.單克隆抗體的制備既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體注入小鼠細(xì)胞融合分離抗原注入小鼠體內(nèi)骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)選擇培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)從腹水提取從培養(yǎng)液提取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體抗原（羊的紅細(xì)胞）注射到小鼠體內(nèi)獲取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合滅活的病毒、PEG多種雜交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基雜交瘤細(xì)胞抗體陽性檢測足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔培養(yǎng)液小鼠腹水單克隆抗體抗原-抗體特異性結(jié)合的原理克隆化培養(yǎng)5.單克隆抗體的制備篩選制備單克隆抗體過程中兩次篩選第一次篩選是將未融合的B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞以及BB融合、瘤瘤融合的細(xì)胞通過選擇培養(yǎng)基淘汰，篩選出雜交瘤細(xì)胞。第二次篩選是將產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞通過細(xì)胞培養(yǎng)用相應(yīng)抗原檢測的辦法篩選出來。因?yàn)閺捏w內(nèi)取免疫過的B淋巴細(xì)胞時(shí)可以取出很多種，因此形成的雜交瘤細(xì)胞也有很多種，所以需篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。骨髓瘤細(xì)胞免疫小鼠單克隆抗體篩選克隆、篩選體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞（選擇培養(yǎng)基）（抗體檢測）細(xì)胞融合雜交細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，產(chǎn)量大經(jīng)過免疫雜交瘤細(xì)胞

①作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合②用于運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療6.單克隆抗體的應(yīng)用既不損傷細(xì)胞，又減少了用藥劑量，療效高、毒副作用小的新型藥物優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速動物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體技術(shù)過程：不同的動物細(xì)胞雜交細(xì)胞原理：

.應(yīng)用：主要用于制備

。

制備：獲取

細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合、篩選

細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)提取單克隆抗體應(yīng)用：作為

，用于治療疾病或運(yùn)載藥物。

誘導(dǎo)劑細(xì)胞膜的流動性單克隆抗體B淋巴雜交瘤生物導(dǎo)彈課堂小結(jié)：1、單克隆抗體是指（）

A.單個(gè)骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體

B.單個(gè)B淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體C.單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度單一的抗體D.單個(gè)抗體通過克隆化，產(chǎn)生大量抗體C2、“生物導(dǎo)彈”是指（）

A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞

D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物

D練一練3.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞③小鼠骨髓瘤細(xì)胞④骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞

A.②④B．①③⑤C.①②③④

D．②③C4.生產(chǎn)單克隆抗體時(shí)，在培養(yǎng)基中加入某種試劑能篩選出雜交瘤細(xì)胞，該試劑的作用是

A．能選擇性抑制骨髓瘤細(xì)胞的DNA復(fù)制

B．能阻止淋巴細(xì)胞的原癌基因被激活

C．能抑制淋巴細(xì)胞的DNA復(fù)制

D．能阻止雜交瘤細(xì)胞核糖體上所有蛋白質(zhì)的合成A5．在現(xiàn)代生物科技的應(yīng)用中，需要進(jìn)行檢測與篩選的是（雙選）(

)A．對植物的離體組織進(jìn)行培養(yǎng)，大規(guī)模培育優(yōu)良品種B．將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，制備單克隆抗體C．利用人的皮膚細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，解決自體移植皮膚不足的問題D．將抗蟲基因?qū)胫参锛?xì)胞，培育具有抗蟲特性的新植株植物組織培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)基因工程BD6.如下圖所示細(xì)胞是經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選出的能產(chǎn)生單克隆抗體A的雜交瘤細(xì)胞，關(guān)于該細(xì)胞中標(biāo)出的三個(gè)基因的開閉狀態(tài)，下列說法正確的是A．其中有一個(gè)是打開的，即A抗體基因

B．其中有兩個(gè)是打開的

C．其中有一個(gè)是打開的，即ATP合成酶基因

D．其中三個(gè)都是打開的B7.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞