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文檔簡介
1970年,有兩位科學家做了一個人—鼠細胞融合的實驗,以證明細胞膜上的蛋白質分子是運動的。那么,如何實現(xiàn)人—鼠細胞的融合,以及動物細胞融合后還有什么用途呢?
兩個細胞正在融合受精作用2.2.2動物細胞融合與單克隆抗體學習目標一:動物細胞融合(細胞雜交)1、概念:2、結果:形成單核的雜交細胞3、原理:細胞膜的流動性4、誘導方法物理法:離心、振動、電激化學法:聚乙二醇(PEG)生物法:滅活的病毒(最常用)“2個或多個動物細胞”→
“1”、“雜交單核細胞”思考:為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活?不滅活行嗎?因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布,細胞膜打開,細胞發(fā)生融合,不滅活的話病毒會感染細胞,導致疾病。滅活喪失感染性,但保留融合活性。用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程:細胞核滅活病毒顆粒細胞核雜交單核細胞5、過程:動物細胞A動物細胞B誘導,融合(膜、質、核融合)1個完整的雜交細胞AB6、意義:成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段;為制造單克隆抗體開辟了新途徑。突破了有性雜交方法的局限,使遠緣雜交成為可能。7、應用:強調:效應B淋巴細胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞,下文將其簡稱為B淋巴細胞抗體:能夠與抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白。效應B細胞(漿細胞)記憶B細胞學習目標二:單克隆抗體B淋巴細胞增殖分化受抗原刺激能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞(即效應B細胞)??贵w的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法:抗原反復注射動物從動物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點:產(chǎn)量低、純度低,且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個問題呢?單克隆抗體(雜交瘤技術)讀下面一段資料,找出單克隆抗體的概念人們發(fā)現(xiàn),動物在免疫反應的過程中,體內的B細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體,但是每個B細胞只分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體,必須用單個B細胞進行無性繁殖,即克隆。單克隆抗體:單個B細胞克隆產(chǎn)生的化學性質單一、特異性強的抗體。資料分析提示1:對B細胞進行細胞培養(yǎng)可行嗎?提示2:我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的?問題:如何大量生產(chǎn)單克隆抗體?請嘗試設計一個方案。學習目標二:單克隆抗體一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術設計方案:動物細胞融合技術單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體,又能大量增殖的細胞1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗BB、B瘤、瘤瘤(B、瘤)(一選)選擇性培養(yǎng)基:只有雜交瘤細胞才能存活獲得產(chǎn)生相應抗體的B細胞(二選):選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內培養(yǎng)雜交瘤細胞特點:既能產(chǎn)生特異性抗體,又能大量增殖。單克隆抗體制備過程注射抗原效應B淋巴細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選,繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體思考:此過程利用的原理和技術有哪些?免疫原理細胞融合技術動物細胞培養(yǎng)技術
2、該方案能達到預期效果嗎?為什么?4、圖中B為________過程,常用_________作為誘導劑,該細胞繼承___________的遺傳特性,既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產(chǎn)生______5、C過程指細胞培養(yǎng),該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段,其中_____代以內的的細胞屬于細胞株。制備單克隆抗體B細胞抗體細胞融合滅活病毒雙親細胞分泌抗體無限增殖原代傳代50B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC1、下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法,設計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案3、單克隆抗體的應用:單克隆抗體的優(yōu)點:特異性強、靈敏度高、可大量制備②應用于運載藥物:制成“生物導彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療既不損傷正常細胞,又減少了用藥劑量。①作為診斷試劑(最廣泛的用途):準確識別各種抗原物質,并特異性結合優(yōu)點:準確、高效、簡易、快速“生物導彈”=單克隆抗體+藥物
獲得雜種植株用途誘導方法使細胞分散后誘導細胞融合去除細胞壁后誘導原生質體融合細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目原理比較植物體細胞雜交、動物細胞融合獲得雜種細胞、制備單克隆抗體離心、電激、振動、聚乙二醇離心、電激、振動、聚乙二醇滅活病毒小結:三個重點過程三個“一”一個誘導動物細胞融合的新方法
——滅活病毒一個新細胞——雜交瘤細胞一個優(yōu)勢——單克隆抗體特異性強、靈敏度高、可大量制備的優(yōu)勢動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程細胞核移植過程P55:1、植物體細胞雜交技術與動物細胞融合技術有什么不同?植物體細胞雜交技術與動物細胞融合技術基本相同,不同的是植物體細胞融合前需去掉細胞壁,然后再融合;動物細胞融合是兩個體細胞直接融合。1、在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中,正確的是()A、結果是相同的
B、雜種細胞的形成過程基本相同C、操作過程中酶的作用相同D、誘導融合的手段相同B2、單克隆抗體制備過程中,骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后,要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤
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