微透析-液相色譜-化學(xué)發(fā)光聯(lián)用微透析技術(shù)應(yīng)用于中藥藥動(dòng)學(xué)的研究(張群林)

微透析-液相色譜-化學(xué)發(fā)光聯(lián)用

技術(shù)應(yīng)用于中藥藥動(dòng)學(xué)的研究安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院張群林副教授qlzhang@.c/p>

匯報(bào)內(nèi)容一個(gè)人簡歷二化學(xué)發(fā)光技術(shù)三液相色譜—化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)四微透析在體采樣技術(shù)五丹參藥動(dòng)學(xué)研究個(gè)人簡歷1992.9-1996.6沈陽藥科大學(xué)中藥系1996.7-2000.8安徽省藥物研究所中藥新藥研發(fā)2000.9-2005.6中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)獲分析化學(xué)博士學(xué)位（導(dǎo)師：崔華教授）2005.7“安徽醫(yī)科大學(xué)引進(jìn)人才”2005.7－現(xiàn)在藥學(xué)院藥物分析教研室2006.8任副教授、碩士生導(dǎo)師、中青年學(xué)術(shù)帶頭人

2009.7任教研室主任化學(xué)發(fā)光[1]作為一種自然現(xiàn)象很早就為人類所注意1877年，Radziszewski[2]

證實(shí)在乙醇－KOH溶液中洛粉堿(Lophine,2,4,5-三苯基咪唑)被H2O2等氧化發(fā)出綠光十九世紀(jì)末期，德國科學(xué)家Wiedemann[3]首次解釋了化學(xué)發(fā)光的機(jī)制[1]B.T.P.Whitehead,L.J.Kricka,et.al.Clin.Chem.25(1979)1531.[2]B.Radziszewski,Chem.Ber.10(1877)70.[3]E.Wiedemann,Ann.Phys.Chem.34(1888)446.

化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象是一種相對(duì)簡單的有機(jī)反應(yīng)過程化學(xué)發(fā)光(Chemiluminescence,CL)[4]R.Dubois,Acad.Sci.132(1901)431.[5]K.vanDyke,F.McCapra,I.Behesti,Bioluminescneceand

Chemiluminescence,InstrumentsandApplications.

Vol1.FL:CRCPress,1985.[6]K.Gleu,Z.Petsch.Angew.Chem.48(1935)57.1901年，法國生物學(xué)家Dubois[4]引入了熒光素(Luciferin)和熒光素酶(Luciferase)

的概念1902年，Schmitz合成發(fā)光試劑魯米諾(Luminol),它曾被廣泛用于血跡鑒定；1928年,Albrecht觀察到魯米諾在堿性介質(zhì)中的化學(xué)發(fā)光行為[5]

1935年,Gleu和Petsch[6]報(bào)道了光澤精(Lucigenin)與H2O2反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光

這些發(fā)光試劑的合成，對(duì)于化學(xué)發(fā)光發(fā)展為分析化學(xué)的一種重要手段起到了非常重要的作用化學(xué)發(fā)光(CL)的發(fā)展歷史由于大多數(shù)化學(xué)發(fā)光非常微弱，且稍縱即逝，早期的化學(xué)發(fā)光研究主要集中在對(duì)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)現(xiàn)象的觀察和反應(yīng)機(jī)理的探討上，其發(fā)展一直比較緩慢。

1945年出現(xiàn)了光電倍增管，1950年出現(xiàn)了商品化的化學(xué)發(fā)光檢測裝置到了八十年代，隨著生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)和材料科學(xué)的興起，化學(xué)發(fā)光才被真正應(yīng)用于分析化學(xué)并迅速得到了發(fā)展目前，化學(xué)發(fā)光分析的研究和應(yīng)用已成為當(dāng)前微量和痕量分析領(lǐng)域一個(gè)十分重要的研究方法化學(xué)發(fā)光(CL)的發(fā)展歷史化學(xué)發(fā)光(CL)的優(yōu)點(diǎn)1.靈敏度極高

熒光素酶和磷酸三腺甙(ATP)的化學(xué)發(fā)光分析，可測定210-17mol/L的ATP，即可檢測出一個(gè)細(xì)菌中

的ATP含量2.線性范圍寬

至少二個(gè)數(shù)量級(jí)以上3.儀器設(shè)備簡單

不需要光源、單色器和背景校正4.分析速度快

多數(shù)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)是快速反應(yīng)，在瞬間或幾秒即可完成,100samplesh-15.易于自動(dòng)化

適合與HPLC和HPCE等其它的分離技術(shù)聯(lián)用，作為其高靈敏度的檢測器

化學(xué)發(fā)光(CL)的基本原理化學(xué)反應(yīng)釋放出的化學(xué)能激發(fā)產(chǎn)物分子或體系共存的其它分子，這些分子由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)產(chǎn)生光輻射的現(xiàn)象。一.化學(xué)反應(yīng)必須釋放出足夠的能量可以使某種反應(yīng)產(chǎn)物或中間體到達(dá)激發(fā)態(tài)；二.反應(yīng)歷程必須有利于形成激發(fā)態(tài)產(chǎn)物；三.這種激發(fā)態(tài)物質(zhì)必須具有一定的發(fā)光量子效率，或者能夠?qū)⑵淠芰哭D(zhuǎn)移給共存的某種熒光物質(zhì)，產(chǎn)生光輻射。

化學(xué)發(fā)光(CL)的必須條件化學(xué)發(fā)光(CL)的基本類型直接化學(xué)發(fā)光A+B→C*+DC*→C+hυ

間接化學(xué)發(fā)光

A+B→C*+DC*+F→C+F*

F*→F+hυ

化學(xué)發(fā)光(CL)的定量原理定量原理：在化學(xué)發(fā)光分析中，被分析物相對(duì)于發(fā)光試劑小得多，對(duì)于一級(jí)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)：

dc/dt=Kc定量依據(jù)：（1）在一定條件下，峰值光強(qiáng)度與被測物濃度成線性（2）在一定條件下，曲線下面積為發(fā)光總強(qiáng)度(S)，其與被測物濃度成線性

化學(xué)發(fā)光(CL)的常見反應(yīng)體系

魯米諾及其衍生物發(fā)光體系吖啶類發(fā)光體系四價(jià)鈰發(fā)光體系其它發(fā)光體系復(fù)雜體系中低含量物質(zhì)的檢測——分析化學(xué)挑戰(zhàn)之一高選擇性和高靈敏度的分析技術(shù)化學(xué)發(fā)光是高靈敏分析技術(shù)，靈敏度可與質(zhì)譜媲美分布廣泛、療效確切的黃酮，易于發(fā)生氧化還原反應(yīng)前期工作基礎(chǔ)液相色譜—化學(xué)發(fā)光（HPLC-CL）聯(lián)用技術(shù)分析中藥黃酮成分ChemiluminescenceProducinglightwithchemicals

化學(xué)發(fā)光(Chemiluminescence)技術(shù)液相色譜-化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)

發(fā)光新體系規(guī)律和機(jī)理中藥材指紋圖譜（復(fù)方）制劑中藥藥動(dòng)學(xué)

葛根素注射液中葛根素含量的測定線性范圍:

1.3×10-9-8.0×10-7

g/mL

檢測限:

8.4×10-10

g/mL

R.S.D.:

1.86%(n=11)at5.0×10-8

g/mL

首次報(bào)道化學(xué)發(fā)光法測定葛根素JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis,2004,36(3):587–592草豆蔻中豆蔻明含量的測定線性范圍:

1.0×10-8-8.0×10-6

g/mL

檢測限:

1.2×10-9

g/mL

R.S.D.:

1.15%(n=11)at8.0×10-7

g/mL

首次報(bào)道化學(xué)發(fā)光法測定豆蔻明PhytochemicalAnalysis,2005,16(1-2):440-445.中藥沙棘制劑中的三種黃酮含量的測定沙棘(Hippophae

rhamnoidesL.)是胡頹子科沙棘屬的植物，主要種植于中國的北方和西南地區(qū)。它是一種傳統(tǒng)的中草藥，很早以前就被人們用于止咳、助消化、促進(jìn)血液循環(huán)和止痛。沙棘油還可以治療皮膚病和血栓。

30圖2槲皮素、山萘酚和異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)化合物的DAD(a)和CL(b)檢測色譜圖QU,IS:4.5×10-7gmL-1KA:2.0×10-7gmL-1圖3

心達(dá)康膠囊(a)和沙棘顆粒(b)樣品中三種黃酮醇的CL檢測色譜圖

JournalofSeparationScience,2005,28(11):1117-1256.圖4二十種黃酮和酚類化合物的化學(xué)發(fā)光檢測色譜圖首次報(bào)道能同時(shí)響應(yīng)化合物種類最多的CL檢測器JournalofChromatographyA2005,1095,94-101.黃酮具有抗氧化、抗癌、抑制脂肪酶等顯著藥理作用，受到國內(nèi)外醫(yī)藥界的廣泛重視，但其藥動(dòng)學(xué)研究資料的缺乏，制約了黃酮類新藥的研發(fā)與體內(nèi)作用機(jī)制研究生物樣品中痕量黃酮的高通量、高靈敏分析技術(shù)是研究藥動(dòng)學(xué)的基本前提中藥藥動(dòng)學(xué)研究所面臨的生物樣本具有藥物含量低（樣品中的中藥成分濃度常在ng/mL水平或以下）、藥物濃度變化范圍大（需要測定的血藥濃度范圍為峰濃度Cmax―1/20Cmax

）、干擾組分多且不確定、樣品不易重復(fù)獲得等特點(diǎn)

HPLC-CL聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用于黃酮藥動(dòng)學(xué)研究液相色譜–化學(xué)發(fā)光法測定大鼠血漿中

山奈酚濃度及其藥動(dòng)學(xué)研究

研究背景山奈酚的性質(zhì)藥理作用廣泛，藥動(dòng)資料缺乏

僅有兩篇報(bào)道：家兔灌胃，HPLC-DAD，前處理復(fù)雜

大鼠靜注，HPLC-UV，未報(bào)道藥動(dòng)學(xué)參數(shù)實(shí)驗(yàn)方法HPLC-CL條件的優(yōu)化1.色譜分離條件HPLC-CL條件的

優(yōu)化流動(dòng)相不增加背景、不熄滅發(fā)光信號(hào)；不生成沉淀發(fā)光試劑

混合次序發(fā)光反應(yīng)試劑的

濃度、試劑流速等2.發(fā)光反應(yīng)兼容性3.

流路的優(yōu)化4.發(fā)光反應(yīng)條件分離度、峰形、

保留時(shí)間HPLC-CL實(shí)驗(yàn)裝置示意圖血漿樣品的預(yù)處理方法取血漿樣品100μL，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液（0.2mg·mL-1

異鼠李素）5.0μL，20%的磷酸溶液10μL酸化，加甲醇200μL，渦旋混合1.0min，離心（10000r·min-1）10min后，取上清液10μL進(jìn)樣。方法學(xué)考察專屬性1線性關(guān)系和檢測限2精密度、準(zhǔn)確度與提取回收率3穩(wěn)定性4結(jié)果專屬性SampleBlankBlank+KA+IS結(jié)果線性關(guān)系和檢測限

線性范圍：2.0×10-9－2.0×10-6g·ml-1線性方程：y=0.8626x+5.553(r=0.9991,n=7)檢測限：1.0×10-9g·mL-1。結(jié)果精密度、準(zhǔn)確度與提取回收率

日內(nèi)和日間RSD均小于5.0%，回收率大于80.0%

Added(ng·mL-1)Found(ng·mL-1)Precision(%RSD)Accuracy(%)Recovery(%)Intra-day20.016.2±0.63.780.889.2±3.1160.0151.3±3.02.094.697.1±1.710001001.2±32.83.3100.195.3±2.7Inter-day20.016.0±0.74.480.090.0±4.3160.0150.7±97.4±2.41000.01002.4±13.01.3100.295.1±2.4結(jié)果4℃穩(wěn)定性

Concentration(ng·mL-1)0h48hDeviation(%)±sRSD(%)±sRSD(%)20.016.0±0.63.816.4±160.0152.1±3.02.0146.6±1000.0997.2±28.92.9949.5±凍融穩(wěn)定性

Concentration(ng·mL-1)Beforefreeze-thawingAfterfreeze-thawingDeviation(%)x±sRSD(%)x±sRSD(%)20.016.0±0.63.815.7±160.0152.1±3.02.0142.2±1000.0997.2±28.92.9951.6±藥動(dòng)學(xué)研究

給藥1250mg/kgBW隨機(jī)分組2500mg/kgBW前處理取血C-T數(shù)據(jù)DAS2.0藥動(dòng)參數(shù)首次成功將HPLC-CL聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用于中藥藥動(dòng)學(xué)的研究多峰現(xiàn)象肝腸循環(huán)結(jié)果藥動(dòng)學(xué)參數(shù)ParametersDoses(mg·kg-1BW)25001250Tmax

(h)1.21±0.461.08±0.43Cmax(ng·mL-1)232.90±5.14165.67±1.99AUC0-∞(ng·h·mL-1)1728.41±57.31729.01±29.44MRT0-∞(h)13.38±3.874.77±2.06t1/2(h)9.27±1.843.30±1.05JournalofChromatographyB,2009,877(29),3595-3600.30微透析采樣技術(shù)微透析技術(shù)(microdialysis,MD)時(shí)間分辨性、空間分辨性不破壞機(jī)體完整性提供游離態(tài)小分子化合物樣品可不經(jīng)預(yù)處理直接用于測定樣品量少、濃度低微透析多個(gè)器官連續(xù)取樣與高靈敏度分析技術(shù)聯(lián)用活體內(nèi)待測組分的實(shí)時(shí)、連續(xù)、檢測

微透析采樣技術(shù)微透析–液相色譜–化學(xué)發(fā)光法測定大鼠血和腦組織中丹參酚類化合物濃度及其藥動(dòng)學(xué)研究

脂溶性成分二萜醌類水溶性成分酚類丹參素DSS、原兒茶酸PA、原兒茶醛PAL、咖啡酸CA丹酚酸A、丹酚酸B等丹參近期藥理研究發(fā)現(xiàn)：丹參酚類化合物具有改善血液循環(huán)、減少腦梗死面積、抑制腎素血管緊張素系統(tǒng)、和清除自由基、保護(hù)損傷的腦組織等藥理作用。研究背景研究背景丹參水溶性成分的藥動(dòng)學(xué)研究吸收和分布：

丹參提取物給家兔灌服，采用液-液萃取技術(shù)對(duì)家兔血漿中的丹參素進(jìn)行萃取，用膠束毛細(xì)管電泳進(jìn)行測定。灌胃后30min，肝、肺、腎、腦組織中的丹參素濃度最高；70min時(shí)，心組織中丹參素濃度最高；50min時(shí)，脾組織中DSS濃度最高。灌胃給藥后，DSS在很短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行吸收、分布。其中肝組織中的丹參素濃度最大，表明DSS在新西蘭大白兔體內(nèi)的代謝主要在肝組織中進(jìn)行。楊燕,楊榮,衛(wèi)引茂,等.藥物分析雜志.2008,28(3):362.研究背景代謝和排泄

Zhang等利用HPLC-UV和HPLC-MS對(duì)大鼠灌胃200mg·kg-1丹參總酚酸（丹參素

2.3%，原兒茶醛4.6%，丹酚酸B60.7%）后尿液和糞便中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究，在收集的24h尿液中檢測到5個(gè)代謝產(chǎn)物：丹參素、咖啡酸、阿魏酸、異阿魏酸和3,4-二甲氧基苯乙酸，而在糞便中未檢測到代謝產(chǎn)物。

Shen等利用LC/TOFMS，對(duì)大鼠靜脈注射純化的丹酚酸A后血漿中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)了5個(gè)代謝產(chǎn)物：單葡萄糖醛酸化丹酚酸A、甲基葡萄糖醛酸化丹酚酸A、甲基丹酚酸A，二甲基丹酚酸A和二甲基葡萄糖醛酸化丹酚酸A。ZhangJ,HeY,CuiM,etal.BiomedicalChromatography.2005,19(1):51.ShenY,WangX,XuL,etal.RapidCommunicationsinMassSpectrometry.2009,23(12):1810.研究背景藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及生物利用度

Guo等用LC-MS測定了大鼠注射冠心寧凍干粉后血漿中DSS，PA，PAL，綠原酸，CA和SalB的濃度。獲得了這幾種酚類化合物的t1/2，Cmax，Tmax。

潘堅(jiān)揚(yáng)等考察了丹參素在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和口服生物利用度。用超高壓液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定丹參素血藥濃度，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，丹參素的口服生物利用度為9.53%，口服生物利用度較差。

Han等用LC-MS測定了大鼠靜脈注射劑量為10、20和40mg·kg-1

的純度為98%的SalB后的血藥濃度，求算了AUC，MRT，t1/2，V等參數(shù)，發(fā)現(xiàn)AUC隨劑量增加，各劑量組之間MRT，t1/2和V無差異。GuoXR,ChenXH,LiL,etal.

JournalofChromatographyB.2008,873(1):51.潘堅(jiān)揚(yáng),趙筱萍,邵青.中國中藥雜志.2008,33(2):146.HanDE,GaoZD,ZhaoD,etal.BiomedicalChromatography.2009,23(10):1073.研究背景腦部藥動(dòng)學(xué)研究

羅世英等對(duì)大鼠灌胃丹參水提物（DSS32.4,PAL6.0,SalB36.2mg·kg-1）采用液-液萃取法對(duì)血清樣品和腦組織勻漿樣品進(jìn)行預(yù)處理，用HPLC-UV法測定，在大鼠血清中檢測到DSS、PAL和SalB，在腦組織勻漿中未檢測到這三種物質(zhì)。但由于紫外檢測器靈敏度較低，腦勻漿中未檢測到的原因有待進(jìn)一步試驗(yàn)證明？

鄭曉暉等在研究復(fù)方丹參方中使藥冰片對(duì)君藥丹參藥動(dòng)學(xué)和組織分布的影響時(shí)，用丹參水煎液對(duì)新西蘭大白兔灌胃給藥（10g·kg-1），通過從小腦延髓池抽取腦脊液，以及腦組織勻漿采用LC-MS，在腦脊液和腦組織勻漿中測得DSS，但未報(bào)道丹參素在腦組織中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。羅世英,鐘志國,林堅(jiān)濤,等.中藥藥理與臨床.2009,25(4):44.鄭曉暉,趙欣,房敏峰,等.西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版).2007,28(2):170.研究背景存在問題：腦組織藥代動(dòng)力學(xué)研究的報(bào)道較少。測定腦組織中藥物含量多采取腦組織勻漿法或抽取腦脊液進(jìn)行測定離體干擾生命過程樣品處理繁瑣易被污染準(zhǔn)確性需進(jìn)一步評(píng)價(jià)積極尋求一種實(shí)時(shí)、連續(xù)的腦部采樣技術(shù)是當(dāng)前迫切需要解決的問題！30微透析（microdialysis,MD）采樣技術(shù)應(yīng)用于丹參藥動(dòng)學(xué)研究

臺(tái)灣Tsai課題組用HPLC-UV法測定了大鼠靜脈注射純度為98%的丹酚酸B（100mg?kg-1）后，血液和膽汁中的游離SalB，線性范圍為0.1–50μg?mL-1，并報(bào)道了藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。ChenYF,JawI,ShiaoMS,etal.JournalofChromatographyA.2005,1088(1-2):140.研究內(nèi)容HPLC-CL體系的建立微透析采樣技術(shù)的研究丹參藥動(dòng)學(xué)研究實(shí)驗(yàn)一靜脈注射給藥實(shí)驗(yàn)二口服給藥丹參六種水溶性成分結(jié)構(gòu)色譜與化學(xué)發(fā)光分析條件的優(yōu)化流動(dòng)相組成、pH、流速發(fā)光反應(yīng)流路、試劑濃度、pH、流速實(shí)驗(yàn)一：色譜柱：Shim-packODS,250×4.6mmI.D.5μm

柱溫:30°C流速：1.0mL·min-1流動(dòng)相：A：水（含0.1%磷酸，v/v）

B：甲醇（含0.1%磷酸，v/v）梯度洗脫：0–15min，25–50%B；15–30min，50%B進(jìn)樣量：20μL。

實(shí)驗(yàn)二：流動(dòng)相：0.1%磷酸–甲醇（92:8，v/v），等度洗脫其他條件同實(shí)驗(yàn)一液相色譜的分析條件色譜與化學(xué)發(fā)光分析條件的優(yōu)化微透析采樣儀器設(shè)備：

腦立體定位儀

微量注射泵

動(dòng)物恒溫控制器

血管探針

腦探針.Text2Text3模型組BloodprobeBrainprobe血管探針的植入腦探針的植入微透析條件的優(yōu)化探針回收率的測定

體外：Rinvitro=Cdia/Cs

體內(nèi)：Rin

vivo=(Cperf

?Cdial)/Cperf

實(shí)際濃度：Cf

=Cm/Rinvivo

流速對(duì)探針回收率的影響

血管探針：2.5、2.0、1.5μL·min-1

腦探針：1.0、0.8、0.6μL·min-1

濃度對(duì)探針回收率的影響

在所選濃度范圍內(nèi)無影響探針回收率的穩(wěn)定性

4h內(nèi)的體外回收率的RSD給藥及采樣給藥

實(shí)驗(yàn)一：丹參注射液（DSS3.5mg/kg，PAL0.5mg/kg，SalB0.48mg/kg）尾靜脈注射

實(shí)驗(yàn)二：丹參提取物灌胃(DSS，40mg/kg，PAL149mg/kg,SalB

50

mg/kg)灌胃

樣品采集

灌流液種類：林格液

實(shí)驗(yàn)一：采樣部位：腦；灌流液流速2.0μL/min。采樣間隔15min

實(shí)驗(yàn)二：采樣部位：血管、腦同步；灌流液速度：血管2.0μL/min；

腦0.8μL/min；采樣時(shí)間間隔：血管15min；腦30min實(shí)驗(yàn)結(jié)果

專屬性

樣品中的雜質(zhì)不干擾測定

線性關(guān)系和檢測限

各酚類化合物的線性關(guān)系良好（R＞0.990）。

LOD：實(shí)驗(yàn)一：0.22~12.80ng/mL，實(shí)驗(yàn)二：0.29~0.80ng/mL

精密度和準(zhǔn)確度

日內(nèi)和日間RSD均小于5.5%DSS丹參素；PA原兒茶酸；PAL原兒茶醛；CA咖啡酸；SalB丹參素B；SalA丹酚酸A濃度：64.0ng/mLAbsorbanceRelativeCLIntensity(a.u.)HPLC-CL法檢測六種丹參酚類化合物色譜圖UVCL腦和血樣品的專屬性色譜圖

HPLC-CLHPLC-UVbloodmicrodialysateBlankbrian

microdialysateBlankbloodmicrodialysateBrianmicrodialysate丹參藥動(dòng)學(xué)研究實(shí)驗(yàn)一：丹參注射液靜脈給藥

丹參注射液給藥后（DSS3.5mg/kgBW，PAL0.5mg/kgBW，SalB0.48mg/kgBW）在血液和腦中均觀察到DSS，而未見PAL與SalB。腦中游離DSS的C-T曲線腦中游離DSS的PK參數(shù)ParametersEstimatest1/2/h0.64±0.20AUC0-∞/ng·h·mL-1369.39±114.77MRT0-∞/h0.64±0.18k1.36±0.27中國藥理學(xué)通報(bào)，2010，26(9),981-988.丹參藥動(dòng)學(xué)研究DSSPA實(shí)驗(yàn)二：丹參提取物灌胃給藥

丹參提取物給藥后（DSS，40mg/kg，PAL149mg/kg,SalB

50mg/kg

）在大鼠血液和腦透析液中均觀察到DSS和PA未測得PAL，推測PA