微生物檢驗(yàn)技術(shù)第一章緒論

上課時間調(diào)整4-14周，星期一，7、8節(jié)4-10周，星期三，9、10、11節(jié)第6周國慶放假1整理課件微生物檢驗(yàn)技術(shù)緒論2整理課件

廈門檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心

/Article_Index.asp

機(jī)構(gòu)設(shè)置:

/jgsz.asp儀器設(shè)備:/yqsb.asp3整理課件

廈門檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心

機(jī)構(gòu)設(shè)置

/jgsz.asp4整理課件食品理化實(shí)驗(yàn)室

食品、動植物及其產(chǎn)品等的理化檢測項(xiàng)目：重金屬、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、食品添加劑、毒素及有害化學(xué)物質(zhì)、品質(zhì)分析、營養(yǎng)成分分析；飲用水質(zhì)檢測；輻照食品檢測；食品急性毒理，一次性衛(wèi)生用品毒理試驗(yàn)。/zxjj.asp《有害有毒物質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)》5整理課件微生物實(shí)驗(yàn)室

食品、農(nóng)產(chǎn)品、水產(chǎn)品、畜產(chǎn)品和化妝品等的微生物、生物毒素和轉(zhuǎn)基因成分的檢測，抗生素、獸藥殘留的生物學(xué)和生化方法的初篩檢測。/zxjj.asp《有害有毒物質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)》《微生物檢測技術(shù)》《微生物檢測技術(shù)》6整理課件動物檢驗(yàn)檢疫實(shí)驗(yàn)室進(jìn)出境動物及其產(chǎn)品傳染病、寄生蟲病的檢疫。應(yīng)用ELISA、PCR、熒光定量PCR、病毒細(xì)胞培養(yǎng)及中和試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散、血凝（抑制）試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合、病原菌分離鑒定等檢測技術(shù)，對各種動物傳染病和寄生蟲病病原進(jìn)行分離和鑒定；應(yīng)用ELISA方法對鹽酸克倫特羅、氯霉素、萊克多巴胺等獸藥殘留進(jìn)行檢測；應(yīng)用基因檢測技術(shù)對牛、羊等各種動物源性成分進(jìn)行檢測。/zxjj.asp《動物檢疫學(xué)》《微生物檢測技術(shù)》《有害有毒物質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)》7整理課件植物檢疫實(shí)驗(yàn)室進(jìn)出境植物及其植物產(chǎn)品等檢疫物的植物病原真菌、細(xì)菌、植物病毒、植物寄生線蟲，雜草和害蟲等有害生物的檢測鑒定；種子健康、萌發(fā)率、凈度、水分、雜質(zhì)等項(xiàng)目的檢驗(yàn)；土壤等植物栽培介質(zhì)的線蟲分離鑒定；木質(zhì)包裝材料材質(zhì)鑒定與線蟲分離鑒定；植物病蟲害診斷與防治技術(shù)指導(dǎo)等。/zxjj.asp《植物檢疫學(xué)》8整理課件儀器設(shè)備

/yqsb.asp化學(xué)分析儀器生命科學(xué)儀器電子電器檢測儀器9整理課件一、微生物檢測基礎(chǔ)1、微生物的定義是一群形體細(xì)小、結(jié)構(gòu)簡單、人肉眼看不見，必須借助于光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡放大幾百倍、幾千倍甚至幾萬倍才能看到的生物?；仡櫋段⑸飳W(xué)》10整理課件2、微生物的種類原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線菌、螺旋體、立克次氏體、支原體、衣原體；真核細(xì)胞型：酵母菌、霉菌、微藻類等；非細(xì)胞型：病毒、亞病毒（類病毒、擬病毒、朊病毒）。11整理課件3、病原微生物定義大部分微生物是有益的，只有小部分微生物是有害的，可以引起各種疫病，這部分微生物叫做病原微生物．感染人、動植物，導(dǎo)致疾病發(fā)生的有害微生物，稱之為病原微生物。12整理課件4、微生物對產(chǎn)品的污染對產(chǎn)品造成污染的微生物來源：土壤、空氣、水、人和動植物、生產(chǎn)原料、生產(chǎn)器械及包裝材料等。1）土壤：糧食蔬菜和水果等植物性食品是經(jīng)土壤培育出來的，與土壤接觸密切，最易受到土壤中微生物的污染。以細(xì)菌最多，其次是放線菌、霉菌與酵母菌。2）空氣：在空氣中，有時會出現(xiàn)一些病原微生物，如結(jié)核桿菌和金黃色葡萄球菌等病原菌，可通過污染的食品而引起感染?？諝鈳в形⑸锏耐寥?、塵埃、痰沫與唾液播散到食品上，可造成食品的嚴(yán)重污染。飛沫傳播病原13整理課件3）水：水是一種污染源，淡水中常見的微生物類群有：假單胞菌屬、無色桿菌屬、黃桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬等菌種。海水中主要是副溶血弧菌，是人類吃海產(chǎn)品而引起食物中毒的病原菌……水不僅是重要的污染源，而且還是食品被微生物污染的重要途徑。4）人與動植物：人與動植物體表、人與動物的消化道和上呼吸道均有一定種類的微生物群存在，該微生物如果污染了食品，常引起腐敗變質(zhì)。當(dāng)人與動物有致病微生物侵入機(jī)體而致病時，體內(nèi)的病原菌就會隨糞便和分泌物排出體外，如處理不當(dāng)，直接或間接污染食品，造成對人的危害……如：老鼠、蒼蠅、蟑螂等動物是攜帶和傳播微生物或病原菌的中間媒介。14整理課件5）產(chǎn)品原料及輔料：植物原料及輔料：果蔬加工產(chǎn)品，原料本身帶有微生物，而且加工過程中還會再次污染，加工制成產(chǎn)品中有可能帶有大量微生物；各種糧食和飼料上的微生物以曲霉屬、青霉屬和鐮孢霉屬的一些種為主，其中曲霉屬危害最大。動物原料及輔料：患病的畜禽的組織器官內(nèi)部可能有微生物存在，要實(shí)行屠宰前檢疫；屠宰、分割、加工、存儲和銷售過程中的每個環(huán)節(jié)，都有可能發(fā)生微生物污染。6）加工機(jī)械和設(shè)備、包裝材料…15整理課件陳化糧事件2006年12月15日，國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)出緊急通知，因?yàn)椴糠置襟w報道北京、天津等地相繼發(fā)現(xiàn)萬噸“陳化糧”，并稱這些“陳化糧”均是“東北米”。長期儲存的陳化糧中的油脂會發(fā)生氧化，產(chǎn)生對人體有害的醛、酮等物質(zhì)。儲存時間過長的陳化糧，會殘留一定量的農(nóng)藥，而且陳化糧會感染黃曲霉菌，繼而產(chǎn)生黃曲霉毒素，長期食用會致癌。

近年食品安全事件16整理課件5、微生物檢驗(yàn)的涵義微生物檢驗(yàn)是基于微生物學(xué)的基本理論，利用微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)，根據(jù)各類產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的要求，研究產(chǎn)品中微生物的種類、性質(zhì)、活動規(guī)律等，用以判斷產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的一門應(yīng)用技術(shù)。它是以技能操作為主的學(xué)科。各類產(chǎn)品從原料、加工、儲藏、運(yùn)輸、銷售等各個環(huán)節(jié)，都會受到環(huán)境中微生物的污染，不同來源的微生物可通過各種途徑污染暴露于環(huán)境中的各類產(chǎn)品，并在其中生長繁殖引之變質(zhì)，影響產(chǎn)品的特性，甚至產(chǎn)生毒素、造成食物中毒、疾病傳播等后果。因此，許多產(chǎn)品在生產(chǎn)、銷售或使用之前必須對其進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)。微生物學(xué)檢驗(yàn)是產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中的一個重要內(nèi)容，也是確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全、防止致病菌污染和疾病傳播的重要手段。什么是微生物檢驗(yàn)？17整理課件6、微生物檢驗(yàn)的意義1）是衡量動植物性產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是判定被檢產(chǎn)品能否食用的科學(xué)依據(jù)之一。2）通過微生物檢驗(yàn)，可以判斷產(chǎn)品加工環(huán)境及產(chǎn)品衛(wèi)生環(huán)境，能夠?qū)Ξa(chǎn)品被微生物污染的程度作出正確的評價，為各項(xiàng)衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù)，提供傳染病和人類、動物和食物中毒的防治措施。3）微生物檢驗(yàn)是以貫徹“預(yù)防為主”的衛(wèi)生方針，可以有效地防止或者減少食物中毒、人畜共患病的發(fā)生，保障人民的身體健康；同時，它對提高產(chǎn)品質(zhì)量，避免經(jīng)濟(jì)損失，保證出口等方面具有政治上和經(jīng)濟(jì)上的重要意義。18整理課件7、微生物檢驗(yàn)的基本任務(wù)(1)研究各類產(chǎn)品的樣品采集、運(yùn)送、保存以及預(yù)處理方法，提高檢出率。(2)根據(jù)各類產(chǎn)品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求，選擇適合不同產(chǎn)品、針對不同檢測目標(biāo)的最佳檢測方法，探討影響產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的有關(guān)微生物的檢測、鑒定程序以及相關(guān)質(zhì)量控制措施；利用微生物檢驗(yàn)技術(shù)，正確進(jìn)行各類樣品的檢驗(yàn)。(3)正確進(jìn)行影響產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量的有關(guān)微生物的快速檢測方法、自動化儀器的使用，并認(rèn)真進(jìn)行檢驗(yàn)結(jié)果的分析和試驗(yàn)方法的評價。(4)及時對檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析、處理，并及時準(zhǔn)確地進(jìn)行結(jié)果報告。(5)對影響產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量及人類健康的相關(guān)環(huán)境的微生物進(jìn)行調(diào)查、分析與質(zhì)量控制。19整理課件8、微生物檢驗(yàn)的范圍與對象微生物檢驗(yàn)<>范圍1.生產(chǎn)環(huán)境的檢驗(yàn)

車間用水、空氣、地面、墻壁等。2.各種產(chǎn)品的原、輔料檢驗(yàn)

包括食用動物、谷物、添加劑等一切原輔材料。3.各類產(chǎn)品加工、儲藏、銷售諸環(huán)節(jié)的檢驗(yàn)

包括食品從業(yè)人員的衛(wèi)生狀況檢驗(yàn)、加工工具、運(yùn)輸車輛、包裝材料的檢驗(yàn)等。4.產(chǎn)品的檢驗(yàn)

重要的是對出廠產(chǎn)品、可疑產(chǎn)品及食物中有毒食品的檢驗(yàn).20整理課件微生物檢驗(yàn)<>對象7類(1)食品(2)化妝品(3)藥品(4)一次性用品及其他生活用品(5)應(yīng)施檢疫的出口動物產(chǎn)品(6)環(huán)境(7)有關(guān)國際條約或其他法律、法規(guī)規(guī)定的強(qiáng)制性衛(wèi)生檢驗(yàn)的進(jìn)出口商品21整理課件(1)食品的微生物檢驗(yàn)對食物中的微生物進(jìn)行檢測，既是商檢機(jī)構(gòu)、產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)部門、衛(wèi)生防疫部門工作的需要，也是食品生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量控制、保證食品安全質(zhì)量的手段。我國衛(wèi)生部頒布的食品微生物指標(biāo)有菌落總數(shù)、大腸菌群和致病菌三項(xiàng)。22整理課件2005-2010年食品安全事件—33件■江蘇維維乳業(yè)有限公司在上海被查酵母菌數(shù)嚴(yán)重超標(biāo)05/08/18■“龍鳳”、“思念”速凍食品檢出致病菌

07/04/12■北京王致和豆腐乳被指保質(zhì)期內(nèi)發(fā)霉07/11/08■味全食品旗下奶粉被查出致病菌07/11/21■臺灣著名食品企業(yè)味全食品一批嬰兒配方奶粉檢出致病菌--阪崎腸桿菌

07/11/27微生物污染相關(guān)事件23整理課件2010年3月19日，調(diào)查負(fù)責(zé)人武漢工業(yè)學(xué)院教授何東平召開新聞發(fā)布會，建議政府相關(guān)部門加緊規(guī)范廢棄油脂收集工作，再次引起了人們對食品安全的擔(dān)憂。據(jù)報道，目前我國每年返回餐桌的地溝油有200至300萬噸。醫(yī)學(xué)研究稱地溝油中的黃曲霉素強(qiáng)烈致癌，毒過砒霜100倍。24整理課件(2)化妝品的微生物檢驗(yàn)微生物混入化妝品的途徑有：原料本身即帶有微生物；制造過程中混入；盛裝容器本身的污染；以及使用化妝品者的不良習(xí)慣造成。微生物指標(biāo)是化妝品等生活用品衛(wèi)生質(zhì)量合格與否的重要影響因素。目前我國對進(jìn)出口化妝品規(guī)定一律按《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》進(jìn)行檢驗(yàn)，它較以前的GB7918-87《化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》有明顯的改進(jìn)。對于化妝品中微生物的檢測，其一是檢驗(yàn)原料和產(chǎn)品中微生物數(shù)量是否達(dá)到執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)的要求，例如細(xì)菌總數(shù)測定、糞大腸菌群測定、綠膿桿菌測定、金黃色葡萄球菌測定等；其二是檢驗(yàn)用于化妝品和藥品中的防腐劑的防腐效能。25整理課件(3)藥品的微生物檢驗(yàn)藥品微生物檢測方法包括藥品無菌檢查、微生物限度檢查。在進(jìn)行藥品無菌檢查或微生物檢查時，應(yīng)采用藥典規(guī)定的某種方法進(jìn)行檢測，并確認(rèn)供試品所采用檢查方法和檢驗(yàn)條件下對微生物無抑菌作用或抑菌作用忽略不計(jì)，以保證藥品所污染的微生物能充分檢出。26整理課件(4)一次性用品及其他生活用品的微生物檢驗(yàn)一次性衛(wèi)生用品可按一次性使用衛(wèi)生用品標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)。檢測項(xiàng)目包括菌落總數(shù)、真菌總數(shù)、大腸菌群和致病菌的檢測。其他生活用品按照有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測。27整理課件(5)應(yīng)施檢疫的出口動物產(chǎn)品的微生物檢驗(yàn)依據(jù)我國各有關(guān)部門的職責(zé)劃分，由商檢機(jī)構(gòu)對所分管應(yīng)施檢疫的出口動物產(chǎn)品進(jìn)行檢疫，并簽發(fā)各種檢驗(yàn)及檢疫證書，以確保出口動物產(chǎn)品符合進(jìn)口國的檢疫要求，順利通關(guān)進(jìn)口。例如：羽絨羽毛作為動物產(chǎn)品，其中是否存在有害微生物，特別是能引起人畜共患傳染病的微生物，是人們關(guān)注的問題之一。自2001年，歐盟、美國和加拿大陸續(xù)要求對我國出口的羽絨制品進(jìn)行微生物檢測。當(dāng)時因微生物含量嚴(yán)重超標(biāo)，一段時間內(nèi)我國羽絨及其制品多次遭遇退貨，嚴(yán)重影響了國際出口。2004~2005年，禽流感疫情在全球范圍內(nèi)的愈演愈烈，在使全球家禽業(yè)遭受重創(chuàng)的同時，也波及到了禽類的直接衍生品――羽絨及其制品。在此情勢之下，我國很快對羽絨國家標(biāo)準(zhǔn)《羽絨羽毛》(GB/T17685―2003)和《羽絨羽毛檢驗(yàn)方法》(GB/T10288―2003)重新進(jìn)行了修訂，并將微生物檢測指標(biāo)引入其中，要求對嗜溫性需氧菌、糞鏈球菌、還原亞硫酸梭狀芽孢桿菌及沙門氏菌四大微生物進(jìn)行檢測。該標(biāo)準(zhǔn)已于2004年5月1日正式頒布實(shí)施。28整理課件(6)環(huán)境的微生物學(xué)檢測微生物對各類產(chǎn)品的污染以及對人畜的感染途徑是多方面的，其中通過空氣、水、人和動物、用具及雜物等環(huán)境因素的污染不容忽視。①空氣潔凈度的微生物檢測對公共場所的衛(wèi)生檢測可按《公共場所監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》GB/T17220-1998)現(xiàn)場采樣,檢驗(yàn)方法按《公共場所衛(wèi)生監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》進(jìn)行，依據(jù)《公共場所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行評價。公共場所的微生物學(xué)檢測主要檢測空氣中細(xì)菌總數(shù)。對食品、制藥、醫(yī)院的潔凈室、車間、室內(nèi)環(huán)境等空氣微生物的檢測可按相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)和某些致病菌的檢測。29整理課件(7)有關(guān)國際條約或其他法律、法規(guī)規(guī)定的強(qiáng)制性衛(wèi)生檢驗(yàn)的進(jìn)出口商品，應(yīng)按要求進(jìn)行相關(guān)微生物檢驗(yàn)。

②水質(zhì)的微生物檢測目前世界各國對于飲用水的衛(wèi)生質(zhì)量，除采用大腸菌群等指標(biāo)外，一般還采用細(xì)菌總數(shù)這個指標(biāo)。大腸菌群是指示水質(zhì)受糞便污染的指示菌，細(xì)菌總數(shù)指示水體受污染物污染的情況。我國GB5749-85《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定生活飲用水細(xì)菌總數(shù)每毫升不得超過100個，大腸菌群每升不得超過3個。30整理課件二、微生物檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展趨勢微生物檢驗(yàn)常規(guī)技術(shù)包括顯微技術(shù)，染色技術(shù)，滅菌和消毒技術(shù)，培養(yǎng)基制備技術(shù)，接種，分離純化和培養(yǎng)技術(shù)，無菌取樣技術(shù)，微生物的計(jì)數(shù)技術(shù)，菌種保藏技術(shù)，微生物常規(guī)鑒定技術(shù)等。傳統(tǒng)常規(guī)的微生物檢測方法檢測時限長，過程煩瑣。隨著食品、藥品及其他工業(yè)的發(fā)展以及人們對各類產(chǎn)品質(zhì)量安全的重視，傳統(tǒng)檢測方法已經(jīng)遠(yuǎn)不能滿足微生物檢測的需要，迫切需求靈敏度更高、特異性更強(qiáng)、簡便快捷的微生物檢測技術(shù)和方法，建立和完善適應(yīng)國際貿(mào)易的各類產(chǎn)品微生物檢測技術(shù)和體系迫在眉睫。31整理課件傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)顯微技術(shù)是微生物檢驗(yàn)技術(shù)中最常用的技術(shù)之一，也是應(yīng)用比較早的技術(shù)。實(shí)驗(yàn)室中常用的有普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡和電子顯微鏡等。利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常見的微生物計(jì)總數(shù)的方法。32整理課件傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)革蘭氏染色技術(shù)：是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。培養(yǎng)計(jì)數(shù)法：平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后,其中的微生物充分分散成單個細(xì)胞,取一定量的稀釋樣液涂在平板上,經(jīng)過培養(yǎng),由每個單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落,即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。菌落形成單位cfu，colony-formingunit。33整理課件現(xiàn)代微生物檢測技術(shù)近幾年世界各國的許多機(jī)構(gòu)和學(xué)者都致力于快速、簡便、特異、敏感、低耗且實(shí)用的檢測技術(shù)和方法的研究。對微生物的檢測，其研究的技術(shù)手段產(chǎn)生了很大的變革：微生物檢測技術(shù)已由培養(yǎng)水平逐步向分子水平邁進(jìn)；近年來興起的基因芯片技術(shù)及自動微生物檢測系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測方法；氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用等現(xiàn)代儀器分析法也應(yīng)用于微生物檢測中。34整理課件現(xiàn)代微生物檢測技術(shù)<>特點(diǎn)(一)現(xiàn)代生物檢測技術(shù)更加注重快速、準(zhǔn)確、實(shí)用，微生物檢測儀器是檢測技術(shù)的重要載體。其實(shí)用性主要體現(xiàn)在微型化、低能耗化、功能專用化、一體化和成像化。(二)現(xiàn)代微生物檢測技術(shù)與生物技術(shù)成果相結(jié)合，比如核酸探針技術(shù)、PCR技術(shù)、生物芯片技術(shù)等均在微生物檢驗(yàn)方面有廣泛的應(yīng)用。(三)大力發(fā)展在線無損的微生物檢測技術(shù)，因?yàn)楫a(chǎn)品生產(chǎn)是一種連續(xù)的過程，所以那種破壞性的或侵入性的微生物檢測手段將逐步被淘汰，而無損的可以進(jìn)行原位檢測的微生物檢測方法將受到歡迎，如生物傳感器等。35整理課件1.改進(jìn)的微生物培養(yǎng)法微生物培養(yǎng)技術(shù)是眾多檢測手段的基石。固體培養(yǎng)基的發(fā)明使微生物培養(yǎng)技術(shù)有了質(zhì)的飛躍，在此基礎(chǔ)上傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法在不斷的改進(jìn)中發(fā)展。主要表現(xiàn)在是通過在培養(yǎng)基中加入抑菌劑、指示劑、熒光物質(zhì)等，或經(jīng)預(yù)處理來縮短增菌時間，合并檢驗(yàn)步驟，使培養(yǎng)和鑒定一步完成，從而達(dá)到快速檢測的目的。如疏水網(wǎng)膜法(HGMF)：采用疏水網(wǎng)膜過濾樣品，將捕獲了被檢微生物的疏水網(wǎng)膜上傾入適當(dāng)?shù)沫傊?jīng)一定時間培養(yǎng)后即可計(jì)數(shù)。該法可用于酵母菌、霉菌的計(jì)數(shù)，也可進(jìn)行沙門氏菌、大腸桿菌(大腸菌群)的檢測，采用人工或機(jī)械計(jì)數(shù)都很方便。36整理課件直接熒光過濾膜技術(shù)(DEFT)：將樣品經(jīng)特殊濾膜過濾后，經(jīng)吖啶橙染色，利用紫外線顯微鏡來快速測定活菌數(shù)。葡萄糖苷酶熒光法：通過在培養(yǎng)基中加入指示劑、色素、熒光物質(zhì)，成為快速檢驗(yàn)大腸菌群的常用方法。37整理課件2.免疫學(xué)方法免疫學(xué)方法是以抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的方法。免疫方法的優(yōu)點(diǎn)是樣品在進(jìn)行選擇性增菌后，不需分離即可采用免疫技術(shù)進(jìn)行篩選。由于抗原和抗體的結(jié)合反應(yīng)特異性強(qiáng)，可在很短時間內(nèi)完成，再輔以免疫放大技術(shù)來鑒別細(xì)菌，使得免疫法具各了快速、靈敏的特點(diǎn)。樣品經(jīng)增菌后可在較短的時問內(nèi)達(dá)到檢出度。通常根據(jù)檢測技術(shù)的不同可分為免疫擴(kuò)散反應(yīng)、凝集反應(yīng)、免疫磁珠法、免疫熒光反應(yīng)、酶免疫測定(ELISA)等方法。38整理課件例如常見的污染食品病原細(xì)菌，沙門菌、李斯特菌、大腸桿菌、肉毒梭菌等都可以通過免疫學(xué)方法進(jìn)行分析和檢測。免疫法不但經(jīng)濟(jì)實(shí)用，重現(xiàn)性、靈敏度和特異性也較強(qiáng)。特別是近幾年發(fā)展的免疫試劑不僅適用于防疫及衛(wèi)生技術(shù)檢測監(jiān)督部門，還可在企業(yè)團(tuán)體及日常家庭的衛(wèi)生檢測中使是一種非常有希望普及的快速檢測方法。39整理課件3.分子生物學(xué)方法隨著分子生物學(xué)和分子化學(xué)的飛速發(fā)展，對病原微生物的鑒定已不再局限于對它的外部形態(tài)結(jié)構(gòu)及生理特性等一般檢驗(yàn)上，而是從分子生物學(xué)水平上研究生物大分子，特別是核酸結(jié)構(gòu)及其組成部分。在此基礎(chǔ)上建立的眾多檢測技術(shù)中，核酸探針(nuclearacidprobe)和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)以其敏感、特異、簡便、快速的特點(diǎn)成為世人矚目的生物技術(shù)革命的新產(chǎn)物，業(yè)已逐步應(yīng)用于食源性病原菌的檢測。目前已可以用DNA探針檢測食品中的大腸桿菌、志賀菌、李斯特菌、金黃色葡萄球菌等。分子生物學(xué)法快速、靈敏、特異性強(qiáng)，適用于不常見的或新的病原微生物的檢測。但其成本較高，且要求較高的技術(shù)水平，大面積采用還有較大的難度。目前僅限于海關(guān)、商檢等國家級高等機(jī)構(gòu)及部門采用。40整理課件核酸探針技術(shù)將已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標(biāo)記，加入已變性的被檢DNA樣品中，在一定條件下即可與該樣品中有同源序列的DNA區(qū)段形成雜交雙鏈，從而達(dá)到鑒定樣品中DNA的目的，這種能認(rèn)識到特異性核苷酸序列有標(biāo)記的單鏈DNA分子核酸探針或基因探針。根據(jù)核酸探針中核苷酸成分的不同，可將其分成DNA探針或RNA探針。根據(jù)選用基因的不同分成兩種，一種探針能同微生物中全部DNA分子中的一部分發(fā)生反應(yīng)，它對某些菌屬、菌種、菌株有特異性；另一種探針只能限制性同微生物中某一基因組DNA發(fā)生雜交反應(yīng)，它對某種微生物中的一種菌株或僅對微生物中某一菌屬有特異性。41整理課件核酸探針檢測技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)是:①特異性；②敏感性。但探針檢測技術(shù)中也存在一定的問題，如檢測一種菌就需要制備一種探針；要達(dá)到檢測量還要對樣品進(jìn)行一定時間的培養(yǎng)；探針檢測是分析基因序列，對毒素污染的食品有時因樣品中不含產(chǎn)毒菌而無法檢測。42整理課件4.氣相色譜法微生物細(xì)胞的氣相色譜分析是研究微生物分類的有效方法之一。大量分析檢測各種常見細(xì)菌、酵母菌、霉菌和其他微生物的組成成分,并建立微生物組分標(biāo)準(zhǔn)色譜圖文庫，儲存在計(jì)算機(jī)中，然后將待鑒定微生物的組分色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)圖譜相比較，可迅速鑒定其種類。氣相色譜法具有高選擇性、高分離效能、高靈敏度、高速度、應(yīng)用范圍廣的特點(diǎn)，在快速診斷傳染病方面是很有發(fā)展前途的方法，目前對某些疾病的診斷已經(jīng)應(yīng)用于臨床，并逐漸向自動化方向發(fā)展。43整理課件氣相色譜法測定細(xì)胞的化學(xué)成分:鑒定細(xì)菌測定代謝產(chǎn)物：鑒定細(xì)菌測定代謝產(chǎn)物：進(jìn)行傳染病的快速診斷其原理是將微生物細(xì)胞經(jīng)過水解，甲醇分解，提取，以及硅烷化、甲基化等衍生化處理后，使之分離盡可能多的化學(xué)組分，供氣相色譜進(jìn)樣分析。不同微生物所得到的色譜圖中，通常大多數(shù)峰是有共性的，只有少數(shù)峰具有特征性，可被用來進(jìn)行微生物鑒定。44整理課件5.基因芯片技術(shù)基因芯片：采用微加工和微電子技術(shù)將大量的人工設(shè)計(jì)好的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纖維膜等載體而得到的一種信息檢測芯片，其本質(zhì)名稱是脫氧核糖核酸微陣列（DNA微陣列）?；蛐酒墓ぷ髟恚豪脡A基配對的原則來檢測樣品的基因。將各種基因寡核苷酸點(diǎn)樣于芯片表面，將待測微生物樣品的DNA或RNA通過PCR或RT-PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入標(biāo)記分子后，與位于芯片上的已知堿基順序的DNA探針雜交，再通過掃描系統(tǒng)檢測探針分子雜交信號強(qiáng)度，然后以計(jì)算機(jī)技術(shù)對信號進(jìn)行綜合分析后，即可獲得樣品中大量基因序列及表達(dá)信息，以對之做出定性及定量的研究，來確定檢測樣品是否存在某些特定微生物。45整理課件目前，在世界各國的積極推動下，基因芯片的應(yīng)用從最初的醫(yī)學(xué)領(lǐng)域向其他方面擴(kuò)展。近幾年來，基因芯片的應(yīng)用也開始在食品工業(yè)中嶄露頭角，許多學(xué)者利用基因芯片對食品中的常見致病菌進(jìn)行了分析、檢測，不僅敏感度高于傳統(tǒng)方法，且操作簡單，重復(fù)性好；基因芯片技術(shù)也是近幾年運(yùn)用的病毒檢測新技術(shù)之一，現(xiàn)在世界各國都在積極地進(jìn)行能夠?qū)θ祟悩?gòu)成危害的各種病毒快速檢測芯片的研究；應(yīng)用基因芯片可對病人、出入境食品、動植物及其產(chǎn)品進(jìn)行檢測。隨著社會的發(fā)展和科技進(jìn)步，特別是近年來興起的基因芯片技術(shù)及自動微生物檢測系統(tǒng)，將從根本上改變微生物的檢測方法。46整理課件儀器法的應(yīng)用原理是當(dāng)細(xì)菌生產(chǎn)繁殖時,將蛋白質(zhì)、糖類等大分子物質(zhì)分解成氨基酸、有機(jī)酸等帶電荷的小分子物質(zhì),改變培養(yǎng)液的導(dǎo)電度,這樣,測量電阻和導(dǎo)電度的變化,就可推算出樣品原來的含菌數(shù)。Bactometer系統(tǒng)是利用電阻抗、電容抗或總阻抗等三種參數(shù)的自動微生物監(jiān)測系統(tǒng)。它能快速測定樣品中細(xì)菌的污染程度,從而快速提供品質(zhì)控制的信息。1、電阻電導(dǎo)檢測器47整理課件應(yīng)用電阻抗技術(shù)的全自動微生物監(jiān)測系統(tǒng)——BACTOMETER用于快速檢測食品、化妝品、藥品等的細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、酵母菌/霉菌、乳酸菌數(shù)…

48整理課件2.微型全自動熒光酶標(biāo)分析儀(Mini-VIDAS)主要應(yīng)用酶聯(lián)熒光技術(shù)(ELFA),ELFA技術(shù)具有優(yōu)異的敏感性和特異性?？蓹z驗(yàn)李斯特氏菌、單增李斯特氏菌、沙門氏菌、葡萄球菌腸毒素、空腸彎曲桿菌、大腸桿菌O157等。使用該儀器操作簡便,只需加1次樣品,按1次鍵,整個檢測過程都由儀器自動完成。49整理課件3.微生物的微型、自動化鑒定系統(tǒng)API系統(tǒng)：法國Bio-梅里埃公司生產(chǎn)，有20種不同的生化反應(yīng)，可鑒定700多種細(xì)菌，分不同系列，如20A—厭氧菌，20E—腸道菌，為長形卡片。Enterotube系統(tǒng)：美國羅氏公司生產(chǎn)，用一條有8-12個分隔小室的劃艇形塑料管制成，面上覆蓋膜。有15種生化反應(yīng)，專門鑒定腸道菌。Biolog系統(tǒng)：

96孔板型，美國安普公司生產(chǎn)，可自動化鑒定，可鑒定1140種細(xì)菌。BBL系統(tǒng)：BD公司專門為中小型微生物實(shí)驗(yàn)室以及科研機(jī)構(gòu)設(shè)計(jì)的經(jīng)濟(jì)型微生物鑒定系統(tǒng)。50整理課件細(xì)菌半自動鑒定系統(tǒng)API數(shù)值鑒定系統(tǒng)BBL鑒定系統(tǒng)Biolog鑒定系統(tǒng)程序：1、獲取輔助特征2、培養(yǎng)菌懸液加入生化板培養(yǎng)掃描鑒定打印結(jié)果51整理課件商品化鑒定系統(tǒng)：腸桿菌科及其他革蘭氏陰性菌：（API20E、Enterotube、Minitek、MicroID等）葡萄球菌及鏈球菌（APIStaph、API20S）厭氧菌：（API20A、Minitek）酵母菌：（API20C、Minitek、Uni-Yeast-Tck）其他（APICoryne、API20NE、APICampy等）52整理課件微生物快速自動鑒定系統(tǒng)美國Biolog公司致力于微生物鑒定領(lǐng)域新技術(shù)新產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)和銷售，是全球高新技術(shù)百強(qiáng)之一，其獨(dú)創(chuàng)的碳源利用方法已獲美國FDA認(rèn)可。Biolog鑒定系統(tǒng)可鑒定包括細(xì)菌、酵母和真菌在內(nèi)約2000種微生物，便于各領(lǐng)域的微生物實(shí)驗(yàn)室用于對微生物的鑒定；另外，Biolog的智能軟件和獨(dú)特的設(shè)計(jì)理念又使其特別適用于生態(tài)研究領(lǐng)域。53整理課件鑒定原理Biolog公司獨(dú)創(chuàng)的碳源利用方法，利用微生物對不同碳源代謝率的差異，針對每一類微生物篩選95種不同碳源，配合四唑類顯色物質(zhì)（如TTC、TV），固定于96孔板上（A1孔為陰性對照），接種菌懸液后培養(yǎng)一定時間，通過檢測微生物細(xì)胞利用不同碳源進(jìn)行新陳代謝過程中產(chǎn)生的氧化還原酶與顯色物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致的顏色變化（吸光度）以及由于微生物生長造成的濁度差異（濁度），與標(biāo)準(zhǔn)菌株數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，即可得出最終鑒定結(jié)果。54整理課件4.全自動微生物分析系統(tǒng)(Vitek-AMS)該系統(tǒng)為用于微生物鑒定及藥敏試驗(yàn)的設(shè)備,能同時進(jìn)行60~480個樣品分析。其原理是將微生物數(shù)碼鑒定的方法與計(jì)算機(jī)技術(shù)結(jié)合起來,實(shí)現(xiàn)了從讀數(shù)、編碼、解碼、打印結(jié)果的鑒定全過程的自動化。根據(jù)不同的試卡,可以鑒定各種革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、厭氧菌、奈瑟菌、酵母菌、芽孢桿菌等300余個種(屬)的微生物,還可以進(jìn)行臨床細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)。55整理課件其特點(diǎn):①鑒定細(xì)菌類型廣。②具有最大的準(zhǔn)確性。國內(nèi)外報道,鑒定最常見的細(xì)菌準(zhǔn)確率98.4%。③鑒定時間短。鑒定細(xì)菌需6~10h,鑒定真菌需16~18h。④高度可重復(fù)性。AMS內(nèi)的記憶系統(tǒng),采用計(jì)算機(jī)處理,可隨時補(bǔ)充最新的鑒定程序軟件。⑤儀器操作方便,不需要專業(yè)人員,只要有一定的英語基礎(chǔ)即可短期完成培訓(xùn)。56整理課件全自動微生物鑒定/藥敏分析系統(tǒng)VITEK32/60/120法國biosMerieumx(生物梅里埃）生產(chǎn)的全自動微生物分析儀的一個系列，包括：VITEK－32、VITEK－60、VITEK－120等。

工作原理自動生化鑒定VITEK試卡的反應(yīng)池內(nèi)含風(fēng)干底物。試卡由標(biāo)準(zhǔn)濃度菌液充填，然后放入測試槽內(nèi)，讀取器每小時量度卡片內(nèi)樣本在培養(yǎng)介質(zhì)內(nèi)生長變化值，直至最后結(jié)果打印出來。動態(tài)學(xué)方法：每小時自動檢測每張卡片的反應(yīng)情況，與數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，達(dá)到系統(tǒng)預(yù)設(shè)的閾值時，自動報告結(jié)果。57整理課件VITEK試卡由30個光化學(xué)反應(yīng)微孔組成,每個微孔中含有用于鑒定或其他實(shí)驗(yàn)所需的底物/藥物。然后通過培養(yǎng)后儀器對顯色反應(yīng)進(jìn)行判斷，利用數(shù)值法進(jìn)行判定。根據(jù)需要鑒定的微生物的種類的不同，設(shè)計(jì)了不同的鑒定卡片，比如革蘭氏陰性菌卡，革蘭氏陽性菌卡，酵母菌卡等。58整理課件4.ATP生物發(fā)光法ATP廣泛存在于各種活的生物體中,活的菌體中也有ATP,細(xì)菌死亡后,在細(xì)胞內(nèi)酶的作用下,ATP將很快被分解。因此,通過測定樣品的ATP濃度,即可推算出活菌數(shù)。ATP生物發(fā)光法要求樣品中細(xì)菌濃度最低不少于1000個/mL,但這種靈敏度有時達(dá)不到衛(wèi)生學(xué)要求。ATP生物發(fā)光法具有簡便、靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn),小型化的測試儀器便于隨身攜帶,非常適合現(xiàn)場衛(wèi)生監(jiān)測。59整理課件5.微熱量計(jì)技術(shù)微熱量計(jì)技術(shù)是通過測定細(xì)菌生長時熱量的變化進(jìn)行細(xì)菌的檢出和鑒別。微生物在生長過程中產(chǎn)生熱量,用微量熱計(jì)測量產(chǎn)熱量等數(shù)據(jù),均存儲于計(jì)算機(jī)中,經(jīng)過適當(dāng)信號上的數(shù)字模擬界面,在記錄器上繪制成以產(chǎn)熱量對比時間組成的熱曲線圖。根據(jù)這些實(shí)驗(yàn)所得的熱曲線圖和已知細(xì)菌熱曲線圖直觀比較,即對細(xì)菌進(jìn)行鑒別。60整理課件6.快速、自動化微生物分析儀器（1）通用儀器：氣相色譜儀及高壓液相色譜儀（尤其適用于厭氧菌，分析脂肪酸和醇類）、質(zhì)譜儀等。（2）專用儀器：藥敏自動測定儀、生物發(fā)光測量儀、自動微生物檢測儀、微生物菌落自動識別計(jì)數(shù)儀、微生物傳感器等。（3）生物芯片儀：包括DNA和蛋白質(zhì)芯片儀。（4）免疫學(xué)方法：免疫檢測試劑盒、酶標(biāo)儀。61整理課件三、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量管理微生物檢驗(yàn)是疾病控制機(jī)構(gòu)、產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督管理部門、檢測機(jī)構(gòu)、產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)等質(zhì)量控制中心的重要檢測項(xiàng)目，是疾病防治、衛(wèi)生監(jiān)測、產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量保證等不可缺少的依據(jù)和手段。隨著社會的發(fā)展以及人們對各類產(chǎn)品質(zhì)量安全的重視，對檢驗(yàn)工作的質(zhì)量和效率的要求越來越高，因此，對微生物檢驗(yàn)實(shí)行全面質(zhì)量管理和控制是必需的。62整理課件