免疫檢測技術(shù)第2章 抗原抗體反應(yīng)

(免疫檢測技術(shù)）第2章抗原抗體反應(yīng)

第一節(jié)抗原抗體反應(yīng)的原理

一、抗原抗體結(jié)合力

二、抗原抗體的親和性和親和力

三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體第二節(jié)抗原抗體反應(yīng)的特點一、特異性二、可逆性三、比例性四、階段性第三節(jié)影響抗原抗體反應(yīng)的因素

一、反應(yīng)物自身因素

二、環(huán)境因素第四節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)的類型思考題小結(jié)第一節(jié)抗原抗體反應(yīng)的原理

抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。物質(zhì)基礎(chǔ):

抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補結(jié)合抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合抗原抗體之間的結(jié)合力親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體靜電引力（electrostaticforces）范德華引力:作用最小（vanderWaalsinteractions）氫鍵:最具特異性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）

抗原抗體結(jié)合力示意圖一、抗原抗體結(jié)合力抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應(yīng)的抗原決定簇之間相適應(yīng)而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結(jié)合力親和力(affinity)抗原抗體親和力示意圖二、抗原抗體的親和力和親合力抗體結(jié)合部位與抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度親合力(avidity)抗原抗體親合力示意圖

可見反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物

(疏水膠體)電解質(zhì)

抗原(親水膠體)

抗體(親水膠體)

+三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體第二節(jié)抗原抗體反應(yīng)的特點特異性可逆性比例性階段性特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖分子基礎(chǔ):抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補性一、特異性兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)交叉反應(yīng)（crossreactions）抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖二、可逆性可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素：抗體對相應(yīng)抗原的親合力－親合力越高，結(jié)合越牢固，越不易解離環(huán)境因素對復(fù)合物的影響－pH、離子強(qiáng)度

前帶(prezone)：抗體過量后帶(postzone)：抗原過量等價帶(equivalencezone)：

抗原抗體比例合適

抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系三、比例性第一階段：特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，不可見第二階段：反應(yīng)可見階段，反應(yīng)慢，出現(xiàn)凝集、沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象四、階段性第三節(jié)影響抗原抗體反應(yīng)的因素抗原、抗體反應(yīng)物的自身因素環(huán)境因素一、反應(yīng)物自身因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價抗體效價/滴度（titer）:實驗組和陰性對照組光吸收比值≥2.0時最大的血清稀釋倍數(shù)。電解質(zhì):生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6～pH9溫度:15℃～40℃，37℃最適二、環(huán)境因素反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗同上抗球蛋白試驗同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補體參與的反應(yīng)補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結(jié)合試驗同上第四節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)的類型反應(yīng)類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性標(biāo)記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強(qiáng)度酶免疫技術(shù)檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測發(fā)光強(qiáng)度金免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀按實際用途分為:①免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistrytechnique,IHCT)②免疫測定(immunoassay)按檢測現(xiàn)象分為:

①放射免疫技術(shù)②熒光免疫技術(shù)③酶免疫技術(shù)④化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)⑤金免疫技術(shù)按測定反應(yīng)體系的物理狀態(tài)分為:

①均相免疫測定(homogenousimmunoassay）②非均相免疫測定(heterogenousimmunoassay)

標(biāo)記免疫技術(shù)：用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標(biāo)記抗原或抗體，進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)后，通過檢測標(biāo)記物對抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量分析1．什么是抗原抗體反應(yīng)？抗原抗體反應(yīng)的原理是什么？2．抗原抗體的結(jié)合力有哪些？3．抗原抗體反應(yīng)有哪些特點？4．如何理解抗原抗體反應(yīng)的特異性和交叉反應(yīng)？5．什么是抗原抗體反應(yīng)的可逆性？有何應(yīng)用？6．如何理解抗原抗體反應(yīng)的親和力和親合力？7．抗原抗體反應(yīng)體系中為何要確定抗原、抗體的最適比例？8．抗原抗體反應(yīng)有哪些影響因素？9．基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測技術(shù)有哪些？10．什么是標(biāo)記免疫技術(shù)？標(biāo)記免疫技術(shù)有哪些類型？思考題小結(jié)

抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)?？乖贵w之間的結(jié)合力涉及靜電引力、范德華引力、氫鍵和疏水作用力。抗原抗體反應(yīng)的特點是特異性、可逆性、比例性和階段性。影響抗原抗體反應(yīng)的因素包括反應(yīng)物的自身因素和環(huán)境因素。免疫學(xué)檢測技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，免疫學(xué)技術(shù)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補體參與的反應(yīng)、中和反應(yīng)和標(biāo)記免疫反應(yīng)五種類型。凝集反應(yīng)（agglutinationtest）【??glu:tin'ei??n】

一種血清學(xué)反應(yīng)。顆粒性抗原（完整的病原微生物或紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有電介質(zhì)存在的條件下，經(jīng)過一定時間，出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊。參與凝集反應(yīng)的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。

可分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)兩類。直接凝集反應(yīng)

顆粒狀抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。玻片法是一種定性試驗方法?？捎靡阎贵w來檢測未知抗原。若鑒定新分離的菌種時，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與其混勻。數(shù)分種后，如出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，為陽性反應(yīng)。該法簡便快速，除鑒定菌種外，尚可用于菌種分型、測定人類紅細(xì)胞的ABO血型等。試管法是一種定量試驗的經(jīng)典方法?？捎靡阎乖瓉頇z測受檢血清中有無某抗體及抗體的含量。用來協(xié)助臨床診斷或供流行病學(xué)調(diào)查研究。操作時，將待檢血清用生理鹽水連續(xù)成倍稀釋，然后加入等量抗原，最高稀釋度仍有凝集現(xiàn)象者，為血清的效價，也稱滴度，以表示血清中抗體的相對含量。診斷傷寒、副傷寒病的肥達(dá)氏反應(yīng)（Widaltest）、布氏病的瑞特氏反應(yīng)（Wrighttest）均屬定量凝集反應(yīng)。間按凝集反應(yīng)將可溶性抗原（或抗體）先吸附于一種與免疫無關(guān)的、一定大小的顆粒狀載體的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用。在有電介質(zhì)存在的適宜條件下，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng)。用做載體的微球可用天然的微粒性物質(zhì)，如人（O型）和動物（綿羊、家兔等）的紅細(xì)胞、活性炭顆?；蚬杷徜X顆粒等；也可用人工合成或天然高分子材料制成，如聚苯乙烯膠乳微球等。由于載體顆粒增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積，當(dāng)顆粒上的抗原與微量抗體結(jié)合后，就足以出現(xiàn)